流式細胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢在宮頸癌和癌前病變篩查中的意義

曲亞蘭 謝寶芳 李丹陽

流式細胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢在宮頸癌和癌前病變篩查中的意義

曲亞蘭 謝寶芳 李丹陽

目的探討流式細胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢在宮頸癌和癌前病變篩查中的應(yīng)用價值。方法 選取2014年6月—2016年6月在我院就診進行宮頸癌檢查并有活檢結(jié)果的705例病例進行研究，并用流式細胞術(shù)對此705例患者進行DNA含量分析，以DNA指數(shù)(DNA index，DI)、增殖指數(shù)(Proliferative index，PI)值作為DNA含量分析的參數(shù)。結(jié)果 陰道鏡擬診結(jié)果顯示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宮頸癌的檢出率分別為62.2%、78.0%、100%、100%；流式細胞儀檢測DNA倍性在CINⅡ及其以上級別病變(CINⅡ、CINⅢ或CIS和宮頸癌病變)的敏感性為87.7%(213/243)，特異性為90.2%(417/462)。隨著宮頸組織病變程度的加重，DI、PI值均呈上升趨勢，且各組之間進行比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論 流式細胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢可提高宮頸癌和癌前病變診斷率、準確性和敏感性，是適合篩查宮頸癌和癌前病變的工具之一，值得臨床推廣和應(yīng)用。

流式細胞術(shù)；陰道鏡；宮頸癌；篩查

宮頸癌是女性最常見的一種惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率逐年上升并呈年輕化趨勢，早診斷、早治療宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial neoplasi，CIN)是積極防止其進一步發(fā)展為宮頸癌的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[1-2]。為探討流式細胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢在宮頸癌和癌前病變篩查中的應(yīng)用價值，本研究選取2014年6月—2016年6月在我院就診進行宮頸癌檢查并有活檢結(jié)果的705例病例結(jié)果進行了研究，并利用流式細胞術(shù)對此705例患者進行DNA含量分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年6月—2016年6月在我院門診進行宮頸癌檢查并有活檢結(jié)果的705例病例結(jié)果進行了研究，患者年齡分布在23～64歲，平均年齡(43.5±3.6)歲。

1.2 方法

1.2.1 流式細胞術(shù)檢測 采用陰道窺器暴露宮頸后，用宮頸刷按一定方向旋轉(zhuǎn)3～5圈刷取宮頸脫落細胞后，將宮頸刷刷頭浸泡于細胞保存液內(nèi)，用磷酸鹽緩沖液(Phosphate buffered saline，PBS)漂洗細胞2次(800 r/min，離心5 min)后，用70%乙醇于4℃固定過夜后，用400目尼龍網(wǎng)過濾以除去粘連細胞，離心去掉固定液并用PBS洗去乙醇，調(diào)整細胞濃度至1×106/mL以制成單細胞懸液，在上述懸液中加入Triton(0.002%)、RNA酶(終濃度為100 μg/mL)、碘化吡啶(Propidium iodide，PI，終濃度為50 μg/mL)于室溫避光孵育染色30 min后進行流式細胞儀檢測[3-4]，以正常宮頸脫落細胞DNA含量作為二倍體細胞DNA含量的標準。

1.2.2 細胞DNA含量分析 本研究采用DNA指數(shù)(DNA index，DI)、增殖指數(shù)(Proliferative index，PI)作為DNA含量分析的參數(shù)。DI=(待測宮頸細胞G0/G1細胞峰頂熒光道數(shù))/(標準二倍體細胞G0/G1細峰頂熒光道數(shù))，DI=0.9～1.1時為二倍體，超出此范圍即視為異倍體。PI=(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×100%[5]。(1)陰性：以正常二倍體細胞為主，未發(fā)現(xiàn)異倍體細胞，且增生細胞占檢測細胞總數(shù)的5%以下；(2)疑似：增生細胞占檢測細胞總數(shù)的5%～10%，未發(fā)現(xiàn)異倍體細胞；(3)陽性：增生細胞占檢測細胞總數(shù)的5%～10%或發(fā)現(xiàn)異倍體細胞。

1.2.3 陰道鏡活檢 凡是對流式細胞儀檢測DNA倍性結(jié)果為疑似和陽性或臨床可疑的婦女均進行陰道鏡檢查，以組織病理學診斷為金標準。于患者月經(jīng)干凈后的3 d～7 d，將陰道鏡置于其陰道，分別采用鹽水、冰醋酸和碘液對宮頸進行擦拭、濕敷和涂抹，于轉(zhuǎn)化區(qū)最嚴重區(qū)域鉗取宮頸組織。若鏡下未見可疑部位，則采取傳統(tǒng)四點法進行活檢，10%甲醛固定后，送至病理檢查[6-7]。

1.2.5 病理學診斷分析 病理學診斷分為：正常、宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ或CIS)和宮頸癌[8]。

1.2.6 陰道鏡擬診標準 按照國際宮頸病理與陰道鏡聯(lián)盟(International federation of cervical pathology and colposcopy，IFCPC)的描述，陰道鏡擬診標準為CINⅠ級(鏡下可見醋酸白色上皮與點狀血管二聯(lián)征)、CINⅡ級(出現(xiàn)醋酸白色上皮與鑲嵌二聯(lián)征)、CINⅢ級或CIS(出現(xiàn)醋酸白色上皮、點狀血管與鑲嵌三聯(lián)征)、宮頸癌(上述三聯(lián)征同時出現(xiàn)或單獨出現(xiàn)，并伴有玻璃狀、膠凍狀、腦狀等上皮改變)[9]。

1.3 統(tǒng)計學處理

所有實驗數(shù)據(jù)錄入SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件包，計量資料比較采用方差分析，計數(shù)資料比較采用卡方檢驗，P<0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 陰道鏡擬診與陰道鏡宮頸活檢結(jié)果

以陰道鏡活檢的診斷結(jié)果為標準，705例活檢結(jié)果顯示宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宮頸癌患者分別為245例、217例、123例、85例、35例，陰道鏡擬診結(jié)果顯示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宮頸癌的檢出率分別為62.2%、78.0%、100%、100%(表1)。

表1 陰道鏡擬診與陰道鏡宮頸活檢結(jié)果Table 1 Colposcopy diagnosis and colposcopy cervical biopsy results

2.2 流式細胞儀進行DNA倍性分析的敏感性與特異性

以陰道鏡活檢的診斷結(jié)果為標準，在705例活檢病例中，有243例CINⅡ及以上級別的宮頸病變(CINⅡ、CINⅢ/CIS和宮頸癌)。若將DNA倍性檢測結(jié)果中為陽性和疑似結(jié)果的病例，定為篩查后需要做陰道鏡活檢的標準，則CINⅡ及其以上級別病變(CINⅡ、CINⅢ/CIS和宮頸癌)的敏感性為87.7%(213/243)，特異性為90.2%(417/462)(表2)。

表2 流式細胞儀檢測DNA倍性結(jié)果Table 2 The DNA ploidy results detected by flow cytometry

2.3 不同宮頸組織之間DNA含量分析比較

DI、PI值均隨著宮頸組織病變程度的加重呈上升趨勢，且各組之間進行比較，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表3)。

表3 不同宮頸組織之間DNA含量分析比較Table 3 DNA content analysis and comparisons between different cervical tissues

Note：Compared between cervicitis group and CINⅠgroup，aP<0.05；Compared between CINⅠgroup and CINⅡgroup，bP<0.05；Compared between CINⅡgroup and CINⅢgroup，P<0.05；Compared between CINⅡgroup and CINⅢgroup，cP<0.05；Compared between CINⅢ group and UCC group，dP<0.05.

3 討論

宮頸癌前病變并不是必定會發(fā)展為宮頸癌，它有向前進一步發(fā)展或向后恢復(fù)正常的雙重性，因此非常有必要從癌前病變中找出具有進一步發(fā)展為宮頸癌潛能的這種病變。腫瘤的本質(zhì)是細胞增殖失控和增殖細胞轉(zhuǎn)移[10]。細胞在癌前病變過程中常處于活躍的增生狀態(tài)，DNA合成增加，含量發(fā)生變化，選用流式細胞儀可以精準檢測到DNA含量的細微變化，因此，選用流式細胞儀進行細胞DNA含量分析可以當作一種有效診斷癌前病變發(fā)展趨向的手段。本研究采用DI、PI作為DNA含量分析的參數(shù)，結(jié)果顯示，DI、PI值均隨著宮頸組織病變程度的加重而呈上升趨勢，且各組之間進行比較，差異均具有統(tǒng)計學意義。有學者指出在幾乎所有宮頸癌病變中均會出現(xiàn)DNA倍體異?；毎?，且DNA變化早于細胞形態(tài)學改變[11-13]，我們的研究結(jié)果與此相符，結(jié)果顯示在CINⅠ及以上均出現(xiàn)DNA倍體異?；毎?，且隨著宮頸組織病變程度的加重，異常化細胞越多。因此可對CIN細胞進行DNA含量的倍性分析以判斷癌前病變的發(fā)展趨向，在CIN中DNA倍體分析已經(jīng)被證實可作為評估具有向更高級別病變轉(zhuǎn)化的相對風險性的預(yù)測因子[14]。在臨床工作中可根據(jù)流式細胞儀檢測的DNA含量分析結(jié)果對CIN給予不同的處理方案，對CINⅠ異倍體和CINⅡ、CINⅢ/CIS應(yīng)當采取積極干預(yù)方案，盡最大努力阻止其向惡性方向轉(zhuǎn)變，而CINⅠ二倍體的增殖活性較低，可視作良性病變，密切跟蹤其轉(zhuǎn)歸即可。本研究結(jié)果顯示在705例陰道鏡活檢中，有243例CINⅡ及以上級別的宮頸病變，將流式細胞儀檢測DNA倍性在CINⅡ及其以上級別病變(CINⅡ、CINⅢ或CIS和宮頸癌病變)的敏感性為87.7%，特異性為90.2%。結(jié)果進一步表明采用流式細胞儀進行DNA含量分析可在不降低檢測特異性的情況下提高檢測的敏感性，是適合篩查宮頸癌和癌前病變的工具之一。

陰道鏡作為一種應(yīng)用廣泛的診斷方法，可通過觀察宮頸表面血管上皮的形態(tài)結(jié)構(gòu)，明確病變的部位和范圍發(fā)現(xiàn)肉眼看不到的亞臨床病變，在移行帶上異常最明顯處作定位活檢以提高活檢的陽性率[15]。本研究中陰道鏡擬診結(jié)果顯示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宮頸癌的檢出率分別為62.2%、78.0%、100%、100%，因此可以利用陰道鏡對觀察到的患者病變圖像進行拍照，以達到隨訪患者的目的。

綜上所述，流式細胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢可提高宮頸癌和癌前病變診斷率、準確性和敏感性，是適合篩查宮頸癌和癌前病變的工具之一，值得臨床推廣和應(yīng)用。

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(收稿：2016-09-20)

The clinical application value of flow-cytometry combined with colposcope ultra high frequency electric knife for diagnosis of uterine cervix carcinoma and cervical intraepithelial neoplasia

QUYalan，XIEBaofang，LIDanyang

Department of Obstetrics and Gynecology，Beijing Mentougou District Hospital，Beijing 102300，China

Objective To explore the clinical application value of flow-cytometry combined with colposcope ultra high frequency electric knife for diagnosis of uterine cervix carcinoma(UCC)and cervical intraepithelial neoplasia(CIN).Methods A total of 705 cases was included in this study who were screened from April 2014 to April 2016 and accepted colposcopy biopsy.DNA flow cytometry was performed to determine DNA index(DI)and proliferative index(PI).Results Colposcopy diagnosis results showed that the detection rate of CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ/CIS and UCC were 62.2%，78.0%，62.2% and 78.0% respectively.The sensitivity and specificity were 87.7%(213/243)and 90.2%(417/462)for DNA ploidy test using flow-cytometry.DI and PI of CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ/CIS and UCC increased gradually with significant differences(P<0.05).Conclusion Flow-cytometry combined with colposcopy biopsy may be a useful tool for cervical cancer screening in developing countries and has a competitive sensitivity and specificity，which is worthy of popularization and application.

Flow cytometry；Colposcopy biopsy；Uterine cervix carcinoma；Screening

北京市門頭溝區(qū)醫(yī)院婦產(chǎn)科(北京 102300)

曲亞蘭，女，(1983-)，碩士研究生，從事子宮內(nèi)膜異位癥診治的研究。

曲亞蘭，E-mail：quyalan0920@126.com

R711.74

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.01.006