• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    非甾體類消炎藥雙氯芬酸抑制間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞增殖分化的研究

    2017-04-26 20:38呂天旻俞富祥張甦張建國(guó)
    中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生 2017年4期
    關(guān)鍵詞:間充質(zhì)干細(xì)胞

    呂天旻 俞富祥 張甦 張建國(guó)

    [摘要] 目的 探討NSAIDs對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞增殖分化過(guò)程的影響。 方法 體外建立鼠間充質(zhì)干細(xì)胞系 C3H10T1/2 的肌腱細(xì)胞分化模型;CCK-8比色法分別檢測(cè)雙氯芬酸(diclofenac,DF)對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響;用生長(zhǎng)分化因子-7(growth differentiation factor,GDF-7)誘導(dǎo)鼠間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T1/2分化為肌腱細(xì)胞;PCR 檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞分化過(guò)程中肌腱細(xì)胞相關(guān)基因(腱調(diào)蛋白、膠原蛋白)的表達(dá)。PCR 分別檢測(cè) DF 對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化過(guò)程中相關(guān)基因[腱調(diào)蛋白、脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2)]表達(dá)的影響。 結(jié)果 成功建立鼠間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T1/2 的肌腱細(xì)胞分化模型;DF高濃度時(shí)明顯抑制間充質(zhì)干細(xì)胞增殖(24 h:t=2.357,3.524,P<0.05。72 h:t=3.217,3.592,P<0.05);GDF-7成功誘導(dǎo)鼠間充質(zhì)干細(xì)胞系 C3H10T1/2 分化為肌腱細(xì)胞,肌腱細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)明顯增加(腱調(diào)蛋白:t=124.107,P<0.05;Ⅰ型膠原蛋白α1:t=38.107,P<0.05);DF對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化過(guò)程中抑制了肌腱基因的表達(dá)(DF:腱調(diào)蛋白:t=31.758,P<0.05),增強(qiáng)了脂肪相關(guān)基因的表達(dá)[(DF:脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2):t=97.735,P<0.05)]。 結(jié)論 高濃度時(shí) DF 抑制間充質(zhì)干細(xì)胞增殖,改變間充質(zhì)干細(xì)胞分化方向,不利于肌腱細(xì)胞再生修復(fù)。

    [關(guān)鍵詞] 間充質(zhì)干細(xì)胞;肌腱細(xì)胞;增殖分化;生長(zhǎng)分化因子

    [中圖分類號(hào)] R915 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701(2017)04-0005-05

    Study of inhibition of proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells into tendon cells by non-steroidal anti-inflammatory drugs of diclofenac

    LV Tianmin YU Fuxiang ZHANG Su ZHANG Jian'guo

    School of Medicine, Huzhou University, Huzhou 313000, China

    [Abstract] Objective To investigate the effects of NSAIDs on the proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells to tendon cells. Methods The differentiation model of tendon cells of rat mesenchymal stem cell line C3H10T1/2 was established in vitro. The effect of diclofenac(DF) on the proliferation of mesenchymal stem cells was detected by CCK-8 colorimetric assay. The differentiation of rat mesenchymal cell line C3H10T1/2 was induced by growth differentiation factor-7(GDF-7) into tendon cells. PCR was used to detect the expression of tendon-associated genes(tendon protein and collagen)during mesenchymal differentiation. PCR was used to detect the effect of DF on the expression of related genes[tonicgulin; adipocyte type fatty acid binding protein(aP2)] during differentiation of mesenchymal stem cells. Results The model of differentiation of tendon cells in rat mesenchymal cell line C3H10T1/2 was established successfully. When DF was at high concentration, mesenchymal cell proliferation was significantly inhibited(24 h:t=2.357,3.524,P<0.05. 72 h:t=3.217,3.592,P<0.05);GDF-7 successfully induced the differentiation of rat mesenchymal cell line C3H10T1/2 into tendon cells. The expression of related genes of tendon cells was significantly increased(TNMD:t=124.107, P<0.05;type Ⅰcollagen protein α1:t=38.107,P<0.05);DF inhibited the expression of tendon genes during the process of the differentiation of mesenchymal stem cells(DF:TNMD:t=31.758,P<0.05), and the expression of fat-related genes was increased(DF:aP2:t=97.735,P<0.05). Conclusion DF can inhibit the proliferation of mesenchymal stem cells and change the direction of mesenchymal differentiation in high concentration. It is not conducive to regeneration and repair of tendon cells.

    [Key words] mesenchymal stem cells; Tendon cells; Proliferation and differentiation; Growth differentiation factors

    肌腱是膠原結(jié)締組織,連接骨骼和肌肉,是關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)的基礎(chǔ)。然而,在體育運(yùn)動(dòng)、體力勞動(dòng)過(guò)程中,這種反復(fù)性的負(fù)荷運(yùn)動(dòng)易導(dǎo)致肌腱的損傷,從而引起慢性炎癥,典型的表現(xiàn)是局部疼痛及運(yùn)動(dòng)障礙,這些情況下常經(jīng)驗(yàn)性地給予NSAIDs抗炎治療。目的在于緩解癥狀和改善運(yùn)動(dòng)障礙。然而在生物藥理學(xué)上,基于這些藥物的治療對(duì)于肌腱再生的影響作用尚未明確。利用已報(bào)道的實(shí)驗(yàn)方法[1,2],用生長(zhǎng)分化因子-7(GDF-7)誘導(dǎo)鼠間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T1/2分化為肌腱細(xì)胞。評(píng)估雙氯芬酸(DF)對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞增殖分化過(guò)程的影響?,F(xiàn)報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 材料及試劑

    鼠間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T1/2,由溫州醫(yī)科大學(xué)外科實(shí)驗(yàn)中心提供;L-DMEM培養(yǎng)基,購(gòu)自Hyclone公司;小牛血清購(gòu)自Gibco公司;雙氯芬酸(DF)購(gòu)自Sigma公司;生長(zhǎng)分化因子-7(GDF-7)購(gòu)自R&D公司;CCK-8試劑盒購(gòu)自溫州長(zhǎng)風(fēng)生物科技公司;PCR試劑盒購(gòu)自Invitrogen公司。

    1.2 方法

    (1)細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞(C3H10TY1/2)用含10%小牛血清的L-DMEM常規(guī)培養(yǎng),孵育箱(型號(hào):MCO-20AIC,SANYO)95%O2和5%CO2,每2~3天換液1次。

    (2)CCK-8比色法檢測(cè)DF對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響 將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的間充質(zhì)干細(xì)胞消化傳代,細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞數(shù)為 1×104接種于 96孔板中,換無(wú)血清的 DMEM 培養(yǎng)液,每孔100 μL,培養(yǎng)24 h后按不同濃度分別向各孔中加入DF(終濃度分別為 0、1、10、100、1000 μL),每個(gè)濃度設(shè) 5個(gè)復(fù)孔,繼續(xù)培養(yǎng) 24 h 或 72 h 后每孔加入CCK-8 溶液80 uL,繼續(xù)培養(yǎng)2 h,用自動(dòng)酶標(biāo)儀(型號(hào):WD-2102A,杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司)于450 nm 處檢測(cè)每孔的吸光度(A)值,以藥物濃度為0的實(shí)驗(yàn)組為對(duì)照組,間接計(jì)算細(xì)胞增殖程度。

    (3)GDF-7誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞分化 將間充質(zhì)干細(xì)胞鋪于6孔板中,每孔細(xì)胞5×105,加入終濃度為50 ng/mL 的 GDF-7 及終濃度 50 μg/mL的抗壞血酸,培養(yǎng) 6 d,誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞分化。

    (4)PCR檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞分化過(guò)程中Ⅰ型膠原蛋白α1、腱調(diào)蛋白的mRNA表達(dá)以未加藥物的實(shí)驗(yàn)組為對(duì)照組,在間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中,請(qǐng)長(zhǎng)風(fēng)生物科技公司設(shè)計(jì)大鼠膠Ⅰ型原蛋白α1、腱調(diào)蛋白及內(nèi)參GAPDH的引物,利用PCR技術(shù),分別測(cè)定各組細(xì)胞中上述基因的mRNA表達(dá)情況。具體如下:Ⅰ型膠原蛋白α1上游引物:5-GAGCGGAGAGTACTGGATCG -3,下游引物:5-GCTTCTTTTCCTTGGGGTTC -3,擴(kuò)展片斷長(zhǎng)195 bp;腱調(diào)蛋白上游引物:5-TGTACTGGATCAATCCCACTCT -3,下游引物:5-GCTCATTCTGGTCAACTCCCCT-3,擴(kuò)增片斷長(zhǎng)213 bp;GAPDH上游引物:5-AGGACCAGGTTGTCTCCTG-3,下游引物:5-GGATGGAATTGTGAGGGAGA-3,擴(kuò)增片斷長(zhǎng)215 bp;用GAPDH為引物鑒定cDNA,分別擴(kuò)增目標(biāo)基因。反應(yīng)條件:95℃ 20 s 預(yù)變性,擴(kuò)增40個(gè)循環(huán),每個(gè)循環(huán)包括:90℃ 變性3 s,52.1℃ 退火30 s,60℃ 延伸30 s。

    (5)DF對(duì)充質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的影響 PCR檢測(cè)DF對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞分化過(guò)程中腱調(diào)蛋白、脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2)的mRNA表達(dá)影響。在間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中,從開始分化到第6天各組細(xì)胞加入 DF 1000 μL,然后顯微鏡(型號(hào):XDS-100,上海蔡康光學(xué)儀器有限公司)下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,并分析肌腱細(xì)胞、脂肪細(xì)胞的標(biāo)志物表達(dá)。腱調(diào)蛋白、脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2)及內(nèi)參 GAPDH 的引物,具體如下:腱調(diào)蛋白上游引物:5- TGTACTGGATCAATCCCACTCT-3,下游引物:5- GCTCATTCTGGTCAACTCCCCT-3,擴(kuò)增片斷長(zhǎng)213 bp;脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2)上游引物:5- CATGGCCAAGCCCAACAT -3,下游引物:5-CGCCCAGTTTGAAGGAAATC -3,擴(kuò)增片斷長(zhǎng)339 bp;GAPDH上游引物:5-GAGGACCAGGTTGTCTCCTG-3,下游引物:5-GGATGGAATTGTGAGGGAGA-3,擴(kuò)增片斷長(zhǎng) 215 bp;用 GAPDH 為引物鑒定cDNA,分別擴(kuò)增目標(biāo)基因。反應(yīng)條件:95℃ 20 s 預(yù)變性,擴(kuò)增40個(gè)循環(huán),每個(gè)循環(huán)包括:90℃ 變性3 s,52.1℃ 退火30 s,60℃ 延伸30 s。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)資料利用SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩樣本均數(shù)間比較用t檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 DF抑制間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖

    用 CCK-8 試劑盒做細(xì)胞增殖測(cè)定,DF 作用于間充質(zhì)干細(xì)胞 24 h,濃度100 μL、1000 μL的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較表現(xiàn)出抑制作用(t=2.357,3.524,P<0.05),而其他濃度的實(shí)驗(yàn)組均未顯示出抑制作用。DF作用于間充質(zhì)干細(xì)胞72 h,濃度100 μL、1000 μL的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較表現(xiàn)出抑制作用(t=3.217,3.592,P<0.05),而其他濃度的實(shí)驗(yàn)組均未顯示出抑制作用。見(jiàn)表1、圖1。

    表1 各培養(yǎng)體系中的吸光度比較(x±s)

    2.2 GDF-7促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的分化

    GDF-7誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞分化,可見(jiàn) GDF-7增強(qiáng)肌腱細(xì)胞標(biāo)志物腱調(diào)蛋白和膠原蛋白1α1的表達(dá)(腱調(diào)蛋白:t=124.107,P<0.05;Ⅰ型膠原蛋白α1:t=38.107,P<0.05)。見(jiàn)表2、圖2。

    圖2 GDF-7促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的分化

    2.3 DF對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞分化的影響

    GDF-7促進(jìn)了間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞分化,但加入DF后,發(fā)現(xiàn)將間充質(zhì)干細(xì)胞中脂肪細(xì)胞出現(xiàn)增加,見(jiàn)封三圖3A-B。進(jìn)一步通過(guò) PCR 檢測(cè)發(fā)現(xiàn) DF明顯抑制了GDF-7誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞的腱調(diào)蛋白表達(dá)(DF:腱調(diào)蛋白:t=31.758,P<0.05)。同時(shí)增強(qiáng)了脂肪細(xì)胞標(biāo)記物脂肪酸結(jié)合蛋白表達(dá)(DF:脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2):t=97.735,P<0.05),見(jiàn)表3、圖3。

    3 討論

    肌腱前體細(xì)胞具有干細(xì)胞的性質(zhì)。可分化為多種間葉組織細(xì)胞,如骨骼,脂肪,軟骨另外還有肌腱[3-5]。肌腱病變?cè)诮M織學(xué)上表現(xiàn)出肌腱細(xì)胞總數(shù)顯著下降,“非肌腱細(xì)胞”堆積,包括肌成纖維細(xì)胞,脂肪細(xì)胞,軟骨細(xì)胞還有成骨細(xì)胞[6]。因此,從生物學(xué)角度來(lái)說(shuō),肌腱病變可能歸咎于肌腱干細(xì)胞再生活動(dòng)“失去控制”,肌腱細(xì)胞分化受損而向其它間葉組織分化,肌腱損傷是最常見(jiàn)的運(yùn)動(dòng)損傷之一,包括因關(guān)節(jié)長(zhǎng)期的運(yùn)動(dòng)、摩擦或勞損引起炎癥后肌腱末端局部組織變性,及急性運(yùn)動(dòng)創(chuàng)傷造成的肌腱斷裂缺損,是運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)中公認(rèn)的治療難題。隨著人們體育活動(dòng)增多,學(xué)習(xí)、工作和生活方式的改變(電腦、手機(jī)的普及等),肌腱損傷日益增多。每?jī)|人口中一年至少有上千萬(wàn)的肌腱損傷病例。同時(shí),肌腱損傷也對(duì)許多優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員的職業(yè)生涯產(chǎn)生巨大威脅,如我國(guó)著名跨欄運(yùn)動(dòng)員劉翔,英國(guó)足球運(yùn)動(dòng)員皆因肌腱受損而暫別賽場(chǎng)。目前,臨床上對(duì)肌腱損傷的治療的主要方法是理療、手術(shù)縫合等,雖有一定效果,但是療效有限,修復(fù)后肌腱的質(zhì)量遠(yuǎn)不如正常肌腱,易出現(xiàn)肌腱粘連,肌腱結(jié)構(gòu)和力學(xué)性能低下,常重復(fù)斷裂[3,4]。即使是自體肌腱移植修復(fù)也只能達(dá)到正常肌腱力學(xué)性能的左右,且伴隨有大量疤痕組織增生。相對(duì)于其他組織和器官的疾病治療而言,對(duì)肌腱損傷的臨床治療進(jìn)展緩慢,主要原因是肌腱基本發(fā)育生物學(xué)知識(shí)的相對(duì)缺乏。因此,更好的認(rèn)識(shí)肌腱發(fā)育和分化的生理學(xué)和分子信號(hào)網(wǎng)絡(luò),可為肌腱損傷的治療提供新的方法和思路。成熟的肌腱是由致密的膠原纖維和參與調(diào)節(jié)膠原纖維結(jié)構(gòu)的大量細(xì)胞外基質(zhì)分子,如膠原,纖維間基質(zhì)復(fù)合物,蛋白多糖等組成的[5]。這些細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)肌腱功能的維持有重要作用。從組成結(jié)構(gòu)上講,肌腱這種特殊的細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu),加之內(nèi)部血管和神經(jīng)的缺乏,也在一定程度上造成了肌腱修復(fù)的困難。用 GDF-7 誘導(dǎo)成纖維樣細(xì)胞 C3H10T1/2 分化為肌腱細(xì)胞。GDF-7屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 beta 超家族,它能誘導(dǎo)細(xì)胞肌腱樣結(jié)構(gòu)形成[6]。本研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)間充質(zhì)干細(xì)胞暴露于GDF-7時(shí),兩種肌腱相關(guān)蛋白腱調(diào)蛋白和Ⅰ型膠原蛋白a1表達(dá)顯著增加,與當(dāng)前的報(bào)道一致。

    NSAIDs 也廣泛的應(yīng)用于減輕軟組織損傷疾病引起的疼痛和炎癥。它們通過(guò)增強(qiáng)COX活性,從而減少促炎癥反應(yīng)因子前列腺素合成來(lái)抑制組織炎癥。常被運(yùn)動(dòng)員用于外傷性損傷和負(fù)荷行損傷的止痛[7]。DF屬于NSAIDs,可快速而持久的止痛,且有良好的耐藥性。本研究發(fā)現(xiàn)在DF高濃度情況下,出現(xiàn)顯著的抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)脂肪形成,但是在較低濃度(1、10 μL情況下沒(méi)有觀察到這種現(xiàn)象,這個(gè)發(fā)現(xiàn)與當(dāng)前體外研究一致[8,9],有研究認(rèn)為 DF 在濃度 6、7 μL時(shí)對(duì)肌腱細(xì)胞增殖和糖胺聚糖合成沒(méi)有負(fù)面影響。由于他們是在口服或局部使用 DF 后,血清和軟組織中DF 濃度很少超過(guò)10 μL,因此,有理由認(rèn)為口服和局部使用DF,肌腱有害作用不太可能發(fā)生。然而,肌肉注射DF在術(shù)后止痛中很常見(jiàn)[10],且局部DF注射治療手部腱鞘炎已有報(bào)道,在這些情況下腱內(nèi)的DF濃度可以超過(guò)100 μL。因此,評(píng)估其安全性的過(guò)程中應(yīng)該將這些對(duì)肌腱副作用計(jì)入其中[11,12]。在美國(guó)雙氯芬酸被作為成人治療輕度至中度疼痛使用,并作為單藥或與阿片類鎮(zhèn)痛藥合用中度至重度疼痛的管理[13]。在兩個(gè)多中心,成人急性中度至重度的Ⅲ期研究嚴(yán)重的術(shù)后疼痛,HPBCD雙氯芬酸顯著減輕疼痛強(qiáng)度和對(duì)急救藥物的需求與安慰劑比較[14,15]。在這些研究中,耐受性雙氯芬酸的輪廓大體相似,安慰劑組和不良事件大多為輕度至中度較嚴(yán)重[16]。便秘、輸液部位疼痛、頭暈是最常見(jiàn)的不良反應(yīng)數(shù)值更頻繁發(fā)生氯滅痛比安慰劑[17,18]。與安慰劑相比雙氯芬酸治療似乎并未增加心血管、腎或出血相關(guān)的不良事件[19]。因此,目前雙氯芬酸可延伸用于管理的治療方案成人中度至重度術(shù)后疼痛的研究[20,21]。

    綜上所述,本研究建立了一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)單可靠的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)P停捎脕?lái)研究肌腱多功能前體細(xì)胞成肌腱細(xì)胞分化[22]。研究結(jié)果顯示,一些常規(guī)用于肌肉損傷對(duì)癥治療的藥物如DF,在祖細(xì)胞水平對(duì)肌腱再生有比較大的抑制作用,因此慎重使用[23]。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] Lee JY,Zhou Z,Sun HB,et al. BMP-12 treatment of adult mesenchymal stem cells in vitro augments tendon-like tissue formation and defect repair in vivo[J]. PLoS ONE,2011,6(3):e17531.

    [2] Violini S,Ramelli P,Mariani P,et al. Horse bone marrow mesenchymal stem cells express embryo stem cell markers and show the ability for tenogenic differentiation by in vitro exposure to BMP-12[J]. BMC Cell Biol,2009,10(1):29-38.

    [3] Bi Y,Ehirchiou D,Young MF,et al. Identification of tendon stem/progenitor cells and the role of the extracellular matrix in their niche[J]. Nat Med,2007,13(10):1219-1227.

    [4] Zhang J,Wang JH. Characterization of differential properties of rabbit tendon stem cells and tenocytes[J]. BMC Musculoskelet Disord,2010,11:10.

    [5] Mos M,Koevoet WJ,Osch GJ,et al. Intrinsic differentiation potential of adolescent human tendon tissue:An in-vitro cell differentiation study[J]. BMC Musculoskelet Disord,2007,8(1):16.

    [6] Khan KM,Cook JL,Astrom M,et al. Histopathology of common tendinopathies. Update and implications for clinical management[J]. Sports Med,1999,27(6):393-408.

    [7] Ziltener JL,Leal S,F(xiàn)ournier PE. Non-steroidal anti-inflammatory drugs for athletes:An update[J]. Ann Phys Rehabil Med,2010,53(4):278-282.

    [8] Miyatake S,Ichiyama H,Yasuda K,et al. Randomized clinical comparisons of diclofenac concentration in the soft tissues and blood plasma between topical and oral applications[J]. Br J Clin Pharmacol,2009,67(1):125-129.

    [9] Marsolais D,Cote CH,F(xiàn)renette J. Nonsteroidal anti-inflammatory drug reduces neutrophil and macrophage accumulation but does not improve tendon regeneration[J]. Lab Invest,2003,83(7):991-999.

    [10] Mccormack PL,Scott LJ. Diclofenac sodium injection (Dyloject):In postoperative pain[J]. Drugs,2008,68(1):123-130.

    [11] Novartis pharmaceuticals UK Ltd. Voltarol ampoules (diclofenac sodium): Summary of product characteristics. 2014. http:// www.medicines.org.uk/,2016-7-1.

    [12] A Pfizer Company. Dyloject TM (diclofenac sodium) injection,for intravenous use. 2016. http://www.fda.gov/,2016-7-1.

    [13] Bauer KA,Gerson W,Wright C IV,et al. Platelet function following administration of a novel formulation of intravenous diclofenac sodium versus active comparators:A randomized,single dose,crossover study in healthy male volunteers[J]. J Clin Anesth. 2010,22(7):510-518.

    [14] Carr DB,Mcdonnell MT,Bouchard A,et al. Effects of injectable HPbCD-diclofenac on the human delayed rectifier potassium channel current in vitro and on proarrhythmic QTc in vivo[J]. Clin Ther,2013,35(5):646-658.

    [15] Mermelstein F,Hamilton DA,Wright C,et al. Single-dose and multiple-dose pharmacokinetics and dose proportionality of intravenous and intramuscular HPbCD-diclofenacDylojec)compared with other diclofenac formulations[J]. Pharmacotherapy,2013;33(10):1012-1021.

    [16] Gan TJ,Daniels SE,Singla N,et al. A novel injectable formulation of diclofenac compared with intravenous ketorolac or placebo for acute moderate-to-severe pain after abdominal or pelvic surgery:A multicenter,double-blind,randomized,multiple-dose study[J]. Anesth Analg,2012,115(5):1212-1220.

    [17] Daniels S,Melson T,Hamilton DA,et al. Analgesic efficacy and safety of a novel injectable formulation of diclofenac compared with intravenous ketorolac and placebo after orthopedic surgery:a multicenter,randomized,double-blinded,multiple-dose trial[J]. Clin J Pain,2013,29(8):655-663.

    [18] Chelly JE,Singla SK,Melson TI,et al. Safety of a novel parenteral formulation of diclofenac after major orthopedic or abdominal/pelvic surgery in a population including anticoagulated,elderly or renally insufficient patients:An open-label,multiday,repeated dose clinical trial[J]. Pain Med,2013,14(5):749-761.

    [19] Gan TJ,Singla N,Daniels SE,et al. Cardiovascular safety of hydroxypropyl-beta-cyclodextrin-diclofenac in the management of acute postsurgical pain:A pooled analysis of 2 randomized,double-blind,placebo-and active comparator-controlled phase III clinical trials[J]. J Clin Anesth,2016,31:249-258.

    [20] Daniels SE,Gan TJ,Hamilton DA,et al. A pooled analysis evaluating renal safety in placebo-and active comparator-controlled phase III trials of multiple-dose injectable HPbCD-diclofenac in subjects with acute postoperative pain[J]. Pain Med,2016,17(12):2378-2388.

    [21] Tong JGNS. Clinical and laboratory hematologic findings in patients receiving repeated-dose injectable HPBCD-diclofenac for acute postoperative pain:Pooled analysis of two randomized controlled phase III clinical trials[J]. J Anesth Clin Res,2015,6(7):1-9.

    [22] Chou R,Gordon DB,de Leon-Casasola OA ,et al. Management of postoperative pain: A clinical practice guideline from the American Pain Society,the American Society of Regional Anesthesia and Pain Medicine,and the American society of Anesthesiologists committee on regional anesthesia,executive committee,and administrative council[J]. J Pain,2016,17(2):131-157.

    [23] National Pharmaceutical Council. Pain:Current understanding of assessment,management,and treatments. 2001. http://www. npcnow.org/,2016-7-1.

    (收稿日期:2016-10-12)

    猜你喜歡
    間充質(zhì)干細(xì)胞
    骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)體系的優(yōu)化篩選
    優(yōu)化間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性呼吸窘迫綜合征的研究進(jìn)展
    人胎盤底蛻膜間充質(zhì)干細(xì)胞紋狀體移植治療帕金森病模型大鼠的實(shí)驗(yàn)研究
    間充質(zhì)干細(xì)胞治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎的研究進(jìn)展
    間充質(zhì)干細(xì)胞治療放射性腸損傷研究進(jìn)展
    間充質(zhì)干細(xì)胞與未成熟樹突細(xì)胞聯(lián)合胰島細(xì)胞移植治療小鼠糖尿病
    殼聚糖培養(yǎng)對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞干性相關(guān)基因表達(dá)的作用
    臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的療效分析
    不同消化時(shí)間下膠原酶對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離的影響
    骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠血糖及視網(wǎng)膜功能影響
    六月丁香七月| 国产人妻一区二区三区在| www.av在线官网国产| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲人成网站高清观看| 国产高潮美女av| 99热网站在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚州av有码| 能在线免费观看的黄片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 午夜福利成人在线免费观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产一级毛片七仙女欲春2| 岛国毛片在线播放| 99久久精品一区二区三区| 免费看日本二区| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 日本爱情动作片www.在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲性久久影院| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产高清国产精品国产三级 | 国产人妻一区二区三区在| 欧美一区二区亚洲| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产免费男女视频| 99热这里只有是精品50| 啦啦啦啦在线视频资源| 2021少妇久久久久久久久久久| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 综合色丁香网| 青春草亚洲视频在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 2022亚洲国产成人精品| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产成人aa在线观看| eeuss影院久久| 日韩av不卡免费在线播放| av福利片在线观看| 欧美日本视频| 内地一区二区视频在线| 麻豆av噜噜一区二区三区| 在线免费观看不下载黄p国产| 美女cb高潮喷水在线观看| 日韩av在线大香蕉| 免费观看人在逋| 麻豆国产97在线/欧美| 免费电影在线观看免费观看| 22中文网久久字幕| 国产大屁股一区二区在线视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 人人妻人人澡欧美一区二区| 秋霞伦理黄片| 麻豆乱淫一区二区| 嫩草影院精品99| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 2022亚洲国产成人精品| 永久免费av网站大全| 精品国产露脸久久av麻豆 | 久久久久久久久久久丰满| 一级黄片播放器| 禁无遮挡网站| 丰满乱子伦码专区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 边亲边吃奶的免费视频| 久久亚洲国产成人精品v| 在线播放国产精品三级| 国产人妻一区二区三区在| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲国产欧美在线一区| 在线观看一区二区三区| 午夜日本视频在线| 高清午夜精品一区二区三区| 欧美最新免费一区二区三区| 在线观看66精品国产| 日本免费在线观看一区| 身体一侧抽搐| 免费观看在线日韩| 久久热精品热| 亚洲精品成人久久久久久| 国产精品国产三级专区第一集| 国产乱人视频| 波多野结衣高清无吗| 国产精品国产三级专区第一集| 日韩欧美精品v在线| 亚洲精品亚洲一区二区| 日韩欧美 国产精品| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 身体一侧抽搐| 国产精品综合久久久久久久免费| 麻豆国产97在线/欧美| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | videossex国产| 色哟哟·www| 97在线视频观看| 精品久久久久久久久亚洲| 男人舔女人下体高潮全视频| 最新中文字幕久久久久| 国产精品无大码| 国产乱人视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲内射少妇av| 久久久久久九九精品二区国产| 免费av观看视频| 中文字幕亚洲精品专区| 男女视频在线观看网站免费| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精品国产高清国产av| 午夜福利成人在线免费观看| 色播亚洲综合网| 亚洲av成人精品一二三区| 色网站视频免费| 国产日韩欧美在线精品| 日韩精品有码人妻一区| 成人午夜精彩视频在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 日韩欧美精品v在线| 老司机影院毛片| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 日韩高清综合在线| 久久久色成人| 久久久国产成人免费| 在线免费十八禁| 欧美丝袜亚洲另类| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 色尼玛亚洲综合影院| 成人美女网站在线观看视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久精品国产亚洲av涩爱| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 97超碰精品成人国产| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产91av在线免费观看| 午夜精品国产一区二区电影 | 亚洲一区高清亚洲精品| 三级毛片av免费| 国产真实乱freesex| 国内精品宾馆在线| 亚洲va在线va天堂va国产| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产高清有码在线观看视频| 免费大片18禁| 18禁在线播放成人免费| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产精品人妻久久久影院| av免费在线看不卡| 日韩制服骚丝袜av| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲伊人久久精品综合 | 国产av在哪里看| 欧美高清成人免费视频www| 一级黄片播放器| 午夜亚洲福利在线播放| 少妇被粗大猛烈的视频| 看十八女毛片水多多多| av专区在线播放| 干丝袜人妻中文字幕| 男插女下体视频免费在线播放| 久久久久久久午夜电影| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 成人一区二区视频在线观看| 久久久久网色| 亚洲内射少妇av| 日本午夜av视频| 国内精品美女久久久久久| 久久久久免费精品人妻一区二区| 91精品伊人久久大香线蕉| 听说在线观看完整版免费高清| 久久精品久久精品一区二区三区| videossex国产| 日韩 亚洲 欧美在线| 成人二区视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久久精品大字幕| 国产成人一区二区在线| av在线蜜桃| 久久鲁丝午夜福利片| 国产极品精品免费视频能看的| 免费看光身美女| 国产精品人妻久久久久久| 国产成人午夜福利电影在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 免费在线观看成人毛片| 日韩 亚洲 欧美在线| 一区二区三区免费毛片| 亚洲国产色片| 国产黄色视频一区二区在线观看 | h日本视频在线播放| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 啦啦啦韩国在线观看视频| 91狼人影院| 亚洲成人av在线免费| 22中文网久久字幕| 国产不卡一卡二| 色吧在线观看| 变态另类丝袜制服| 男女国产视频网站| 有码 亚洲区| 听说在线观看完整版免费高清| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久综合国产亚洲精品| 乱人视频在线观看| 综合色丁香网| 岛国在线免费视频观看| 天天躁日日操中文字幕| 男插女下体视频免费在线播放| 欧美色视频一区免费| 国产美女午夜福利| 国产视频内射| 国产精品永久免费网站| 99热精品在线国产| 国产午夜精品论理片| 国产黄片美女视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 亚洲18禁久久av| 久久久久久大精品| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 麻豆乱淫一区二区| 久久久国产成人精品二区| 真实男女啪啪啪动态图| 久久亚洲国产成人精品v| 色网站视频免费| 欧美一区二区精品小视频在线| 日本午夜av视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲最大成人中文| 国产高清三级在线| 99久国产av精品| 久久精品夜色国产| 99久久精品国产国产毛片| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲av.av天堂| 26uuu在线亚洲综合色| 日韩精品青青久久久久久| 六月丁香七月| 综合色丁香网| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲欧洲国产日韩| 高清av免费在线| 亚洲内射少妇av| av卡一久久| 性插视频无遮挡在线免费观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 禁无遮挡网站| 好男人在线观看高清免费视频| 国产精品国产三级国产专区5o | 国产高清不卡午夜福利| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 久久99蜜桃精品久久| 国产精品三级大全| 插阴视频在线观看视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲av.av天堂| 国产成人a∨麻豆精品| 久久精品夜色国产| 色尼玛亚洲综合影院| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 精品一区二区三区人妻视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 日本黄色片子视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久人妻av系列| 日韩av在线大香蕉| 午夜爱爱视频在线播放| 蜜桃久久精品国产亚洲av| a级一级毛片免费在线观看| 国产黄片美女视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 国产精品99久久久久久久久| 日韩av在线免费看完整版不卡| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产精品女同一区二区软件| 国内精品宾馆在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 亚洲精华国产精华液的使用体验| 熟女电影av网| 亚洲精品成人久久久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲在久久综合| 免费看a级黄色片| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲成人久久爱视频| 日本一本二区三区精品| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久久成人免费电影| 久久人人爽人人爽人人片va| 人妻少妇偷人精品九色| 日本三级黄在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 神马国产精品三级电影在线观看| 有码 亚洲区| 亚洲av免费高清在线观看| 一级av片app| 亚洲最大成人中文| 美女大奶头视频| 综合色丁香网| 青春草国产在线视频| 人人妻人人看人人澡| 在线观看av片永久免费下载| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| h日本视频在线播放| 搡女人真爽免费视频火全软件| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产乱人偷精品视频| 看片在线看免费视频| 亚洲精品自拍成人| 色噜噜av男人的天堂激情| 天天躁日日操中文字幕| 能在线免费观看的黄片| 久久亚洲国产成人精品v| 一级黄色大片毛片| 黄片wwwwww| 亚洲18禁久久av| 久久韩国三级中文字幕| 欧美极品一区二区三区四区| 国产精品不卡视频一区二区| 婷婷色麻豆天堂久久 | 精品久久久久久成人av| 亚洲色图av天堂| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产精品久久久久久av不卡| 欧美成人午夜免费资源| 波野结衣二区三区在线| 偷拍熟女少妇极品色| or卡值多少钱| 精品无人区乱码1区二区| 午夜精品一区二区三区免费看| 日本熟妇午夜| av在线观看视频网站免费| 少妇的逼好多水| 一本一本综合久久| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 只有这里有精品99| 淫秽高清视频在线观看| 日本黄色片子视频| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲美女视频黄频| 国产在视频线精品| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲图色成人| av天堂中文字幕网| 日韩大片免费观看网站 | av线在线观看网站| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲国产精品国产精品| 国产午夜福利久久久久久| 高清av免费在线| 在线免费观看不下载黄p国产| 欧美高清成人免费视频www| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 国产乱人视频| 欧美一区二区亚洲| 国产一级毛片在线| 国产伦理片在线播放av一区| 国产av在哪里看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 欧美成人免费av一区二区三区| 三级经典国产精品| www.色视频.com| 天天躁日日操中文字幕| 99久国产av精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产私拍福利视频在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 在线播放无遮挡| 91av网一区二区| 午夜福利视频1000在线观看| 天堂网av新在线| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国国产精品蜜臀av免费| 免费看光身美女| 日韩欧美精品v在线| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲三级黄色毛片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产成人免费观看mmmm| 毛片女人毛片| 欧美高清成人免费视频www| 看非洲黑人一级黄片| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| www日本黄色视频网| 免费观看的影片在线观看| 国产在线男女| 久久久久精品久久久久真实原创| 久久久久九九精品影院| 久久这里有精品视频免费| 91aial.com中文字幕在线观看| videossex国产| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产精品99久久久久久久久| www日本黄色视频网| 视频中文字幕在线观看| 内地一区二区视频在线| www.av在线官网国产| 在线免费观看的www视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产 一区 欧美 日韩| 99视频精品全部免费 在线| www.色视频.com| 春色校园在线视频观看| 亚洲国产精品合色在线| 淫秽高清视频在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 亚洲四区av| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产爱豆传媒在线观看| 免费观看性生交大片5| 观看免费一级毛片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲五月天丁香| 中文字幕久久专区| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产精华一区二区三区| 国产精品不卡视频一区二区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美高清成人免费视频www| 热99在线观看视频| 国产淫片久久久久久久久| 91狼人影院| 久久久成人免费电影| 日本欧美国产在线视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 2022亚洲国产成人精品| 岛国在线免费视频观看| 国产一区有黄有色的免费视频 | 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 高清午夜精品一区二区三区| 久久久精品94久久精品| 午夜精品国产一区二区电影 | 最近最新中文字幕免费大全7| 人妻少妇偷人精品九色| 国产成人a∨麻豆精品| 国产精品野战在线观看| 日本色播在线视频| 老司机影院成人| 九草在线视频观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产极品天堂在线| 97热精品久久久久久| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 大香蕉97超碰在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 美女国产视频在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 身体一侧抽搐| 亚洲精品影视一区二区三区av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 午夜激情欧美在线| 国产黄片美女视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 亚洲va在线va天堂va国产| 级片在线观看| 永久免费av网站大全| 卡戴珊不雅视频在线播放| 中文字幕av在线有码专区| av免费在线看不卡| 免费看av在线观看网站| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲av福利一区| 免费在线观看成人毛片| 看免费成人av毛片| 亚洲国产欧美人成| 久热久热在线精品观看| 在线a可以看的网站| 亚洲av成人av| 美女高潮的动态| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 欧美丝袜亚洲另类| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美3d第一页| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 超碰av人人做人人爽久久| 联通29元200g的流量卡| 99热网站在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 精品免费久久久久久久清纯| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲精品456在线播放app| 久久精品人妻少妇| 禁无遮挡网站| 小说图片视频综合网站| 99九九线精品视频在线观看视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲欧洲国产日韩| 国产精品一二三区在线看| 亚洲av日韩在线播放| 午夜福利在线观看吧| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 丝袜美腿在线中文| av专区在线播放| 色综合亚洲欧美另类图片| 成人二区视频| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 91精品国产九色| 亚洲av中文av极速乱| 午夜福利视频1000在线观看| 伦理电影大哥的女人| 舔av片在线| 免费观看精品视频网站| 久久99热这里只有精品18| 嘟嘟电影网在线观看| 久久久午夜欧美精品| 在线免费十八禁| av.在线天堂| 午夜福利在线观看吧| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久久精品大字幕| 99热网站在线观看| 直男gayav资源| 日韩中字成人| 国产69精品久久久久777片| 久久久亚洲精品成人影院| 毛片女人毛片| 人体艺术视频欧美日本| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 九草在线视频观看| 久久99热这里只频精品6学生 | 美女脱内裤让男人舔精品视频| av视频在线观看入口| 亚洲性久久影院| 欧美一区二区亚洲| 国产成人freesex在线| 亚洲高清免费不卡视频| 插逼视频在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 天堂中文最新版在线下载 | 亚洲不卡免费看| 少妇丰满av| 亚洲久久久久久中文字幕| 少妇被粗大猛烈的视频| 如何舔出高潮| 午夜a级毛片| 欧美极品一区二区三区四区| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲国产成人一精品久久久| 五月伊人婷婷丁香| 国产69精品久久久久777片| 国产极品天堂在线| 少妇人妻精品综合一区二区| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美精品一区二区大全| 人妻少妇偷人精品九色| 边亲边吃奶的免费视频| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲欧美精品自产自拍| 午夜精品在线福利| 寂寞人妻少妇视频99o| 最后的刺客免费高清国语| 最近中文字幕2019免费版| 日韩高清综合在线| av.在线天堂| 午夜精品在线福利| 国产免费一级a男人的天堂| 国产真实乱freesex| 欧美一区二区精品小视频在线| 简卡轻食公司| 亚洲精品自拍成人| 日韩一区二区三区影片| 亚洲真实伦在线观看| 99热全是精品| 日韩欧美精品v在线| 国产精品伦人一区二区| 少妇丰满av| 丝袜喷水一区| 欧美精品国产亚洲| 精品久久久噜噜| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 国产成人freesex在线| 超碰av人人做人人爽久久| 久久鲁丝午夜福利片| 校园人妻丝袜中文字幕| 搞女人的毛片| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 免费av不卡在线播放|