不同劑量定癇丸治療癲癇的動物實驗研究

孫洋馨，王翔艷

不同劑量定癇丸治療癲癇的動物實驗研究

孫洋馨，王翔艷＊

定癇丸；癲癇；最佳劑量；動物實驗

中醫(yī)稱癲癇為癇癥，病位在腦竅，涉及心、肝、腎、脾四臟，病機特點是邪實證虛，治療的關(guān)鍵在痰，治療的原則是熄風定癇。從中醫(yī)的角度講，癲癇是由痰所致，應(yīng)從痰論治。中藥治療有逐瘀、補虛法、滌痰息風、標本同治等方法。定癇丸源于《醫(yī)學心語》，被認為是治療癇病發(fā)作的主方之一。近年來，臨床上采用定癇丸治療癲癇，并取得了較好的療效，用定癇丸治療癇病也隨之被廣泛運用［1］。為進一步研究中醫(yī)治療癲癇的效果和安全性，本研究以80只斷乳6周齡小鼠作為研究對象，分析了不同劑量定癇丸治療癇病的治療效果，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 癲癇模型與藥物按照隨機數(shù)字表法將購取的80只斷乳6周齡小鼠隨機分為治療組和對照組，將這兩組再隨機分為4個不同的劑量組（每組10只）。實驗動物均由四川大學動物中心購得，飼養(yǎng)于SPF環(huán)境（光照時間、濕度、室溫分別為12 h、45%、24.5℃），動物都分籠飼養(yǎng)，兩組小鼠體重均在15~35 g左右，兩組小鼠一般資料比較無差異（P> 0.05），具有可比性。最大電休克發(fā)作型小鼠造模，齒狀夾用生理鹽水浸潤后，夾住小鼠兩耳尖部，進行交流電刺激，參數(shù)設(shè)定為44 V，0.3 s，單次刺激，以后肢強直性伸直為驚厥指標。藥物定癇丸選用廣東一方制藥有限公司生產(chǎn)的免煎顆粒配制，組方如下：節(jié)菖蒲1袋（相當于中藥飲片6 g）、云苓1袋（相當于中藥飲片10 g）、半夏1袋（相當于中藥飲片9 g）、杭芍0.5袋（相當于中藥飲片5 g）、天麻1袋（相當于中藥飲片10 g）、膽南星1袋（相當于中藥飲片6 g）、川貝9袋（相當于中藥飲片9 g）、僵蠶1袋（相當于中藥飲片10 g）、全蝎2袋（相當于中藥飲片6 g）、陳皮1袋（相當于中藥飲片6 g）等。

1.2 診斷標準西醫(yī)診斷標準：參照2005年國際抗癲癇聯(lián)盟（ILAE）提出的癲癇病的臨床診斷標準［2］。中醫(yī)診斷標準：參照1993年中醫(yī)藥管理局頒布的《中藥新藥治療癇癥臨床研究指導(dǎo)原則》中規(guī)定的“新藥治療癇癥的臨床研究指導(dǎo)原則”［3］。

1.3 研究方法對小鼠灌胃給予不同濃度的定癇丸提取液。定癇丸提取液配制方法：按上方組成，經(jīng)過蒸餾水溶解，和澄清劑純化精制成濃度分別為100mg/m l，200mg/ml，400mg/m l，800mg/m l的定癇丸提取液。治療組的四個劑量小組分別按照100mg/ kg·d、200mg/kg·d、400 mg/kg·d、800mg/kg·d的劑量給予定癇丸提取液，對照組則在同一時間給予等量的生理鹽水，連續(xù)服用14 d時間，早晚各一次。在末次給藥1 h后再行上述電刺激，記錄其驚厥數(shù)，驚厥持續(xù)時間，計算驚厥率。2個月后，觀察兩組小鼠癲癇模型的臨床效果。

1.4 研究指標兩組小鼠癲癇模型經(jīng)過14 d治療后的總體效果比較，治愈：用藥14 d后不再出現(xiàn)癲癇癥狀。好轉(zhuǎn)：癥狀減輕，或者復(fù)發(fā)過一次癲癇。無效：治療14 d后，癥狀沒有明顯的改善或者加重。兩組中4個劑量組治療前后小鼠的體重的變化。不同組對抗癲癇驚厥時間的比較［4］。

1.5 統(tǒng)計學方法用SPSS 18.0統(tǒng)計分析軟件進行，計量資料以均值±標準差（x±s）來表示，對于服從正態(tài)分布，方差齊性的資料應(yīng)用兩組之間的t檢驗，對于符合條件的多個均值之間的比較應(yīng)用方差分析；計數(shù)資料可以采用卡方檢驗；對于不符合條件的資料利用秩和檢驗。檢驗標準取ɑ=0.05，當P< 0.05時差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組抗癲癇效果的比較治療組的治療有效率為87.5%，顯著高于對照組的12.5%，兩組之間經(jīng)過秩和檢驗后差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明聯(lián)合定癇丸治療癲癇的總體有效率較高。見表1。

表1 兩組模型小鼠的總體抗癲癇效果

2.2 兩組治療前后體重及驚厥時間的比較治療組（40只）和對照組（40只）兩組小鼠在治療前體重、每次驚厥持續(xù)的時間、發(fā)生的次數(shù)在兩組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明兩組之間具有可比性。治療后體重、驚厥持續(xù)的時間、驚厥次數(shù)在兩組之間的差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），治療組對癲癇控制的效果明顯；治療組中體重、驚厥持續(xù)時間、驚厥發(fā)生的次數(shù)治療前后的差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

表2 兩組小鼠治療前后體重、驚厥時間及次數(shù)比較（x±s）

2.3 不同劑量藥物的小鼠毒性反應(yīng)不同劑量藥物對兩組小鼠發(fā)作性陣攣潛伏期的具體統(tǒng)計結(jié)果為：治療組1組為（62.99±5.58）s，2組為（125.57± 4.49）s，3組為（185.23±3.39）s，4組為（76.35±3.56）s，四組比較P=0.002，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；對照組1組為（65.59±5.45）s，2組為（70.47±6.58）s，3組為（71.29±3.39）s，4組為（73.46±4.49）s，四組比較P= 0.382，無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。在治療組不同劑量陣攣潛伏期之間的差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），經(jīng)過兩兩之間的比較2組與1組之間以及3組與1組之間的差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），對照組四組經(jīng)過方差分析差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），表明在3組劑量時的效果更加明顯，經(jīng)記錄，在1組和2組喂養(yǎng)一周時小鼠無死亡現(xiàn)象，3組時喂養(yǎng)第一周時就有1只鼠死亡。

3 討論

癲癇即“癇癥”，屬短暫性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常臨床綜合慢性病，由神經(jīng)元異常同步放電導(dǎo)致。目前中醫(yī)治法已發(fā)展為兩大類治法，分別為從痰論治法和從肝論治法［5］。痰與癲癇的發(fā)生有著密切的關(guān)系，所謂痰是導(dǎo)致癲癇發(fā)作的直接原因，所以應(yīng)從痰著手［6］。中醫(yī)講肝主藏血、主疏泄，使全身的津氣血津液正常運行，則肝的功能失常會導(dǎo)致陽升風動，風動則痰升，痰升則致癲癇。定癇丸在臨床上經(jīng)常用于癲癇的治療，包括節(jié)菖蒲、黨參、云苓、白術(shù)、半夏、杭芍、白蔻仁、木香、龍齒、甘草、天麻、膽南星、川貝、僵蠶、全蝎、陳皮等。方中的節(jié)菖蒲可開泄，化濕邪、祛痰濁，能陣發(fā)清陽；天麻可作風之潤劑，是治風之妙藥，因此在癲癇的治療上可治驚厥、平肝陽；膽南星、半夏可化痰濁、定驚熄風；川貝有清熱化痰之功效；僵蠶化痰散結(jié)、疏風散熱；全蝎善于搜風邪；陳皮能健脾燥濕，甘草具有調(diào)和諸藥的作用，能緩和藥性［7］。

本研究探討分析了聯(lián)合定癇丸治療癲癇的臨床效果，研究結(jié)果顯示治療組治療的有效率（87.5%）顯著高于對照組（12.5%），證明了中醫(yī)不同劑量定癇丸治療癲癇的效果；治療組和對照組兩組小鼠在治療前體重、每次驚厥持續(xù)的時間、發(fā)生次數(shù)上無差異，說明兩組的基線資料無差異，治療后差異顯著，說明治療組對癲癇控制的效果明顯，并且治療組就自身治療前后相比也有明顯差異；在治療組不同劑量陣攣潛伏期之間有明顯差異（P< 0.05），經(jīng)過兩兩之間的比較，2組與1組之間以及3組與1組之間有明顯差異（P<0.05），對照組四組經(jīng)過方差分析差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明給小鼠預(yù)定癇丸提取液按照3組的劑量（即按照400mg/ kg·d的量）時治療效果最佳，3組的小鼠在用藥后臨床表現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)，動作減少，體重下降，嗜睡、便溏等，停藥后，好轉(zhuǎn)的效果很快便消失［8］。定癇丸提取液治療癲癇的作用時間大多數(shù)都固定在用藥后第四天，隨著用藥劑量的增加效果更加明顯，與臨床上其他治療方法相比，無論是起效快慢還是長久的治療效果，定癇丸提取液都具有其獨特的優(yōu)勢。對于某些特殊類型的癲癇病，定癇丸提取液更是有不可替代的作用。研究中還發(fā)現(xiàn)癲癇具有病程長、反復(fù)發(fā)作的特點，患者意識障礙且肌肉抽搐，行為、感覺、情感等功能異常［9］。定癇丸雖然效果較好，但是在疾病的治療上其藥效維持的時間較短，若停止用藥，患者體內(nèi)的藥最多可以維持兩天的作用，但是這恰恰又是定癇丸的另外一個特點，即不良反應(yīng)小，安全性較高。

綜上所述，定癇丸治療小鼠的癲癇，效果明顯，且當劑量為400mg/kg·d時治療效果最佳，具有一定的安全性，在臨床上有一定的研究價值。

［1］周勝利，龍子江，蔡永亮，等.定癇丸對青霉素致癇大鼠腦組織MDA、SOD的影響［J］.中醫(yī)藥臨床雜志.2012，24（3）：278-280.

［2］周勝利，龍子江，蔡永亮，等.定癇丸對青霉素致癇大鼠腦組織環(huán)核苷酸（cAMP、cGMP）影響［J］.安徽醫(yī)藥.2011，15（11）：1344-1345.

［3］黃運生，陳寶田，劉志良，等.柴胡疏肝湯對戊四氮致癇大鼠海馬及額葉皮質(zhì)c-fos表達的影響［J］.中華神經(jīng)醫(yī)學雜志，2011，10（7）：662-665.

［4］潘鵬克.成人難治性癲癇藥物治療研究進展［J］.海南醫(yī)學院學報，2011，17（8）：149-150.

［5］于云紅，謝煒，趙云燕，等.同病異治對戊四氮點燃大鼠海馬區(qū)谷氨酸代謝通路的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33（1）：95-99.

［6］中華醫(yī)學會神經(jīng)病學分會腦電圖與癲癇學組.抗癲癇藥物應(yīng)用專家共識［J］.中華神經(jīng)科雜志，2011，44（1）：56-64.

［7］Pernot F，Heinrlch C，Barbier L.Inflammatory changes during epileptogenesis and spontaneous seizures in a mouse model of mesiotemproal lobe epilepsy［J］.Epilepsia，2011，52（12）：2315-2325.

［8］潘心.中藥對癲癇神經(jīng)保護作用的研究進展［J］.中風與神經(jīng)疾病雜志，2011，28（4）：381-382.

［9］舒錦.柴貝止癇湯輔助治療難治性癲癇臨床觀察［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，21（18）：1973-1974.

［2016－06－10收稿，2016－07－07修回］［本文編輯：劉一洋］

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10.14172/j.issn1671-4008.2017.01.018

250031山東濟南，濟南軍區(qū)總醫(yī)院中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合科（孫洋馨，王翔艷）

王翔艷，Email：mail_wxy@sina.com