獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物現(xiàn)狀及檢測技術(shù)研究進(jìn)展

董玲玲，于曉輝，范強(qiáng)，趙暉，韓寧寧，楊秀玉，萬仁玲

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081)

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獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物現(xiàn)狀及檢測技術(shù)研究進(jìn)展

董玲玲，于曉輝，范強(qiáng)，趙暉，韓寧寧，楊秀玉，萬仁玲*

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081)

針對(duì)目前獸藥制劑中非法添加的情況，本文對(duì)近年來獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物情況，已查明用于非法添加的化學(xué)藥物，以及目前用于獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物的檢測技術(shù)進(jìn)行綜述，并對(duì)非法添加物的篩查思路提出展望。

非法添加;獸藥制劑;檢測技術(shù)

我國是人口大國，畜禽產(chǎn)品的需求量非常大，這就帶動(dòng)了獸藥市場的繁榮。截至2016年底，國家批準(zhǔn)的獸藥生產(chǎn)企業(yè)有2093家，另外還有進(jìn)口獸藥生產(chǎn)企業(yè)，獸藥產(chǎn)業(yè)的市場競爭十分激烈。某些獸藥生產(chǎn)企業(yè)為在市場競爭中占得一席之地，使用了“非常手段”：在獸藥制劑中非法添加處方外化學(xué)藥物以達(dá)到提高產(chǎn)品防治疾病的效果或者減少不良反應(yīng)的目的，這不僅擾亂了獸藥市場，也給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來了極大的安全隱患。隨著國家對(duì)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的日益重視，農(nóng)業(yè)部對(duì)獸藥處方外非法添加的監(jiān)管與打擊力度也不斷加大，近年陸續(xù)發(fā)布了獸藥處方外非法添加物檢查的公告作為檢驗(yàn)依據(jù)[1-3]。為了更好的監(jiān)測獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物提供技術(shù)支持，本文以近年來獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物現(xiàn)狀為切入點(diǎn)，對(duì)非法添加的化學(xué)藥物，檢測技術(shù)做一綜述，并對(duì)篩查思路提出展望。

1 獸藥制劑非法添加化學(xué)藥物現(xiàn)狀

自2008年在監(jiān)督抽檢獸藥中發(fā)現(xiàn)處方外藥物以來，獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物的情況時(shí)有發(fā)生。根據(jù)近年來對(duì)獸藥制劑的監(jiān)測以及文獻(xiàn)調(diào)研情況，目前獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥品存在下列情況：(1)添加藥物的種類繁多：a.常見的有對(duì)乙酰氨基酚、安乃近等解熱鎮(zhèn)痛類藥物；氟喹諾酮類、磺胺類等抗菌藥物；茶堿、氨溴索等鎮(zhèn)咳平喘類藥物；還有β-受體激動(dòng)劑等[4]。曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)，僅黃芪多糖注射液一種制劑中發(fā)現(xiàn)的非法添加藥物就多達(dá)11種[1]。b.添加違禁藥品及人用藥，如林中等發(fā)現(xiàn)獸藥中添加了氯霉素類和硝基呋喃類藥物[5]。(2)添加方式多樣：a.以同類藥物替代標(biāo)稱藥物，如2014年監(jiān)督抽檢過程中發(fā)現(xiàn)標(biāo)稱磺胺間甲氧嘧啶鈉注射液實(shí)際檢出藥物為磺胺嘧啶。b.存在一種制劑非法添加多種藥物的情況，有的制劑添加的多種藥物為同類藥物[6]，有些干脆添加多種不同類藥物，組成“包治百病的超級(jí)復(fù)方”，如2015年監(jiān)督抽檢過程中發(fā)現(xiàn)在魚腥草注射液中非法添加了水楊酸、

氧氟沙星和林可霉素[3,7]。(3)添加劑量隨意：存在“想加就加，加多加少隨意”的情況。例如檢出頻次較高的乙酰甲喹、甲氧芐啶等在不同獸藥制劑中的添加量并不相同。(4)添加手段愈發(fā)“高明”，早期最常見的是在預(yù)混劑、可溶性粉或中獸藥散劑等粉、散劑型中進(jìn)行添加，簡單方便；后來發(fā)現(xiàn)注射液等液體制劑中也有非法添加的現(xiàn)象，添加手段變得更加隱蔽。獸藥制劑非法添加的亂象，侵害了符合《獸藥生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求的生產(chǎn)企業(yè)的正當(dāng)利益，“劣幣驅(qū)逐了良幣”；同時(shí)，也給不明真相使用了含有非法添加藥物的畜禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了安全隱患和損失，很多動(dòng)物源性食品的獸藥殘留正是因?yàn)闉E用或使用假劣獸藥造成的。

2 近年來獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物的匯總

根據(jù)近年來獸藥監(jiān)督抽檢和獸藥制劑的監(jiān)測結(jié)果，將獸藥制劑中非法添加的藥物進(jìn)行匯總，結(jié)果見表1，中獸藥散劑和注射液是非法添加的重災(zāi)區(qū)，其次抗菌類獸藥的可溶性粉也常有非法添加的現(xiàn)象發(fā)生。

表1 獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物情況匯總表

*添加頻次高，也曾發(fā)現(xiàn)被非法添加在其余獸藥制劑中

3 獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物檢測技術(shù)研究進(jìn)展

為了規(guī)范獸藥市場，實(shí)現(xiàn)安全用藥，農(nóng)業(yè)部不斷加大對(duì)獸藥處方外非法添加的打擊力度，這就需要強(qiáng)大的技術(shù)手段作支撐。目前獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物檢測有篩查與確證兩部分工作，常用的檢測技術(shù)方法主要有顯微鏡檢查法、薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法等。近年來獸藥制劑中非法添加藥物的篩查與確證技術(shù)不斷提升，也借鑒了一些國內(nèi)外同行篩查與確證非法添加物的方法。

3.1 顯微鏡檢查法

早在2009年，農(nóng)業(yè)部組織開展了首批獸藥國家補(bǔ)充檢查方法的研究制訂工作，以農(nóng)醫(yī)發(fā)[2009]17號(hào)文件頒布了三個(gè)檢查方法，是針對(duì)中獸藥散劑中非法添加氯霉素、喹乙醇、乙酰甲喹、呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因的檢查[8]。此后，對(duì)中獸藥散劑進(jìn)行顯微鑒別時(shí)若發(fā)現(xiàn)處方外晶片，符合上述添加藥物特征的可以直接判定，其余的則用高效液相色譜法等進(jìn)一步篩查與確證。顯微鏡檢查法在中獸藥散劑非法添加藥物篩查與確證方面發(fā)揮了重要的作用。

3.2 薄層色譜法(TLC法)

薄層色譜法方便快捷，能夠快速鎖定非法添加藥物的類別，可以作為初步篩查方法，為高效液相色譜法，液質(zhì)聯(lián)用、氣質(zhì)聯(lián)用等方法進(jìn)行進(jìn)一步確證提供參考。

郝麗華等[9]建立了黃芪多糖注射液中非法添加的安乃近、恩諾沙星等6種藥物的薄層色譜快速篩查方法。其中林可霉素、利巴韋林斑點(diǎn)在254 nm紫外燈下檢視不顯色，而在碘蒸氣熏蒸后顯色；恩諾沙星顯特殊的藍(lán)色熒光；對(duì)乙酰氨基酚斑點(diǎn)接近溶劑前沿，而鹽酸嗎啉胍斑點(diǎn)展距較小。該方法成功實(shí)現(xiàn)了不同種類藥物的分離，簡單快捷，靈敏度高。

3.3 高效液相色譜法(HPLC法)

高效液相色譜法在獸藥制劑非法添加化學(xué)藥物檢查方面應(yīng)用非常廣泛，尤其是高效液相色譜配二極管陣列檢測器法(HPLC-PDA法)是對(duì)非法添加藥物進(jìn)行確證和定量的重要手段；而液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法(LC-MS法)在非法添加物篩查過程中發(fā)揮重要作用。

3.3.1 高效液相色譜-紫外檢測器法

高效液相色譜-紫外檢測器法根據(jù)所配檢測器的不同，分為普通紫外檢測器法和二極管陣列檢測器法(HPLC-PDA法)。

高迎春等[10]建立了中獸藥散劑中添加磺胺喹噁啉鈉的HPLC鑒別方法，在黃連解毒散、鹽酸小檗堿和雞球蟲散陰性樣品中添加磺胺喹噁啉鈉對(duì)照品來對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。但是以紫外檢測器在固定波長處鑒別非法添加藥物存在局限性，結(jié)構(gòu)類似物往往最大吸收波長一致，若液相條件不能使之完全分離，則有可能造成誤判。目前，高效液相色譜法用于非法添加藥物篩查和檢測最常見的是連接二極管陣列檢測器，不僅可以提供非法添加藥物的保留時(shí)間信息，還能提供特征紫外光譜信息，更加可靠。劉自揚(yáng)[11]建立了3種喹喔啉二氧化物；氧氟沙星等9種喹諾酮類藥物；硝基呋喃等3種呋喃類藥物以及利巴韋林、鹽酸嗎啉胍2種抗病毒藥物等4種HPLC-PDA檢測方法，用于中獸藥制劑中非法添加化學(xué)藥物的檢測。此外，在其研究的基礎(chǔ)上，借助色譜峰純度檢查和光譜相似度檢查輔助對(duì)照品保留時(shí)間比對(duì)的方法，對(duì)非法添加藥物進(jìn)一步確證，建立了氟喹諾酮類制劑中非法添加對(duì)乙酰氨基酚和安乃近的測定方法[12]。班付國等[13]用HPLC-PDA方法檢查17種獸藥中非法添加的氨茶堿和二羥丙茶堿，采用等度洗脫方式，兩種藥物在0.5～200μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，且兩種藥物在17種獸藥中的回收率也良好。龔旭昊等在等度洗脫條件下建立了水楊酸和氧氟沙星在魚腥草注射液中的定性定量HPLC-PDA檢查方法[7]。

3.3.2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法(LC-MS法)

LC-MS方法對(duì)添加物的檢測無歧視，能彌補(bǔ)HPLC方法中紫外檢測器的不足，并且合適的質(zhì)譜條件下就可以獲得添加物的分子離子和碎片信息，對(duì)于推斷未知添加物尤為重要。因此，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在獸藥制劑中非法添加物的篩查與檢測方面的應(yīng)用也日益增多。

曹瑩等[14]使用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(配有二極管陣列檢測器)，一次進(jìn)樣既獲得紫外光譜數(shù)據(jù)又得到質(zhì)譜數(shù)據(jù)，篩查出疑似添加物，再用對(duì)照品比對(duì)的方式進(jìn)行確證，成功鑒別出獸用抗菌藥和抗生素中非法添加的二氧丙嗪和氨溴索。韓寧寧等[15]通過制備液相色譜將氟苯尼考粉中的未知添加物進(jìn)行純化，再用UPLC-Q/TOFMS法和HPLC-PDA法等2種方法對(duì)純化后的添加物進(jìn)行分析，成功推斷其結(jié)構(gòu)，最后再通過上述2種方法對(duì)推斷進(jìn)行驗(yàn)證，最終鑒定出該未知添加物為苯甲酸，為未知添加物的篩查提供了新思路。劉雪紅等[16]應(yīng)用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)建立了獸用中藥制劑穿心蓮注射液和魚腥草注射液中非法添加慶大霉素的定量檢測方法。通過多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行測定。該法準(zhǔn)確、快速。

3.4 氣相色譜法(GC法)

目前，氣相色譜法在獸藥制劑中非法添加物的檢測方面應(yīng)用較少。張立華等[17]采用程序升溫方式，石英毛細(xì)管柱，建立了中獸藥散劑中非法添加金剛烷胺的氫火焰離子化氣相色譜(GC-FID) 含量測定方法。該方法線性關(guān)系良好，回收率較高，且整個(gè)方法運(yùn)行時(shí)間僅需15 min，快速準(zhǔn)確可靠。

3.5 可用于獸藥制劑非法添加化學(xué)藥物檢測的技術(shù)分析

除了上面列出來的幾種方法之外，目前國內(nèi)外用于非法添加的技術(shù)手段還有氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[18]，紅外光譜法[19]，近紅外光譜法[20]，拉曼光譜法[21]，離子遷移色譜法[22]等，可將這些方法用于獸藥制劑非法添加化學(xué)藥物的檢測。

4 小結(jié)與展望

非法添加藥物在確證之前為未知物，一直以來對(duì)未知物的篩查都是工作中的難點(diǎn)。目前采用HPLC-PDA法建立非法添加的常見化學(xué)藥物紫外光譜數(shù)據(jù)庫，能夠提供紫外光譜圖與保留時(shí)間等信息，是現(xiàn)階段獸藥制劑中非法添加物常規(guī)篩查的重要依據(jù)。HPLC-PDA法用于有紫外吸收的非法添加藥物的檢查，方便快捷，但對(duì)于本身沒有共軛結(jié)構(gòu)，沒有紫外吸收或者即使有紫外吸收但組分復(fù)雜的藥物如吉他霉素等，HPLC-PDA法就不能發(fā)揮作用，對(duì)于未收入光譜庫的化合物會(huì)有漏查的風(fēng)險(xiǎn)，存在一定的局限性。這時(shí)可以借助聯(lián)用技術(shù)來實(shí)現(xiàn)非法添加藥物的檢測。液質(zhì)聯(lián)用方法，尤其是高分辨率質(zhì)譜能提供精確分子量，在化合物鑒別方面應(yīng)用廣泛[23-24]，但該方法目前在獸藥制劑中非法添加物的篩查領(lǐng)域尚處于初級(jí)探索階段。因此，需要投入更多的精力在液質(zhì)聯(lián)用方法的開發(fā)上，建立非法添加物篩查的質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫。

根據(jù)已積累的工作經(jīng)驗(yàn)，筆者認(rèn)為可以研究1～2個(gè)初篩液相色譜方法盡可能多的采集可能用于非法添加的藥物的紫外光譜信息，此處的初篩也可以理解為“粗篩”，不是傳統(tǒng)意義上的建立一個(gè)檢查方法，初篩方法不要求定量，不考究回收率，建立初篩方法的目的是明確是否有非法添加藥物；另外，在采用HPLC-PDA法建立非法添加藥物的確證檢查方法時(shí)，將檢查范圍擴(kuò)大到結(jié)構(gòu)類似或者藥理作用相似的一系列藥物，而不僅僅局限于篩查出的某一種非法添加藥物。同時(shí)考慮到獸藥監(jiān)督檢驗(yàn)的重點(diǎn)是在省級(jí)以下獸藥檢測機(jī)構(gòu)，因此制定的檢查方法要適應(yīng)基層檢測的現(xiàn)狀，使得方法的適用性更強(qiáng)。

[1] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第1848 號(hào).黃芪多糖注射液中非法添加解熱鎮(zhèn)痛類、抗病毒類、抗生素類、喹諾酮類等11 種化學(xué)藥物(物質(zhì))檢查方法和肥豬散、健胃散、銀翹散等中獸藥散劑中非法添加氟喹諾酮類化學(xué)藥物(物質(zhì))檢查方法[S].

[2] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第2508號(hào). 注射用青霉素鉀(鈉)中非法添加解熱鎮(zhèn)痛藥物檢查方法等11 個(gè)獸藥非法添加化學(xué)藥物(物質(zhì))檢查方法[S].

[3] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第2320號(hào). 魚腥草注射液中非法添加林可霉素檢查方法、魚腥草注射液中非法添加水楊酸氧氟沙星檢查方法和中藥散劑中非法添加金剛烷胺和金剛乙胺檢查方法等3項(xiàng)檢查方法標(biāo)準(zhǔn)[S].

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[8] 農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2009〕17號(hào).中獸藥散劑中非法添加呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因檢查方法；中獸藥散劑中非法添加氯霉素檢查方法和中獸藥散劑中非法添加喹乙醇檢查方法[S].

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(編輯：陳希)

Research Progress on Detection Technologies and the Current Situation for Chemical Drugs Illegally Adulterated in Veterinary Preparations

DONG Ling-ling, YU Xiao-hui, FAN Qiang, ZHAO Hui, HAN Ning-ning, YANG Xiu-yu, WAN Ren-ling*

(ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl,Beijing100081,China)

This paper summarized the current situation of the chemical drugs illegally adulterated in veterinary preparations, the analytical methodologies utilized for the detection of these drugs，and the prediction of the methods can be used in inspecting of these drugs.

illegally adulterated; veterinary preparations; detection technologies

"十二五"科技支撐計(jì)劃(2015BAD11B03-4)

董玲玲，碩士研究生，從事獸藥檢驗(yàn)方面工作。

萬仁玲。E-mail：wanrenling@ivdc.org.cn

2016-08-15

A

1002-1280 (2017) 03-0011-04

S859.79