潰瘍性結(jié)腸炎患者血清IL-23、IL-17水平變化與脾虛濕熱證的相關(guān)性分析

楊 芳 葛桂萍 曹紅艷 喻海中

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南通市中醫(yī)院,南通,226000)

潰瘍性結(jié)腸炎患者血清IL-23、IL-17水平變化與脾虛濕熱證的相關(guān)性分析

楊 芳 葛桂萍 曹紅艷 喻海中

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南通市中醫(yī)院,南通,226000)

目的:觀察細(xì)胞因子IL-23/IL-17在脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型患者中的表達(dá),探討其與脾虛濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎的關(guān)系。方法:選取2014年7月至2016年3月南通市中醫(yī)院收治的潰瘍性結(jié)腸炎患者60例,用ELLSA法檢測30例脾熱濕熱型、30例非脾虛濕熱型患者、20例健康人IL-23及IL-17水平,對所有受試對象進(jìn)行脾虛濕熱證型評分,分析IL-23及IL-17與脾虛濕熱證的相關(guān)性。結(jié)果:脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎組血清IL-23、IL-17水平明顯升高,與健康者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型之間比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意(P>0.05);輕、中、重度潰瘍性結(jié)腸炎患者血清IL-17、1L-23組間水平較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:IL-23、IL-17與潰瘍性結(jié)腸炎患者脾虛濕熱證程度呈正相關(guān)。

潰瘍性結(jié)腸炎;脾虛濕熱;IL-23;IL-17

潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC),是一種臨床上非常常見的慢性非特異性腸道炎性反應(yīng),在我國的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。目前其發(fā)病機(jī)制仍不明確;近年來,隨著IL-23/IL-17通路的闡明,潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制有了深入研究。目前研究已證明,IL-23/IL-17通路可能是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的重要免疫應(yīng)答通路,它在慢性腸道炎性反應(yīng)中可能處于重要地位[1]。我們通過長期的臨床觀察發(fā)現(xiàn),脾虛濕熱證在臨床中較其他證型更多見,本課題旨在通過觀察UC臨床常見的脾虛濕熱證患者血清IL-17、IL-23水平的測定,為活動期UC的診斷及脾虛濕熱UC患者的辯、病情評估及未來中醫(yī)藥治療提供可靠的客觀理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年7月至2016年3月南通市中醫(yī)院收治的住院患者中診斷為活動期UC患者60例,其中30例脾虛濕熱證UC患者(脾虛濕熱組),30例非脾虛濕熱證UC患者(非脾虛濕熱組),脾虛濕熱組患者中男17例,女13例,年齡18～65歲,平均年齡(45.52±14.36)歲;病程0.5～30年,平均病程(8.17±9.36)年;30例非脾虛濕熱組患者中,男15例,女15例;年齡18～64歲,平均年齡(43.56±14.89)歲;病程0.5～30年,平均病程(5.65±6.85)年。此外,選擇本院健康體檢者20例為正常對照組(健康組),其中男10例,女10例;年齡18～65歲,平均年齡(44.25±15.31)歲。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,脾虛濕熱組、非脾虛濕熱組、健康組在年齡、性別等方面比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)采用《中國炎性反應(yīng)性腸病診斷治療規(guī)范的共識意見》(2007年山東濟(jì)南會議),確定潰瘍性結(jié)腸炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照國家標(biāo)準(zhǔn)《中醫(yī)病證治法術(shù)語》制定,大瘕瀉之脾虛濕熱證:腹痛、腹脹、便中夾膿血,肛門灼熱或有墜脹感,里急后重、身熱、納呆、神疲、乏力、面色少華,舌質(zhì)紅胖,舌苔黃滑、脈儒數(shù),其中主癥:大便夾有膿血伴腹痛腹脹,納呆,神疲乏力、舌質(zhì)紅胖舌苔黃滑,次證:肛門灼熱或墜脹感,里急后重、面色少華,脈儒數(shù)。潰瘍性結(jié)腸炎疾病分度:輕度:患者每日腹瀉4次以下,便血輕或無,無發(fā)熱、脈搏加快或貧血,紅細(xì)胞沉降率正常;中度:介于輕度和重度之間;重度:腹瀉6次/d以上,伴明顯黏液血便,體溫>37.5 ℃,脈搏>90次/min,血紅蛋白(Hb)<100 g/L,紅細(xì)胞沉降率>30 mm/h。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 半年之內(nèi)做過腸鏡,腸鏡、病理及中醫(yī)證型符合上述中西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 病情程度為緩解期患者;細(xì)菌性痢疾、阿米巴痢疾、偽膜性腸炎、腸結(jié)核等感染性結(jié)腸炎;克羅恩病患者;缺血性腸炎、放射性腸炎患者;合并嚴(yán)重其他系統(tǒng)疾病患者。

1.5 剔除標(biāo)準(zhǔn) 不愿意配合此項臨床研究的患者。

1.6 觀察指標(biāo) 脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型患者血清IL-17、1L-23水平;潰瘍性結(jié)腸炎患者疾病分級與血清IL-17、IL-23的關(guān)系;脾虛濕熱證評分方法每個主癥記2分,每個次癥記1分。最高分12分,最低分4分。其余組最高分4分,最低分0分。所有潰瘍性結(jié)腸炎患者在入院第2天抽取清晨空腹肘靜脈血3 mL,對照組(體檢健康者)在體檢時抽取空腹肘靜脈血3 mL,由南通市中醫(yī)院化驗室進(jìn)行4 000 r/min離心,分離血清后于統(tǒng)一于-80 ℃冰箱貯存并統(tǒng)一檢測。采用雙抗體夾心(ELISA)法,檢測程序按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 血清IL-17,IL-23比較 脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型患者血清IL-17、1L-23水平較健康組明顯升高(P<0.05),脾虛濕熱型和非脾虛濕熱型之間比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意(P>0.05)。

表1 不同證型患者血清IL-17、1L-23水平

注:與健康人比較*P<0.05,**P<0.05。

2.2 潰瘍性結(jié)腸炎患者疾病分級與血清IL-17、IL-23的關(guān)系 輕、中、重度潰瘍性結(jié)腸炎患者血清IL-17、1L-23組間水平較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 輕、中、重度患者血清IL-17、IL-23水平

注:與輕度患者比較,*P<0.05,**P<0.05。

2.3 IL-17、IL-23與脾虛濕熱證評分值的相關(guān)性 脾虛濕熱型評分與IL-17、IL-23均呈正相關(guān)。見表3。

表3 IL-17、IL-23與脾虛濕熱證評分值的相關(guān)性

3 討論

中醫(yī)理論根據(jù)潰瘍性結(jié)腸炎的臨床表現(xiàn),可歸于“泄瀉、下利、痢疾、腸癖”等范疇?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》稱為“濡泄”“洞泄”“注下”“后泄”“鶩溏”“飧泄”等,《諸病源侯論·痢病諸侯》中有赤白痢、血痢、膿血痢、熱痢等名稱;《備急千金藥方·熱痢》指出“大凡痢有四種,謂冷、熱、疳、蠱:冷則白,熱則赤,疳則赤白相雜……,蠱則純痢瘀血”,并舉有治赤白滯下方;《外臺秘要·水谷痢》對痢之分型更多,列有治痢方劑170余首,其中重下方6首。該病的病因病機(jī)主要為飲食不節(jié)或者外感濕熱之邪損傷脾胃,脾虛則運化失司,水濕內(nèi)停,日久化熱,濕熱下注腸道,致腸道傳導(dǎo)失司,脂絡(luò)受傷,氣滯血瘀,而致血敗肉腐成膿而發(fā)生此病,可見脾虛是發(fā)病的根本,濕熱是標(biāo),正如張景岳所云“凡痢疾,病在廣腸最下端,而其病變不在廣腸而在脾也,揭示了UC脾虛濕熱證的本質(zhì)。

目前研究發(fā)現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病與遺傳、腸黏膜屏障功能異常、腸黏膜免疫失調(diào)、腸道細(xì)菌紊亂等等多種機(jī)制有關(guān),雖然致病的始動因素尚未確定,但持續(xù)存在的腸黏膜免疫失調(diào)仍然是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的關(guān)鍵。隨著對潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制的不斷深入,各種炎性反應(yīng)細(xì)胞因子在UC的發(fā)病過程中起著重要作用,已有研究表明[3-4]認(rèn)為IL-23/IL-17炎性反應(yīng)軸IL-23/IL-17軸在腸道炎性反應(yīng)中發(fā)揮重要。IL-23主要是由IL-12p40和IL-23p19,2個亞單位組成,其主要是由被激活的單核-巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞所分泌。IL-23通過結(jié)合細(xì)胞膜表面分泌的IL-23受體復(fù)合物,從而刺激細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)系統(tǒng),進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞激活。IL-23在CD4+T等免疫細(xì)胞應(yīng)答中起關(guān)鍵作用,其能刺激炎性反應(yīng)細(xì)胞向病變部位聚集,從而誘導(dǎo)炎性反應(yīng)肉芽腫形成。因此,近年來研究發(fā)現(xiàn),IL-23在UC的發(fā)病中扮演了重要角色,在UC的發(fā)病中有著積極的免疫調(diào)節(jié)作用,這種作用是通過促進(jìn)IL-17的分泌發(fā)揮的,IL-23是一種強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)因子和刺激因子,它可以誘導(dǎo)記憶型的Th17細(xì)胞分泌大量IL-17。現(xiàn)階段有研究證實,潰瘍性結(jié)腸炎患者腸黏膜中IL-23含量較正常組對比,其含量明顯升高[5-6]。隨著潰瘍性結(jié)腸炎疾病的進(jìn)展,IL-23/IL-17免疫通路逐漸失調(diào),自身組織和抗原的免疫耐受逐漸破壞,最終誘發(fā)了自身免疫性疾病的發(fā)生。

IL-17主要是由Th17細(xì)胞誘導(dǎo)、基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的一種可溶性炎性反應(yīng)細(xì)胞因子,能刺激內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞產(chǎn)生粒細(xì)胞集落刺激因子、IL-8、IL-6和PGE2等,并能促進(jìn)血液中中性粒細(xì)胞發(fā)育成熟。有研究發(fā)現(xiàn),潰瘍性結(jié)腸炎患者血清IL-17的濃度水平與其病情呈現(xiàn)正相關(guān),重度患者IL-17含量高于中度患者,中度患者IL-17含量又高于輕度患者,說明IL-17的表達(dá)水平與潰瘍性結(jié)腸炎的炎性反應(yīng)程度及疾病進(jìn)展密切相關(guān)。潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸組織中IL-17表達(dá)明顯增高,說明局部IL-17聚集,從而誘發(fā)了潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生[7-10],由此推斷,阻斷IL-17分泌可能成為治療UC的一個新手段。其致病機(jī)制可能為IL-17通過刺激上皮細(xì)胞盒抗原遞呈細(xì)胞產(chǎn)生TNF、IL-6、IL-8、IL-1等炎性反應(yīng)因子,進(jìn)而募集并激活大量中性粒細(xì)胞,大量的炎性反應(yīng)因子遷移到結(jié)腸炎性反應(yīng)部位而致潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生。

本次試驗研究表明,UC組和健康對照組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);UC輕、中、重度患者血清IL-23、IL-17表達(dá)水平組兼比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義,在脾虛濕熱型與非脾虛濕熱型UC組間,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),這與南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院所研究的濕熱型型和非濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎組血清IL-17水平明顯升高,與對照組比由統(tǒng)計學(xué)意義研究結(jié)果不一致。我們分析,第一,可能與潰瘍性結(jié)腸炎患者脾虛濕熱證及非脾虛濕熱證患者的樣本量過少有關(guān),第二,潰瘍性結(jié)腸炎患者本身疾病錯綜復(fù)雜,統(tǒng)一時期本身存在脾虛濕熱,同時也存在瘀血阻絡(luò)的證型,單一證型難以概括,同一患者不同時期表現(xiàn)的中醫(yī)證型不同,早期可能為濕熱下注,中期可能為脾虛濕熱,后期發(fā)展成為脾腎陽虛,而且早、中、晚3期界限難以確定,單一的一個證型難以概括。但是Spesrman檢驗說明了IL-23/IL-17與脾虛濕熱證呈現(xiàn)正相關(guān),說明IL-23/IL-17與UC的疾病進(jìn)程密切相關(guān),與潰瘍性結(jié)腸炎嚴(yán)重程度相關(guān),且可能在UC的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮主要的作用。

綜上所述,潰瘍性結(jié)腸炎是一種由多種復(fù)雜因素介入的一種免疫性疾病,IL-23/IL-17的高表達(dá)參與了潰瘍性結(jié)腸炎疾病進(jìn)程中慢性炎性反應(yīng)的形成,且兩者的血清含量與脾虛濕熱證有密切的相關(guān)性,為臨床上我們運用健脾清熱利濕劑治療潰瘍性結(jié)腸炎可提供理論依據(jù),并可以作為評價藥物療效的指標(biāo)參考。

[1]Weaver CT,Harrington LE,Mangan PR,et al.Th17: an effector CD4 T cell lineage with regulatory T cell ties[J].Immunity,2006,24(6):677-688.

[2]中華醫(yī)學(xué)會消化病分會炎癥性腸病協(xié)作組.對我國炎癥腸病診斷治療規(guī)范的共識意見(2007,濟(jì)南)[J].中華消化雜志,2007,27(8):545-550.

[3]付好,童晶晶,潘琦,等.IL-23/IL-17炎癥軸在潰瘍性結(jié)腸炎中的作用[J].中華消化內(nèi)鏡雜志,2010,27(4):200-203.

[4]童霞,駱成俊,許曉梅,等.美沙拉嗪聯(lián)合雙歧三聯(lián)活菌對潰瘍性結(jié)腸炎患者TNF-α、IL-8及IL-10水平的影響[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015,15(23):4534-4536.

[5]Liu Z,Yadav PK,Xu X,et al.The increased expression of IL-23 in inflammatory bowel disease promotes intraepithelial and lamina propria lymphocyte inflammatory responses and cytotoxicity[J].J Leukoc Biol,2011,89(4):597-606.

[6]劉占舉,楊麗,崔軼,等.白細(xì)胞介素-23在炎癥性腸病的表達(dá)升高并誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子分泌[J].中華消化雜志,2009,29(6):370-373.

[7]何英,李春明,侯鳳雪,等.IL-17及IFN-γ在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2010,17(19):36-37.

[8]何英,李春明,單景軍,等.Th17類細(xì)胞因子在潰瘍性結(jié)腸炎患者中的表達(dá)[J].中國臨床醫(yī)學(xué),2010,17(4):501-503.

[9]楊淑萍,智緒亭,盧雪峰,等.IL-17A/及Th17在炎癥性腸病中的作用[J].中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展,2009,12(3):222-225.

[10]梁雄均,馬澤,曾雅靜.白介素4和17在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生發(fā)展中的作用[J].右江醫(yī)學(xué),2005,33(1):628.

(2016-12-13收稿 責(zé)任編輯：王明)

Correlation Analysis Between Serum IL-23, IL-17 and Syndrome of Dampness-heat Due to Spleen Deficiency in Patients with Ulcerative Colitis

Yang Fang, Ge Guiping, Cao Hongyan, Yu Haizhong

(1NantongHospitalofTraditionalChineseMedicineAffiliatedtoNanjingUniversityofChineseMedicine,Nantong226000,China)

Objective:To observe the expression of cytokine IL-23/IL-17 in patients with and without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency, and explore the relationship between patients with ulcerative colitis (UC) and syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency. Methods:In total, 60 cases of UC patients admitted in Nantong Hospital of Traditional Chinese Medicine from July 2014 to March 2016 were selected as the research subjects. ELLSA method was used to test the IL-23 and IL-17 levels of 30 patients with syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency, 30 patients without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency, and 20 healthy people. The syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency of all research subjects was graded, and the correlation between IL-23 and IL-17 levels and syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency was analyzed. Results:The IL 23/IL-17 levels in patients with and without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency increased significantly, and there was significant difference when compared with healthy subjects (P<0.05). There was no significant difference between patients with and without syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency (P>0.05). There were statistically significant differences in the serum IL-17/1L-23 levels among patients with mild, moderate and severe UC patients (P<0.05). Conclusion:There was positive correlation between IL-23 /IL17 and the severity of syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency.

Ulcerative colitis; Syndrome of dampness-heat due to spleen deficiency; IL-23; IL-17

南通市青年基金項目(編號:WQ2014056)

楊芳(1984.08—)女,碩士研究生,主治醫(yī)師,研究方向:中醫(yī)藥治療脾胃疾病,E-mail:348296489@qq.om

R256.3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.03.030