• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    綠頭野鴨蛋品質(zhì)研究及蛋殼強(qiáng)度相關(guān)基因的篩選

    2017-04-17 08:38:59梁素蕓聞治國(guó)侯水生李復(fù)煌
    中國(guó)畜牧雜志 2017年4期
    關(guān)鍵詞:野鴨蛋殼測(cè)序

    梁素蕓,聞治國(guó),謝 明,黃 葦,侯水生*,李復(fù)煌

    (1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所,北京 100193 2. 北京市畜牧總站,北京 100107)

    綠頭野鴨蛋品質(zhì)研究及蛋殼強(qiáng)度相關(guān)基因的篩選

    梁素蕓1,聞治國(guó)1,謝 明1,黃 葦1,侯水生1*,李復(fù)煌2

    (1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所,北京 100193 2. 北京市畜牧總站,北京 100107)

    本試驗(yàn)選取體重、周齡一致的100只綠頭野鴨,對(duì)其蛋品質(zhì)進(jìn)行測(cè)定并進(jìn)行相關(guān)分析,測(cè)定指標(biāo)包括蛋殼顏色、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋形指數(shù)、蛋白高度、哈氏單位和蛋黃顏色,同時(shí)通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序篩選了與蛋殼強(qiáng)度相關(guān)的候選基因。結(jié)果表明:不同蛋殼顏色的鴨蛋之間蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度和哈氏單位有顯著差異(P<0.05);綠頭鴨大部分蛋品質(zhì)性狀之間相關(guān)性顯著,其中蛋殼厚度與蛋殼強(qiáng)度呈顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.8742,而蛋殼顏色作為蛋殼強(qiáng)度的衡量指標(biāo)時(shí),白殼組強(qiáng)度最大,綠殼組次之,黃綠殼組最?。≒<0.01);通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)Φ皻?qiáng)度進(jìn)行差異表達(dá)模式對(duì)比分析,共找到差異表達(dá)基因325個(gè),其中149個(gè)基因表達(dá)量上調(diào), 176個(gè)基因表達(dá)量下調(diào),與蛋殼強(qiáng)度相關(guān)的基因有CACNA1I、CACNB4、CALN、CACNA1S、LOC101801793等17個(gè)基因,這些基因主要參與了鈣離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、鈣離子結(jié)合、鈣離子釋放等生物學(xué)過(guò)程,本研究結(jié)果為進(jìn)一步研究蛋殼強(qiáng)度差異的分子機(jī)理提供了基礎(chǔ)。

    綠頭野鴨;蛋品質(zhì);轉(zhuǎn)錄組測(cè)序;基因篩選

    禽蛋品質(zhì)直接關(guān)系到禽蛋產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和人類的健康生活,蛋殼的破損會(huì)給禽蛋產(chǎn)業(yè)造成巨大的損失[1],因此蛋殼質(zhì)量在整個(gè)蛋品質(zhì)中至關(guān)重要。禽類的品種和產(chǎn)蛋年齡[2-4]、攝入的營(yíng)養(yǎng)[5]、產(chǎn)蛋環(huán)境[6]以及蛋在子宮中的時(shí)間長(zhǎng)短都會(huì)對(duì)蛋殼強(qiáng)度造成影響[7],而蛋殼的結(jié)構(gòu)屬性(蛋殼厚度)和物質(zhì)屬性(超微結(jié)構(gòu))可能是蛋殼強(qiáng)度出現(xiàn)差異的主要原因[8]。蛋殼顏色一直作為衡量蛋殼強(qiáng)度的一種重要指標(biāo)[9],研究發(fā)現(xiàn)綠殼蛋的蛋殼主要由膽綠素和膽綠素鋅螯合物2種色素組成[10-11],綠殼蛋的藍(lán)綠色度與蛋殼中膽綠素的濃度呈顯著相關(guān)[12-13]。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn),在雞產(chǎn)蛋過(guò)程中,子宮部位基因的表達(dá)會(huì)影響蛋殼質(zhì)量,禽類卵清蛋白基因(OVAL)、鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶基因家族(ATP2家族)[14]、鈣離子通道上皮亞基家族(SCNN1家族)[15]等基因均被發(fā)現(xiàn)與蛋殼強(qiáng)度的差異形成有關(guān)。而水禽子宮組織基因表達(dá)是否影響蛋殼質(zhì)量,目前未見(jiàn)報(bào)道。因此,本實(shí)驗(yàn)以綠頭鴨為研究對(duì)象,對(duì)蛋品質(zhì)性狀進(jìn)行相關(guān)性分析,并對(duì)蛋殼強(qiáng)度相關(guān)基因進(jìn)行篩選,為蛋鴨分子育種提供一定的理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)所用的綠頭野鴨均來(lái)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所試驗(yàn)基地。選取健康、體重、周齡大小一致的母鴨100只,每只鴨均單籠飼養(yǎng),營(yíng)養(yǎng)水平一致,自由采食,最后收集300枚蛋用于測(cè)定蛋品質(zhì)。挑選高低2個(gè)蛋殼強(qiáng)度組的蛋鴨各2只,采集子宮組織樣品,迅速置于液氮中冷卻,保存于-80℃超低溫冰箱,用于總RNA的提取。

    1.2 蛋品質(zhì)測(cè)定指標(biāo)與方法 利用 QCR測(cè)色儀進(jìn)行蛋殼顏色測(cè)定,以純黑色為0,純白色為81.2進(jìn)行校正,數(shù)據(jù)越大表示蛋殼顏色越淺。蛋殼反射率(L* value)進(jìn)行三點(diǎn)(蛋殼的銳端、頓端和中間)測(cè)定,結(jié)果取其平均值。蛋殼強(qiáng)度用蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀( ROBOT-MATION MODEL-Ⅲ)將鴨蛋尖端向上、垂直豎放測(cè)定;蛋殼厚度用蛋殼厚度測(cè)定儀(PEACOCK)測(cè)定,每個(gè)蛋測(cè)定鈍端、銳端和中間三點(diǎn),結(jié)果取其平均值;蛋形指數(shù)用蛋形指數(shù)測(cè)定儀測(cè)定,量取短軸和長(zhǎng)軸長(zhǎng)度,結(jié)果取長(zhǎng)軸與短軸的比值。蛋黃高度、哈氏單位、蛋黃顏色均由EMT5200多功能蛋品分析儀測(cè)定。

    1.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及差異基因篩選 樣品總RNA提取步驟按照Trizol法進(jìn)行,使用 Oligotex mRNA Midi試劑盒(Qiagen,德國(guó))進(jìn)行純化提取的mRNA樣品。RNA 的質(zhì)量通過(guò)使用1.0%瓊脂糖凝膠電泳和核酸分光光度計(jì)(Nanodrop ND-1000?)檢測(cè)260 nm吸光度,當(dāng)260/280 nm下測(cè)定值大于1.8時(shí),RNA質(zhì)量較好。RNA完整性通過(guò)Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer 檢 測(cè) RIN值, 當(dāng)RIN值大于8時(shí)被認(rèn)為RNA比較完整。所有RNA樣品均送到北京貝瑞和康生物技術(shù)有限公司進(jìn)行mRNA分離、cDNA文庫(kù)構(gòu)建和測(cè)序。測(cè)序平臺(tái)為 Illumina HiSeqTM2500。下機(jī)數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)質(zhì)控,對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估和可信度的分析,通過(guò)質(zhì)量控制得到質(zhì)量較高的序列,利用Tophat將數(shù)據(jù)映射到基因組上,然后進(jìn)行堿基并鑒別遺傳變異。篩選差異表達(dá)基因的過(guò)濾條件為Probability ≥ 80%,SD = 2.0,篩選顯著差異基因的過(guò)濾條件為logFC > 2 或logFC < -2; P ≤ 0.05。根據(jù)基因的差異表達(dá)進(jìn)行功能注釋和富集分析。

    1.4 統(tǒng)計(jì)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 8.0中One Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,各處理間平均值比較采用Duncan氏多重比較進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn),結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean ± SD) 表示,以P <0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    2.1 蛋品質(zhì)性狀及其相關(guān)分析 蛋品質(zhì)間的表型性狀相關(guān)分析見(jiàn)表1。由表1可以看出,不同顏色蛋殼具有顯著的蛋殼反射率(P<0.05);綠頭野鴨群體中,白殼組的蛋殼強(qiáng)度大于綠殼組和黃綠殼組(P<0.01),而白殼組的蛋殼厚度極顯著低于綠殼組和黃綠殼組(P<0.01),隨著蛋殼顏色的加深,蛋殼強(qiáng)度逐漸降低,說(shuō)明在綠頭野鴨群體中蛋殼顏色可以作為一種衡量蛋殼強(qiáng)度的指標(biāo);3組在蛋形指數(shù)上呈現(xiàn)顯著差異(P<0.05);白殼組在蛋白高度與哈氏單位上均優(yōu)于綠殼組和黃綠殼組,3組蛋黃顏色無(wú)顯著差異。

    對(duì)7個(gè)蛋品質(zhì)進(jìn)行相關(guān)性分析(表2)發(fā)現(xiàn),蛋殼強(qiáng)度與蛋殼厚度的相關(guān)系數(shù)為0.8742,具有較強(qiáng)相關(guān)性;蛋殼強(qiáng)度與蛋殼顏色、蛋形指數(shù)、蛋白高度、哈氏單位屬于中等相關(guān)水平;蛋殼顏色與蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度、哈氏單位屬于中等相關(guān)水平。

    2.2 蛋殼強(qiáng)度相關(guān)差異基因的分析 本試驗(yàn)中,高低蛋殼強(qiáng)度組強(qiáng)度大小分別為3.968 kg/cm2、3.693kg/cm2,呈極顯著差異。對(duì)不同蛋殼強(qiáng)度的個(gè)體進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,分析差異表達(dá)基因,共篩選出325條差異表達(dá)基因。與低蛋殼強(qiáng)度組相比,高蛋殼強(qiáng)度組表達(dá)量顯著上調(diào)的基因有149個(gè),表達(dá)量顯著下調(diào)的基因有176個(gè)。

    表1 綠頭野鴨不同顏色(L* value)蛋的蛋品質(zhì)比較

    表2 蛋品質(zhì)性狀間的相關(guān)系數(shù)

    表3 與蛋殼強(qiáng)度相關(guān)的差異表達(dá)基因

    2.3 與蛋殼強(qiáng)度相關(guān)基因的篩選 本研究從325個(gè)顯著差異基因中篩選了17個(gè)與綠頭鴨蛋殼強(qiáng)度相關(guān)的重要基因,包括CACNA1S、CACNB4、LOC101801793、CAMK2A、CALN1等,如表3所示。 這些差異基因大部分與鈣離子代謝相關(guān),主要參與鈣離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、鈣離子結(jié)合、鈣離子的釋放等,表明鈣離子在蛋殼強(qiáng)度形成過(guò)程中具有重要的作用。

    3 討 論

    3.1 蛋品質(zhì)性狀及相關(guān)分析 鳥(niǎo)類蛋殼顏色的變化多種多樣,而這種顏色的變化主要取決于膽綠素與原卟啉的含量,膽綠素濃度越高,蛋殼顏色越深,隨之蛋殼反射率越低。Daniel Hanley等[16]為了更好地解釋蛋殼顏色的變化而建立了蛋殼顏色的混合模型,模型基于膽綠素與原卟啉濃度的多少,利用蛋殼碳酸鈣的反射率進(jìn)行模型的校正,結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛋殼顏色的變化與膽綠素濃度直接相關(guān),尤其是與蛋殼的反射率結(jié)合起來(lái)測(cè)定結(jié)果更加可靠,這說(shuō)明L* value對(duì)蛋殼顏色的測(cè)定具有一定的可靠性。本實(shí)驗(yàn)利用L* value對(duì)各品種(系)蛋殼顏色進(jìn)行分組且結(jié)果呈極顯著差異,證明L* value對(duì)蛋殼顏色的測(cè)定具有一定的可靠性,這與Reynolds[17]等的結(jié)論一致。

    本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)隨著蛋殼顏色的加深,蛋殼強(qiáng)度逐漸降低,說(shuō)明在綠頭野鴨群體中蛋殼顏色可以作為一種衡量蛋殼強(qiáng)度的指標(biāo)。Campo等[18]最早提出在未受到人工選擇的群體中,蛋殼顏色與蛋殼的強(qiáng)度存在顯著的正相關(guān),隨著蛋殼顏色的變深,蛋殼質(zhì)量越好,而人工選擇會(huì)根據(jù)不同的選擇指標(biāo)而改變蛋殼強(qiáng)度的這一趨勢(shì)。這同時(shí)也意味著,在每個(gè)群體中,隨著蛋殼顏色的變化,強(qiáng)度也會(huì)呈現(xiàn)不同的變化。Ingram等[4]認(rèn)為若只用蛋殼顏色去衡量蛋殼質(zhì)量,結(jié)果并不準(zhǔn)確。Carter等[19]也提出蛋殼顏色作為衡量蛋殼質(zhì)量的指標(biāo)并不適用于所有的品系,本研究結(jié)果只適用綠頭野鴨。因此,育種工作者在蛋鴨育種工作中應(yīng)先進(jìn)行顏色與強(qiáng)度的分析,再根據(jù)不同的情況進(jìn)行選擇。

    3.2 與蛋殼強(qiáng)度相關(guān)的差異基因篩選 與蛋殼礦化過(guò)程有關(guān)的子宮部基因可能是導(dǎo)致蛋殼質(zhì)量變異的關(guān)鍵因素,因此,研究蛋殼礦化時(shí)期影響碳酸鈣沉積的關(guān)鍵候選基因及其遺傳變異是新的研究方向。為了尋找蛋殼強(qiáng)度差異形成的分子機(jī)制,本研究采用RNA-seq技術(shù)對(duì)不同強(qiáng)度差異組的鴨子宮進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序及對(duì)比分析。在本研究篩選到的325個(gè)差異表達(dá)的基因中,共找到17個(gè)與鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)的基因,主要參與鈣離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、鈣離子結(jié)合、鈣離子的釋放等過(guò)程。與鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)的基因如ATP家族、SCNN1家族與OPN等基因位于其中,這些家族基因通過(guò)鈉、鈣等陽(yáng)離子通道的改變而改變蛋殼質(zhì)量。除了上述出現(xiàn)的基因之外,本研究發(fā)現(xiàn)了包括了CA家族(CALN、CAMK、CALM、CACNB4等)與手鈣結(jié)合蛋白(NECAB2)等一系列新的差異基因,這些基因也是通過(guò)控制鈣電壓門(mén)控通道進(jìn)而改變蛋殼中鈣離子的轉(zhuǎn)運(yùn),說(shuō)明鈣離子通道的改變?cè)诘皻?qiáng)度差異形成的分子機(jī)制中占據(jù)重要地位。這些基因的篩選為鴨蛋殼強(qiáng)度的分子選育提供了理論基礎(chǔ)。

    4 結(jié) 論

    本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較綠頭野鴨群體蛋殼顏色與質(zhì)量之間的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)蛋殼顏色可作為綠頭野鴨蛋殼強(qiáng)度的衡量指標(biāo),其中白殼鴨蛋的蛋殼強(qiáng)度最大。采用高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序找到17個(gè)與蛋殼強(qiáng)度相關(guān)的差異基因,這些基因主要參與了鈣離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、鈣離子結(jié)合、鈣離子釋放等生物學(xué)過(guò)程,本研究結(jié)果為進(jìn)一步研究蛋殼強(qiáng)度差異的分子機(jī)理提供了基礎(chǔ)。

    [1] Roberts, Juliet R. Factors affecting egg internal quality and egg shell quality in laying hens [J]. J Food Prot, 2004, 41(3): 161-177.

    [2] Silversides F , Scott T. Effect of storage and layer age on quality of eggs from two lines of hens [J]. Poult Sci, 2001,80(8): 1240-1245.

    [3] Scott T, Silversides F .The ef f ect of storage and strain of hen on egg quality[J]. Poult Sci, 2000, 79(12): 1725-1729.

    [4] Ingram D, Hatten L, Homan K. A study on the relationship between eggshell color and eggshell quality in commercial broiler breeders[J]. Poult Sci, 2008, 7: 700-703.

    [5] Franchini A, Sirri F,Tallarico N, et al. Oxidative stability and sensory and functional properties of eggs from laying hens fed supranutritional doses of vitamins E and C [J]. Poult Sci, 2002, 81(11): 1744-1750.

    [6] Altan A, Altan ?,?zkan S, et al. Ef f ects of dietary sodium bicarbonate on egg production and egg quality of laying hens during high summer temperature [J]. Archiv für Gef l ügelkunde, 2000,64(6): 269-272.

    [7] Potts P L, Washburn K. Shell evaluation of white and brown egg strains by deformation, breaking strength, shell thickness and specif i c gravity [J]. Poult Sci, 1974, 53(3): 1123-1128.

    [8] Parsons A. Structure of the eggshell [J]. Poult Sci, 1982, 61(10): 2013-2021.

    [9] Godfrey G F. Shell color as a measure of egg shell quality [J]. Poult Sci, 1949, 28(1): 150-151.

    [10] Kennedy G, Vevers H. A survey of avian eggshell pigments [J]. Comp Biochem Physiol B: Biochem Mol Biol, 1976, 55(1): 117-123.

    [11] Schwartz S, Raux W A, Schacter B A, et al. Loss of hereditary uterine protoporphyria through chromosomal rearrangement in mutant Rhode Island Red hens [J]. Int J Biochem, 1980, 12(5): 935-940.

    [12] Moreno J, Lobato E, Morales J, et al. Experimental evidence that egg color indicates female condition at laying in a songbird[J]. Behavi Ecol, 2006, 17(4): 651-655.

    [13] Morales J, Ruuskanen S, Laaksonen T, et al. Variation in eggshell traits between geographically distant populations of pied f l ycatchers Ficedula hypoleuca [J]. J Avian Bioly, 2013, 44(2): 111-120.

    [14] Duan Z, Chen S, Sun C, et al. Polymorphisms in ion transport genes are associated with eggshell mechanical property[J]. PloS one, 2015, 10(6): e0130160.

    [15] Fan Y F, HOU Z C, YI G Q, et al.The sodium channle gene family is specially expressed in henuterus and associted with eggshell quality traits[J]. BMC Genet,2013,14:90

    [16] Hanley D, Grim T, Cassey P, et al. Not so colourful after all: eggshell pigments constrain avian eggshell colour space[J]. Biol lett, 2015,11(5): 20150087.

    [17] Reynolds S J, Martin G R, Cassey P. Is sexual selection blurring the functional signif i cance of eggshell coloration hypotheses? [J].Animal Behaviour, 2009,78(1): 209-215.

    [18] Campo J, Escudero J. Relationship between egg‐shell colour and two measurements of shell strength in the Vasca breed [J].Brit Poult Sci, 1984, 25(4): 467-476.

    [19] Carter T. The hen's egg: relationships of seven characteristics of the strain of hen to the incidence of cracks and other shell defects [J]. Brit Poult Sci, 1975, 16(3): 289-296.

    Study on Quality of Mallard Eggs and Screening of Genes Related to Eggshell Strength

    LIANG Su-yun, WEN Zhi-guo, XIE Ming, HUANG Wei, HOU Shui-sheng*, LI Fu-huang2
    ( 1.Insitite of Animal Science of CAAS, Beijing 100193,China 2.Beijing Animal Husbandry Station, Beijing 1000107, china)

    A total of 100 healthy and same age mallard were selected were selected to analysis their eggs quality, including eggshell color, eggshell strength, eggshell thickness, egg shape index, White height, Haugh unit value and egg yolk color, in addition ,candidate genes related to eggshell strength were screened by transcriptome sequencing. The results showed that there were significant differences in egg shape index, eggshell strength, White height and Haugh unit value(P<0.05). The correlation coefficient of eggshell strength and thickness was 0.8742,while the eggshell color can be as a measure of egg quality in mallard, the strength of white shell was largest and yellow-green shell was the smallest(P<0.001).A total of 325 dif f erentially expressed genes were identif i ed, among which 149 genes were up-regulated and 176 genes were down-regulated. The genes related to shell strength were CACNA1I,CACNB4,CALN,CACNA1S,L OC101801793, are involved in the processes of calcium ion binding , calcium ion transmembrane transport and calcium release. The results provide a basis for further study on the molecular mechanism of the dif f erences in eggshell strength.

    Mallard; Eggshell strength; Transcriptome sequencing; Gene screening

    S834.2

    A

    10.19556/j.0258-7033.2017-04-028

    2016-11-12;

    2017-01-10

    現(xiàn)代水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-43)

    梁素蕓(1990-),女,山東滕州人,在讀碩士,研究方向?yàn)榧仪葸z傳育種,E-mail:liangsu_yun@163.com

    * 通訊作者:侯水生(1959-),研究員,博士生導(dǎo)師,研究方向?yàn)閯?dòng)物遺傳育種與營(yíng)養(yǎng),E-mail:houss@263.net

    猜你喜歡
    野鴨蛋殼測(cè)序
    野鴨
    杰 Sir 帶你認(rèn)識(shí)宏基因二代測(cè)序(mNGS)
    新民周刊(2022年27期)2022-08-01 07:04:49
    二代測(cè)序協(xié)助診斷AIDS合并馬爾尼菲籃狀菌腦膜炎1例
    傳染病信息(2021年6期)2021-02-12 01:52:58
    蛋殼變變變
    神奇的小蛋殼
    史上最難撩的四大星座
    意林(2018年2期)2018-02-01 12:56:02
    三只野鴨
    小布老虎(2017年2期)2017-07-31 17:14:39
    捉野鴨
    野鴨育雛期和育成期的飼養(yǎng)管理
    基因捕獲測(cè)序診斷血癌
    日本五十路高清| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 精品日产1卡2卡| 热99re8久久精品国产| 给我免费播放毛片高清在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 一进一出抽搐动态| 亚洲人成电影免费在线| 男人和女人高潮做爰伦理| 午夜福利在线观看吧| 啪啪无遮挡十八禁网站| 搡老妇女老女人老熟妇| 男女之事视频高清在线观看| 日韩有码中文字幕| 91麻豆av在线| 又爽又黄无遮挡网站| 国产成人啪精品午夜网站| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美性感艳星| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 内射极品少妇av片p| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲av电影在线进入| 精品人妻熟女av久视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 国语自产精品视频在线第100页| 久久久色成人| 亚洲专区国产一区二区| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 露出奶头的视频| 日韩有码中文字幕| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 麻豆久久精品国产亚洲av| 美女黄网站色视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 99久国产av精品| 久久久久久久久久成人| 少妇丰满av| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产亚洲欧美98| 国产精品不卡视频一区二区 | 97热精品久久久久久| 免费黄网站久久成人精品 | 男插女下体视频免费在线播放| 国产av一区在线观看免费| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产亚洲精品久久久com| 久久久久精品国产欧美久久久| 一级黄色大片毛片| 国产精品一区二区三区四区久久| 麻豆国产av国片精品| 国产 一区 欧美 日韩| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲黑人精品在线| 精品久久久久久久久久久久久| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久国产精品人妻蜜桃| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲av电影在线进入| 老司机午夜十八禁免费视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 黄片小视频在线播放| 午夜免费激情av| 亚洲人成网站高清观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 午夜激情欧美在线| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 午夜福利欧美成人| 97热精品久久久久久| 亚洲天堂国产精品一区在线| 三级国产精品欧美在线观看| 丰满乱子伦码专区| 中出人妻视频一区二区| av天堂中文字幕网| 五月玫瑰六月丁香| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 欧美日韩福利视频一区二区| aaaaa片日本免费| 色综合欧美亚洲国产小说| 中文在线观看免费www的网站| 午夜精品一区二区三区免费看| 99久久99久久久精品蜜桃| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 欧美黑人巨大hd| 俺也久久电影网| 麻豆国产av国片精品| 欧美丝袜亚洲另类 | 国内精品一区二区在线观看| 黄片小视频在线播放| 精品欧美国产一区二区三| 国产欧美日韩精品一区二区| 午夜免费成人在线视频| 亚洲五月天丁香| 中文在线观看免费www的网站| 动漫黄色视频在线观看| 综合色av麻豆| 99久国产av精品| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 宅男免费午夜| 午夜激情欧美在线| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久99热这里只有精品18| 欧美一区二区国产精品久久精品| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产成人影院久久av| 免费在线观看日本一区| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 精品国内亚洲2022精品成人| 91九色精品人成在线观看| av福利片在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 日本五十路高清| 日本精品一区二区三区蜜桃| 成人午夜高清在线视频| 天天躁日日操中文字幕| 高清毛片免费观看视频网站| 看黄色毛片网站| 精品久久久久久,| 日韩av在线大香蕉| 日日夜夜操网爽| 午夜免费成人在线视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 免费在线观看日本一区| www日本黄色视频网| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲精品影视一区二区三区av| 99在线视频只有这里精品首页| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久久国产成人免费| 久久精品国产亚洲av天美| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| netflix在线观看网站| 身体一侧抽搐| 欧美一区二区亚洲| 国产在视频线在精品| av在线蜜桃| 最近视频中文字幕2019在线8| 婷婷丁香在线五月| 亚洲午夜理论影院| .国产精品久久| 久久精品国产亚洲av天美| 老司机深夜福利视频在线观看| 日韩免费av在线播放| 长腿黑丝高跟| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 窝窝影院91人妻| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 欧美一区二区国产精品久久精品| 欧美成人一区二区免费高清观看| 赤兔流量卡办理| 亚洲熟女精品中文字幕| 五月天丁香电影| 伦精品一区二区三区| 亚洲伊人久久精品综合| 国产视频内射| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 嫩草影院精品99| 中文字幕免费在线视频6| 天堂中文最新版在线下载 | 午夜激情福利司机影院| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久ye,这里只有精品| 成年av动漫网址| 身体一侧抽搐| 美女内射精品一级片tv| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久99热这里只有精品18| 国产美女午夜福利| av天堂中文字幕网| 午夜免费鲁丝| 欧美97在线视频| 欧美日韩视频精品一区| 熟女人妻精品中文字幕| 在线a可以看的网站| 精品一区在线观看国产| 在线观看人妻少妇| 只有这里有精品99| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲,欧美,日韩| 一级毛片 在线播放| 久久久久国产精品人妻一区二区| 最近中文字幕2019免费版| 久久人人爽人人爽人人片va| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 国产乱来视频区| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 免费大片18禁| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲最大成人中文| 国产一区二区在线观看日韩| 成人特级av手机在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 国产在线一区二区三区精| 看免费成人av毛片| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久6这里有精品| 亚洲成人一二三区av| 99久久精品一区二区三区| 日韩一本色道免费dvd| 国产男人的电影天堂91| 在线观看免费高清a一片| 伊人久久国产一区二区| 久久女婷五月综合色啪小说 | 观看美女的网站| 人妻系列 视频| 国产伦理片在线播放av一区| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 人人妻人人看人人澡| 2022亚洲国产成人精品| 久久精品综合一区二区三区| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲最大成人中文| 国产伦精品一区二区三区视频9| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 99久久九九国产精品国产免费| 26uuu在线亚洲综合色| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 九九爱精品视频在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产男女内射视频| 韩国高清视频一区二区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产精品人妻久久久影院| 国产在视频线精品| 欧美成人午夜免费资源| 中国国产av一级| 秋霞在线观看毛片| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美日韩视频精品一区| 久久久久久久精品精品| 热re99久久精品国产66热6| 黄色日韩在线| 精品一区二区免费观看| 精品久久久久久久末码| 成年免费大片在线观看| 熟女av电影| 日韩精品有码人妻一区| 能在线免费看毛片的网站| 美女高潮的动态| 伦精品一区二区三区| 国产精品国产三级专区第一集| 午夜激情久久久久久久| 少妇 在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 少妇熟女欧美另类| 欧美潮喷喷水| 国产精品国产三级专区第一集| 六月丁香七月| 中文字幕免费在线视频6| 九草在线视频观看| 亚洲综合色惰| 高清欧美精品videossex| av专区在线播放| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲,一卡二卡三卡| 男女无遮挡免费网站观看| 欧美日韩视频精品一区| 久久午夜福利片| 成人一区二区视频在线观看| 国产乱人视频| 久久影院123| 亚洲av不卡在线观看| 久久久久久久久久久免费av| av免费在线看不卡| 毛片女人毛片| 国产日韩欧美在线精品| 午夜福利高清视频| 国产亚洲最大av| 超碰97精品在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 成人国产av品久久久| www.av在线官网国产| 国产精品成人在线| 一级毛片久久久久久久久女| 晚上一个人看的免费电影| 欧美区成人在线视频| xxx大片免费视频| 午夜福利视频精品| 中文字幕亚洲精品专区| 国产成人freesex在线| 精品人妻视频免费看| 色视频在线一区二区三区| 久久精品久久久久久久性| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 亚洲精品日本国产第一区| 欧美潮喷喷水| 成人黄色视频免费在线看| 丰满少妇做爰视频| 18禁动态无遮挡网站| 女人久久www免费人成看片| 免费av毛片视频| 日韩亚洲欧美综合| 日韩成人伦理影院| eeuss影院久久| 在线观看免费高清a一片| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲精品国产av蜜桃| 免费av不卡在线播放| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 男男h啪啪无遮挡| videos熟女内射| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲怡红院男人天堂| 大片免费播放器 马上看| 成人美女网站在线观看视频| 男女边摸边吃奶| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 一区二区三区免费毛片| 乱码一卡2卡4卡精品| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品国产露脸久久av麻豆| 久久久精品欧美日韩精品| 国产 一区 欧美 日韩| 一区二区三区精品91| 大香蕉97超碰在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 五月玫瑰六月丁香| 中文字幕免费在线视频6| 成人毛片a级毛片在线播放| 色哟哟·www| 国产乱来视频区| 伦理电影大哥的女人| 夫妻午夜视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久精品人妻少妇| 亚洲精品影视一区二区三区av| 可以在线观看毛片的网站| eeuss影院久久| 五月天丁香电影| 久久久精品免费免费高清| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲av福利一区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 另类亚洲欧美激情| av播播在线观看一区| 日本av手机在线免费观看| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲在久久综合| av又黄又爽大尺度在线免费看| 毛片一级片免费看久久久久| av国产久精品久网站免费入址| 又爽又黄a免费视频| 久久久亚洲精品成人影院| 观看美女的网站| 美女高潮的动态| 免费av不卡在线播放| 久久精品国产自在天天线| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美高清性xxxxhd video| 日本爱情动作片www.在线观看| 一级黄片播放器| 网址你懂的国产日韩在线| 色吧在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 免费观看av网站的网址| 国产成人福利小说| 51国产日韩欧美| 91精品一卡2卡3卡4卡| av免费观看日本| 欧美成人a在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲av福利一区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 欧美日本视频| 在线观看av片永久免费下载| 18禁在线播放成人免费| 极品教师在线视频| 黄色日韩在线| 777米奇影视久久| 美女高潮的动态| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 三级国产精品片| 成年女人看的毛片在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 成人国产麻豆网| 18禁动态无遮挡网站| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲四区av| 看十八女毛片水多多多| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产成人aa在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 精品一区二区免费观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| av网站免费在线观看视频| 午夜老司机福利剧场| 91狼人影院| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产片特级美女逼逼视频| 女人久久www免费人成看片| 国产精品久久久久久av不卡| 国产午夜福利久久久久久| 下体分泌物呈黄色| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产精品久久久久久精品古装| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 久久99热这里只有精品18| 国产中年淑女户外野战色| 成年女人看的毛片在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产免费又黄又爽又色| 精品久久久久久久久亚洲| 晚上一个人看的免费电影| 日本wwww免费看| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久久成人免费电影| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美97在线视频| 99热网站在线观看| 国产成人a区在线观看| 久久久久久伊人网av| 国产91av在线免费观看| 黄片无遮挡物在线观看| 成年人午夜在线观看视频| 久久久久国产网址| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲性久久影院| 欧美zozozo另类| 波野结衣二区三区在线| av女优亚洲男人天堂| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 精品国产三级普通话版| 国产日韩欧美在线精品| 久久影院123| 大香蕉久久网| 大香蕉97超碰在线| 国产亚洲5aaaaa淫片| 欧美极品一区二区三区四区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 丝袜喷水一区| 久久久久久久午夜电影| 九草在线视频观看| 日本欧美国产在线视频| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲精品国产av蜜桃| 97超视频在线观看视频| 赤兔流量卡办理| av国产精品久久久久影院| 九九在线视频观看精品| 午夜激情福利司机影院| 视频区图区小说| 亚洲在线观看片| 亚洲最大成人av| 黄色一级大片看看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 黄片无遮挡物在线观看| videos熟女内射| 久久久久久国产a免费观看| 人妻一区二区av| av卡一久久| 三级国产精品欧美在线观看| 日本黄色片子视频| 国产精品一及| 在线播放无遮挡| 午夜福利视频精品| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品久久久久久精品古装| 免费av毛片视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费大片18禁| 国产探花极品一区二区| 视频中文字幕在线观看| 高清视频免费观看一区二区| 久久久精品欧美日韩精品| 成人美女网站在线观看视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久女婷五月综合色啪小说 | 九草在线视频观看| 精品一区二区三区视频在线| av播播在线观看一区| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲国产欧美人成| 白带黄色成豆腐渣| 黄色视频在线播放观看不卡| av免费观看日本| 国产成人精品一,二区| 18禁在线播放成人免费| 国产av码专区亚洲av| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲三级黄色毛片| 天美传媒精品一区二区| 永久网站在线| 嘟嘟电影网在线观看| 97超视频在线观看视频| 欧美人与善性xxx| 婷婷色综合www| 亚洲精品,欧美精品| av在线app专区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| av福利片在线观看| 免费在线观看成人毛片| 久久久久久伊人网av| 久久久欧美国产精品| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 久久久亚洲精品成人影院| 99热这里只有精品一区| 麻豆国产97在线/欧美| 少妇高潮的动态图| 国产成人aa在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 看黄色毛片网站| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲精品视频女| 久久久久久久久久久丰满| 欧美国产精品一级二级三级 | 久久久久久久久久成人| 大香蕉97超碰在线| 日本午夜av视频| 联通29元200g的流量卡| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 中文字幕制服av| 精品久久国产蜜桃| 久久女婷五月综合色啪小说 | 人妻夜夜爽99麻豆av| 香蕉精品网在线| 一边亲一边摸免费视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 狂野欧美激情性bbbbbb| 免费av毛片视频| 国产伦理片在线播放av一区| 99久久精品国产国产毛片| 精品人妻视频免费看| 欧美97在线视频| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 新久久久久国产一级毛片| 深爱激情五月婷婷| 欧美xxⅹ黑人| 新久久久久国产一级毛片| 久久久精品94久久精品| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲国产精品成人综合色| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 高清毛片免费看| 搡老乐熟女国产| 高清午夜精品一区二区三区| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲av免费在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 久久久久网色| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲精品成人久久久久久| 国产探花在线观看一区二区| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲精品自拍成人| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产免费一级a男人的天堂| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 一级毛片电影观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 干丝袜人妻中文字幕| 九色成人免费人妻av| 久久女婷五月综合色啪小说 | 午夜福利高清视频| 又爽又黄a免费视频| 黄色怎么调成土黄色| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲精品国产av蜜桃| 搡老乐熟女国产| 国产成人精品久久久久久| 亚洲国产成人一精品久久久| 激情五月婷婷亚洲| 国产黄片美女视频| 乱系列少妇在线播放| 亚洲天堂av无毛| videos熟女内射| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 26uuu在线亚洲综合色| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 少妇的逼水好多| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲欧美日韩东京热| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲电影在线观看av| av女优亚洲男人天堂| 大陆偷拍与自拍| 一本一本综合久久| 男女边摸边吃奶| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 婷婷色av中文字幕| 欧美国产精品一级二级三级 |