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    太子參的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究

    2017-04-12 08:54顏培玲王振華靳志飛高云邱奉同
    安徽農(nóng)學通報 2016年23期
    關鍵詞:組織培養(yǎng)太子參

    顏培玲+王振華+靳志飛+高云+邱奉同

    摘 要:該研究以太子參冬芽莖尖為外植體,采用莖尖脫毒的方法,以MS為基本培養(yǎng)基,通過組織培養(yǎng)篩選出了適宜太子參芽增殖誘導、叢生芽的快速繁殖、生根壯苗,煉苗移栽的最適條件,為太子參規(guī)模化育苗生產(chǎn)提供理論支持。結(jié)果表明:太子參莖尖脫毒后,其最適芽誘導培養(yǎng)基為:MS + 2.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA;最適繼代增殖培養(yǎng)基為:MS + 1.2mg/L KT + 0.4mg/L NAA;最適生根培養(yǎng)基為MS+0.2mg·L-1 KT+0.5mg·L-1dA-6。

    關鍵詞:太子參;莖尖脫毒;組織培養(yǎng);快速繁殖

    中圖分類號 S567.53 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731(2016)23-0050-03

    太子參又名孩兒參、童參[1-2],為石竹科孩兒參屬多年生草本植物,喜生長在溫暖濕潤的環(huán)境,怕高溫,分布于華東、華中、華北、東北和西北等地,主產(chǎn)于山東、貴州、福建等地[3]。太子參是一種藥食兩用的補益中藥材,營養(yǎng)豐富,含有16種氨基酸,其中8種氯基酸是人體必需的,藥用具有益氣健脾、生津潤肺等多種作用,特別對于小孩盜汗、食欲不振、改善貧血、老人體虛失眠具有顯著功效,是男女老少四季皆宜的清補珍品[4,5],此外,近年來太子參也被用作園林觀賞植物[6]。

    太子參以種根進行無性繁殖為主,由于長期的無性繁殖使太子參病毒病的發(fā)生日趨嚴重,造成種性退化,嚴重影響太子參的品質(zhì)[7-9];且常規(guī)無性繁殖不僅繁殖系數(shù)低、用種量大,難以滿足規(guī)?;a(chǎn)對種源的需求。因此,進行高效的太子參組織培養(yǎng)脫毒體系是進行規(guī)?;?、防治太子參病毒病最有效的途徑[10]。本試驗選擇在當?shù)乇憩F(xiàn)良好的太子參品種作為試驗材料,采用莖尖脫毒、芽的誘導、芽的增殖、叢生芽誘導、生根獲得大量優(yōu)質(zhì)、無病毒的太子參種苗,以滿足規(guī)?;a(chǎn)的需求,同時為建立太子參優(yōu)質(zhì)種苗快繁的工廠化生產(chǎn)提供技術參考和依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料 供試材料來源于山東省臨沭縣藥材基地二月份太子參冬芽,按常規(guī)方法種植于臨沂大學遺傳學實驗室苗圃中。以太子參幼芽為外植體。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件 培養(yǎng)基:以MS為基礎培養(yǎng)基,附加白糖3.0%、瓊脂粉0.4%,pH調(diào)至5.6~5.8,按不同目的添加激素種類和設置不同濃度,配成誘導分化、繼代增殖、生根培養(yǎng)基,以篩選出最優(yōu)培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件:溫度為(25±2)℃,光照為12h/d,光照強度為2 800lx。

    1.2.2 外植體脫毒方法 根據(jù)課題組前期研究,選取生長健壯的太子參頂芽2~3cm于燒杯中,加入表面活性劑清洗15min,流水沖洗1~2h,先置于75%酒精中浸泡約10~15s,用無菌水清洗3~5次,加升汞至淹沒外植體(加3~5滴吐溫-80)滅菌8~10min,無菌水沖洗5~6次。在超凈工作臺上,將經(jīng)消毒過的莖段放在低倍雙筒解剖鏡下逐層剝?nèi)デo尖外面的幼葉,將切下0.5mm的莖尖,接種于芽增殖誘導培養(yǎng)基上。

    1.2.3 芽的增殖誘導 將經(jīng)過脫毒處理的莖尖,轉(zhuǎn)移到增殖誘導培養(yǎng)基上,暗培養(yǎng)7d后轉(zhuǎn)移到2 800lx的光照強度下繼續(xù)培養(yǎng)。30d后將成活的莖尖轉(zhuǎn)移到不同激素配比的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。每個處理30個莖尖,每個處理重復3次。

    1.2.4 叢生芽的誘導 將經(jīng)過誘導培養(yǎng)基誘導出的芽,轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上誘導叢生芽,培養(yǎng)30d左右。每個處理20個外植體,每個處理重復3次。

    1.2.5 生根壯苗培養(yǎng) 叢生芽長至3~4cm的太子參無菌苗,轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基上進行生根壯苗誘導。每個處理30個外植體,每個處理重復3次。

    1.2.6 煉苗移栽 將長勢一致的生根試管苗移栽至裝滿珍珠巖的塑料杯中進行鍛煉。每隔7d澆灌一次營養(yǎng)液和0.1%的多菌靈,20d左右,煉苗過程結(jié)束,移栽至大田。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 莖尖增殖誘導 將脫毒太子參莖尖經(jīng)過暗培養(yǎng)7d后的外植體轉(zhuǎn)移到2 800lx光照強度下培養(yǎng)30d后,觀察接種在不同激素配比的誘導培養(yǎng)基上的不定芽誘導率和生長狀況。由表1可知,6-BA、IAA的培養(yǎng)基對不定芽的誘導具有促進作用。IAA濃度為0.2mg/L時,隨著6-BA濃度的升高,對太子參不定芽的誘導作用也逐漸增強;當6-BA的濃度升高到2.5mg/L時,不定芽的誘導率最高,出芽快,芽健壯,增值系數(shù)為6.1;隨著6-BA的濃度的繼續(xù)升高,則表現(xiàn)出對不定芽的抑制作用。綜上,激素配比為2.5mg/L 6-BA +0.2mg/L IAA的培養(yǎng)基最適宜太子參莖尖不定芽的誘導。

    本試驗在篩選出最適激素種類的基礎上,進一步探索了激素KT與NAA的配比對叢生芽誘導的影響。結(jié)果如表3所示,當KT濃度為0.6~1.2mg·L-1時,隨著KT濃度的升高,對誘導叢生芽的的促進作用越來越強,太子參叢生芽的增殖系數(shù)也不斷增加,幼苗生長的速度越來越快,苗粗壯,葉片顏色深綠,植株健壯,整體長勢越來越好;當KT濃度為1.2mg/L時,叢生芽增殖倍數(shù)最高,出芽最快,苗顏色綠而且粗壯,長勢最好,增值系數(shù)達到12.1。而后隨著KT濃度的增加,增殖倍數(shù)又不斷的下降,太子參叢生芽的生長收到抑制。由此可知,激素配比分別為1.2mg/L KT + 0.4mg/L NAA的培養(yǎng)基對太子參叢生芽的誘導效果最佳。

    2.3 不同激素處理對太子參生根壯苗培養(yǎng) 選擇在增殖培養(yǎng)基上長至3~4cm,且長勢一致的試管苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),使其生根并茁壯生長,為煉苗做好準備。由表4結(jié)果可以看出:生長激素NAA和DA-6均能誘導根的產(chǎn)生,太子參的生根率均達到100%,并且DA-6更適宜太子參生根壯苗的培養(yǎng),激素配比為0.2mg·L-1 KT+0.5mg·L-1dA-6。DA-6培養(yǎng)出來的苗粗壯,顏色綠,產(chǎn)生的根系也多并且粗壯,有大量塊根產(chǎn)生。

    2.4 煉苗移栽 將長勢一致的生根試管苗移栽至裝滿珍珠巖的塑料杯中進行鍛煉。每隔7d澆灌一次營養(yǎng)液和0.1%的多菌靈,20d左右,煉苗過程結(jié)束,移栽至大田,移栽成活率達到100%。

    3 討論與結(jié)論

    植物莖尖分生組織中,維管系統(tǒng)尚未發(fā)育完善,病毒傳播速度很慢,因此,組培后獲得無毒苗的幾率也較大。本試驗中,通過對太子參莖尖脫毒處理,在合適的培養(yǎng)條件下,選擇適宜的MS培養(yǎng)基,誘導叢生芽的產(chǎn)生,并進行擴繁,經(jīng)過生根和煉苗等過程,得到了大量的太子參塊根。

    通過太子參莖尖脫毒、擴繁技術研究可得,適宜太子參組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基;最適宜太子參莖尖不定芽的誘導的培養(yǎng)基激素配比為MS + 2.5mg/L 6-BA +0.2mg/L IAA;對太子參叢生芽的誘導效果最佳細胞分裂素為KT,且培養(yǎng)基激素種類和配比分別為MS + 1.2mg/L KT + 0.4mg/L NAA時誘導效果最佳,增值系數(shù)為12.1。在適激素配比為MS + 0.2mg·L-1 KT+0.5mg·L-1dA-6的培養(yǎng)基上進行生根壯苗的培養(yǎng)效果最佳。下一步的研究是通過指示植物法檢測太子參莖尖脫毒效果[11],以期為建立太子參優(yōu)質(zhì)種苗快繁的工廠化生產(chǎn)提供技術參考和依據(jù)。

    參考文獻

    [1]熊厚溪,周濤,江維克,等.基于表型性狀和藥材品質(zhì)的8個貴州太子參品系的篩選與評價[J].中國中藥雜志,2014,39(21):4197-4203.

    [2]任永權,楊芩,徐元江,等.太子參水浸液對其種子萌發(fā)和幼苗生長的影響[J].北方園藝,2012(06):172-174.

    [3]林秀渠,李早永,隋春青.太子參高產(chǎn)栽培技術[J].山東農(nóng)業(yè)科學,2011⑴:111-113.

    [4]晏春耕,曹瑞芳,太子參藥材性狀與多糖含量的研究[J].安徽農(nóng)學通報,2009,15(11):81.

    [5]溫學森,霍德蘭,趙華英.太子參常見病害及防治[J].中藥材,2003,26(4):243-245.

    [6]李修清.藥用觀賞植物在園林中的應用研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2011(3):215-216.

    [7]張國輝,張西平,賀定翔.貴州省黔東南州太子參斑點病的調(diào)查及防治[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2011,39(7):3993-3994.

    [8]高瑋,張敬水,張建紅.太子參花葉病毒的檢測與防治[J].中國病毒學,1993,8(4):390-393.

    [9]陳建祥,王飛,左群.貴州省施秉縣太子參生產(chǎn)存在問題與高產(chǎn)栽培關鍵技術[J].農(nóng)技服務,2011,28(2):231-232.

    [10]戴軍,姚厚軍,張九玲,等.太子參超低溫脫毒及規(guī)?;M培苗技術[J],生物學雜志,2014(3):84-86。

    [11]Wang Q C,Liu Y,Xie Yh,et al.Cryotherapy of potato shoot tips for efficient elimination of potato leafroll virus(PL R V)and potato virus Y(PVY) [J].Potato Research,2006,49:119-129.

    (責編:張宏民)

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