冠心病患者血清中趨化因子CXC配體5的表達及其臨床意義

王環(huán)宇 張福宸 李大鵬 張立敏 張明亮

(佳木斯市中心醫(yī)院心內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154002)

冠心病患者血清中趨化因子CXC配體5的表達及其臨床意義

王環(huán)宇 張福宸 李大鵬 張立敏 張明亮

(佳木斯市中心醫(yī)院心內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154002)

目的 研究不同臨床類型冠心病(CHD)患者和正常人血清中趨化因子CXC配體(L)5蛋白的表達差異。方法 酶聯(lián)免疫吸附法檢測59例CHD患者和23例正常人血清中CXCL5蛋白的表達。結(jié)果 正常對照組、穩(wěn)定型心絞痛(SAP)組、不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)組和急性心肌梗死(AMI)組血清中的CXCL5蛋白水平分別為(63.47±5.67)、(64.37±7.26)、(69.74±7.99)和(70.84±9.44)ng/ml，與正常對照組和SAP組比較，UAP組和AMI組顯著增高(P< 0.05)；與血清CXCL5水平<60 ng/ml組比較，CHD組血清CXCL5水平>70 ng/ml組Gensini評分顯著增高(P<0.05)。結(jié)論 血清CXCL5水平與CHD病情具有相關(guān)性，其可能作用一個經(jīng)典的炎癥因子參與CHD進程。檢測血清CXCL5的水平和針對CXCL5相關(guān)治療可為CHD的臨床診斷和治療提供新的標志物和靶點。

冠心病；趨化因子CXC配體(L)5；Gensini評分

研究表明〔1〕，近10年我國冠狀動脈硬化性心臟病(CHD)的發(fā)病率增加了2～3倍，而急性心肌梗死(AMI)病例增加了2倍以上。CHD的發(fā)病機制至今尚未完全闡明，目前認為其發(fā)病與多種因素相關(guān)，包括遺傳、環(huán)境、飲食習(xí)慣等。炎癥反應(yīng)在CHD的形成與發(fā)展中亦扮演著重要角色〔2〕。趨化因子屬于細胞因子超家族中的一類小分子分泌性蛋白質(zhì)，其可通過與其特異性的細胞膜表面G蛋白耦聯(lián)受體結(jié)合，吸引、活化及調(diào)節(jié)多種白細胞的遷移而參與炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答〔3〕。本研究觀察不同臨床類型CHD患者和正常人血清中趨化因子CXC配體(L)5蛋白的表達差異，以期明確其在CHD的作用及其與CHD程度的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2013年6月至2016年3月經(jīng)佳木斯市中心醫(yī)院冠狀動脈造影確診的CHD病例59例，男28例，女31例；其中AMI 18例，不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)21例，穩(wěn)定型心絞痛(SAP)20例，年齡42～85(平均63.9)歲。排除先天性心臟病、自身免疫性疾病、風(fēng)濕性疾病、感染性疾病及腫瘤患者。同期的體檢健康者23例作為正常對照組，男10例，女13例；年齡44～83(平均62.6)歲。各組年齡、性別構(gòu)成無顯著差異(P>0.05)。

1.2 酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測CXCL5的表達 受檢者清晨空腹抽取靜脈血5 ml，3 000 r/min離心5 min，小心吸取上層血清，并于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆?。待所有樣本收集完畢后，用ELISA法檢測血清中CXCL5的表達情況，具體操作如下：將不同濃度的重組人CXCL5標準品0.1 ml依次加入96孔板中，同時將各樣本0.1 ml也分別加96孔板中，37℃孵育90 min；甩去板內(nèi)液體，對著吸水紙拍幾下，勿洗；將兔抗人CXCL5一抗(1∶10 000)0.1 ml加入96孔板中，37℃孵育60 min；0.01 mol/L,磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3×3 min；加入生物素標記小鼠抗兔IgG 0.1 ml，37℃孵育20 min；0.01 mol/L PBS洗滌3×3 min；加入二抗工作液，37℃孵育20 min，0.01 mol/L PBS洗滌5×3 min；每孔加入37℃平衡顯色液，37℃避光顯色20 min；每孔加入100 μl TBS終止液；酶標儀在450 nm處讀取OD值；繪制標準曲線，利用公式計算出各樣本濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行方差分析和q檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 CHD患者血清高表達CXCL5 與正常對照組〔(63.47±5.67)ng/ml〕和SAP組〔(64.37±7.26)ng/ml〕比較，UAP組〔(69.74±7.99)ng/ml〕和AMI組CXCL5蛋白表達〔(70.84±9.44)ng/ml〕顯著增高(P<0.05)。

2.2 CHD患者血清CXCL5濃度與Gensini積分呈正相關(guān) CHD患者血清中CXCL5濃度與年齡不具有相關(guān)性，但與Gensini評分具有相關(guān)性，與血清CXCL5濃度<60 ng/ml亞組比較，CHD患者血清CXCL5濃度60～70和>70 ng/ml亞組的Gensini評分顯著增高(P< 0.05)。見表1。

CXCL5濃度(ng/ml)n年齡(歲)Gensini評分<601662.69±13.5952.19±10.6360～701762.47±13.1467.18±20.931)>702665.62±11.6065.72±18.861)

與<60 ng/ml比較：1)P<0.05

3 討 論

目前普遍認為CHD的發(fā)生與吸煙、高血壓、高血脂、糖尿病、肥胖等因素密切相關(guān)〔4，5〕。但也有研究表明動脈粥樣硬化也與炎癥反應(yīng)有關(guān)，是一種慢性炎癥性疾，在動脈粥樣硬化斑塊中有包括巨噬細胞、淋巴細胞和肥大細胞等大量炎性細胞的浸潤，這些炎性細胞可通過分泌的各種細胞因子，參與動脈粥樣硬化的發(fā)展與演進過程〔6〕。根據(jù)羧基端兩個保守的半胱氨酸殘基的位置，趨化因子可被分為4個高保守的亞家族，它們分別為CXC、CC、C和CX3C等(C為半胱氨酸，X為任意氨基酸)。另外，依據(jù)是否存在谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(ELR)結(jié)構(gòu)，CXC亞家族可被進一步分為ELR+CXC和ELR-CXC兩類〔7〕。關(guān)于趨化因子與CHD的關(guān)系，國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)進行了大量研究，結(jié)果表明各類趨化因子在CHD形成和發(fā)展中的作用不盡相同〔8〕。作為一種多效性趨化因子，CXCL12可直接抑制血小板活化，而后者可加重動脈粥樣硬化的形成〔9〕。Yamaguchi等〔10〕研究顯示，CXCL12可經(jīng)PI3K/Akt 信號通路參與心血管疾病的修復(fù)過程，其中包括心肌細胞修復(fù)、新生血管的形成和心肌梗死后心功能的恢復(fù)。由此可見，CXCL12可通過抑制血小板活化、促進新生血管的形成及恢復(fù)梗死后心臟功能等途徑，來抑制CHD的發(fā)展、改善CHD的癥狀。同樣，CCL21及其受體CCR7在動脈粥樣硬化斑塊的形成中也發(fā)揮抑制作用〔11〕。但與CXCL12和CCL21不同的是，CXCL16在CHD中可促進斑塊形成及不穩(wěn)性，甚至誘發(fā)斑塊出血和斑塊破裂〔12〕。CXCL5屬于ELR+CXCL類趨化因子，作為炎性因子，CXCL5可以參與先天性和后天性免疫應(yīng)答，并在動脈粥樣硬化中發(fā)揮重要作用〔13，14〕。研究表明，CXCL5可通過調(diào)節(jié)巨噬細胞活化，增加膽固醇外流調(diào)節(jié)蛋白ABCA1的表達及增強巨噬細胞的膽固醇外流活性來調(diào)節(jié)泡沫細胞的形成，最終參與動脈粥樣硬化的發(fā)展〔13〕。另外，作為CXCL5的唯一特異性受體，CXCR2也已被報道在動脈粥樣硬化損傷進程中，參與巨噬細胞積蓄〔15〕。本研究結(jié)果提示，血清CXCL5的濃度與CHD病情具有相關(guān)性，其可能作用一個經(jīng)典的炎癥因子參與了CHD的進程。檢測血清CXCL5的水平，可為CHD的臨床診斷和病程評估提供參考依據(jù)。

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12 Huang M，Han Y，Zhang X，etal.An intron polymorphism in the CXCL16 gene is associated with increased risk of coronary artery disease in Chinese Han population：a large angiography-based study〔J〕.Atherosclerosis，2010；210(1)：160-5.

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15 Boisvert WA，Santiago R，Curtiss LK，etal.A leukocyte homologue of the IL-8 receptor CXCR-2 mediates the accumulation of macrophages in atherosclerotic lesions of LDL receptor-deficient mice〔J〕.J Clin Invest，1998；101(2)：353-63.

〔2016-03-17修回〕

(編輯 苑云杰)

張明亮(1977-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事心血管介入研究。

王環(huán)宇(1976-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事心血管介入研究。

R541.1

A

1005-9202(2017)07-1640-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.07.030