固相萃取超高效液相色譜法測定食品中非法添加色素紅2G

王韋達(dá)，肖澤恩，李蕓，崔晶，杜業(yè)剛

（深圳市計量質(zhì)量檢測研究院，廣東深圳518100）

固相萃取超高效液相色譜法測定食品中非法添加色素紅2G

王韋達(dá)，肖澤恩，李蕓，崔晶，杜業(yè)剛*

（深圳市計量質(zhì)量檢測研究院，廣東深圳518100）

建立快速測定食品中的非法添加色素紅2G的固相萃取超高效液相色譜分析方法。選取可能添加紅2G的香腸、紅酒、紅醋、糖果、年糕、牛肉干、海鮮醬、辣椒醬、胡椒粉、辣椒粉、辣椒油、火鍋底料作為分析對象，樣品用50%（體積分?jǐn)?shù)）甲醇水溶液提取，經(jīng)固相萃取小柱凈化，以含乙酸（0.02moL/L）的乙酸銨（0.01moL/L）水溶液和甲醇為流動相，經(jīng)C18色譜柱分離，二極管陣列檢測器檢測，檢測波長508 nm。紅2G在0.2mg/L～100mg/L濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為1.000 0，方法檢出限為0.03mg/kg，樣品平均回收率在80%以上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%（n=6）。該方法靈敏度高，精密度好，分析時間短，適用于食品中非法添加色素紅2G的檢測。

紅2G；固相萃??；超高效液相色譜

食品色澤是食品外觀質(zhì)量的重要指標(biāo)，令人賞心悅目的顏色可以提高消費者的購買欲望。食用色素作為食品添加劑在各類食品中的廣泛應(yīng)用，改善了食品外觀，豐富了食品種類。近年來，一些不法商家為降低成本向食品中違法添加價格低廉的工業(yè)色素來代替食用色素，導(dǎo)致與工業(yè)色素相關(guān)的食品安全事件頻發(fā)。工業(yè)色素大多是偶氮類染料，具有一定的毒性，添加在食品中會給消費者健康帶來安全隱患。

紅2G是一種工業(yè)合成色素，屬于偶氮類染料，又名酸性紅1和食品紅10。由于其價格低廉，著色力強，曾在歐洲地區(qū)用于香腸、海鮮醬、辣醬等食品的著色。2007年歐洲食品安全局發(fā)現(xiàn)紅2G在人體內(nèi)會代謝成致癌物質(zhì)苯胺，具有誘發(fā)癌癥的可能性，隨即公布紅2G在歐盟27國內(nèi)禁止在食品中使用[1]，中國、美國、加拿大、日本等國家也已經(jīng)明確禁止食品中使用紅2G[2]，然而在我國市場上仍能發(fā)現(xiàn)某些食品中存在違法添加紅2G的跡象，因此有必要建立準(zhǔn)確、有效的紅2G檢測方法。目前我國還未制定食品中紅2G檢測的標(biāo)準(zhǔn)分析方法，文獻中報道的分析方法主要有高效液相色譜法[3-4]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[5-7]，但是這些方法只適用于檢測單一食品或者少數(shù)幾類食品，不能對市場上各類食品進行全面有效的監(jiān)督。

本試驗選取可能添加紅2G的香腸、紅酒、紅醋、糖果、年糕、牛肉干、海鮮醬、辣椒醬、胡椒粉、辣椒粉、辣椒油、火鍋底料作為分析對象，采用甲醇水溶液對樣品進行提取，WAX固相萃取小柱凈化，建立了適用于各類食品中紅2G檢測的超高效液相色譜分析方法，該方法適用范圍廣、靈敏度高、快速準(zhǔn)確，可為食品安全監(jiān)管提供有效的技術(shù)手段。

1試驗部分

1.1儀器與試劑

超高效液相色譜儀（UPLC，配二極管陣列檢測器）、OasisHLB固相萃取小柱（60mg，3mL）、C18固相萃取小柱（500mg，3mL）、OasisMAX固相萃取小柱（60mg，3mL）、OasisWAX固相萃取小柱（60mg，3mL）：美國Waters公司；固相萃取裝置：美國Agilent公司；IKA KS4000icontrol搖床、IKAGENIUS 3渦輪器：德國IKA公司；HERMLE Z323高速離心機：德國Hermle－Labortechnik公司；Turbovap LV氮吹儀：美國Caliper公司；微孔過濾膜（0.22μm）：美國Millipore公司。

甲醇（色譜純）：Merck公司；冰乙酸（色譜純）：上海安譜；冰乙酸（分析純）、氨水（分析純）：上海凌峰；紅2G標(biāo)準(zhǔn)品：購自Sigma-Aldrich；試驗用水均為超純水。

含冰乙酸（0.02moL/L）的乙酸銨（0.01moL/L）水溶液：稱取乙酸銨0.771 g于1 L容量瓶中，量取1.2mL冰乙酸加入此容量瓶中，加水定容。

標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱取紅2G標(biāo)準(zhǔn)品0.020 0 g于100mL棕色容量瓶中，用超純水定容，制備成200mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：將上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液用水稀釋為0.200、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定的儀器條件下進行液相色譜分析。

1.2樣品前處理

1.2.1提取

稱取約2 g樣品，精確至0.001 g，置于50mL離心管中，加入甲醇和水各5.0mL，搖床震蕩提取30min，于7 800 r/min離心5min，上清液待凈化。

1.2.2凈化

WAX小柱依次用3.0mL甲醇和3.0mL水活化，將上清液轉(zhuǎn)移至活化的WAX小柱中，再依次用2.0mL水和2.0mL甲醇淋洗，最后用5.0mL氨水甲醇（10∶90，體積比）洗脫，洗脫液于50℃氮吹至干，加入1.0 mL水定容，渦旋震蕩溶解，過0.22μm微孔濾膜，供液相色譜測定。

1.3色譜分析條件

色譜柱：ACQUITYUPLCBEH C18（100×3.0mm，1.7μm）；流動相：甲醇/含冰乙酸（0.02moL/L）的乙酸銨（0.01moL/L）水溶液=35/65；流速：0.3mL/min；柱溫：25℃；進樣量5.0μL；檢測波長：508 nm。

2結(jié)果與討論

2.1樣品前處理條件優(yōu)化

2.1.1提取溶劑的選擇

選取基質(zhì)復(fù)雜的辣椒油加標(biāo)進行分析，加標(biāo)質(zhì)量濃度為10mg/kg，分別以水、甲醇、乙腈、甲醇-水（1∶1，體積比）和乙腈-水（1∶1，體積比）作為提取溶劑，經(jīng)過WAX小柱凈化后分析測定，試驗結(jié)果見表1。

表1 不同提取溶劑的回收率結(jié)果（n=3）Table1 Recovery of red 2G with differentextraction solvents（n=3）

結(jié)果表明，在所有提取劑中甲醇-水（1∶1，體積比）對紅2G的提取效率最好。采用甲醇-水（1∶1，體積比）作為提取劑對其他11種食品進行試驗，都可以得到滿意的回收率。

2.1.2固相萃取柱的選擇

選取基質(zhì)復(fù)雜的辣椒油進行加標(biāo)試驗，對固相萃取小柱HLB、C18、MAX和WAX進行了考察研究，結(jié)果顯示W(wǎng)AX小柱對紅2G有高選擇性的保留作用，經(jīng)過洗脫后可以得到較高的回收率。采用WAX小柱對其他11種食品進行加標(biāo)試驗，同樣可以得到較好的回收率。

2.2色譜條件的優(yōu)化

試驗考察了甲醇、乙腈和含冰乙酸的乙酸銨水溶液組配的流動相體系，發(fā)現(xiàn)當(dāng)以甲醇/含冰乙酸（0.02moL/L）的乙酸銨（0.01 moL/L）水溶液=35/65作為流動相等度洗脫時，紅2G的峰型較好，標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖如圖1所示。

2.3不同樣品基質(zhì)對紅2G測定的影響

樣品中大部分雜質(zhì)在凈化過程中被除去，未被除去的雜質(zhì)在分析時也可與紅2G得到較好的分離，圖2所示是辣椒油樣品的液相色譜圖，其中A和B分別為空白樣品和加標(biāo)樣品。

圖1 紅2G標(biāo)準(zhǔn)溶液超高效液相色譜圖（濃度為1.00mg/L）Fig.1 Liquid chromatogram of red 2G（1.00mg/L）

圖2 辣椒油空白樣品和加標(biāo)樣品的超高效液相色譜圖Fig.2 Liquid chrom atogram sof blank and spiked capsicolsamples

試驗結(jié)果表明：樣品經(jīng)過該前處理方法凈化后，不存在雜質(zhì)干擾的情況，可以保證分析方法的靈敏度和準(zhǔn)確度。

2.4線性范圍和檢出限

在選定的色譜條件下，將濃度為0.200、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100mg/L紅2G標(biāo)準(zhǔn)工作液進行測定，紅2G標(biāo)準(zhǔn)系列濃度與峰面積線性相關(guān)，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為y= 41 999.3x-7 069.2（相關(guān)系數(shù)為1.000 0），方法檢出限為0.03mg/kg（S/N=3），定量限為0.1mg/kg（S/N=10）。

2.5回收率和精密度

以不含紅2G的香腸、紅酒、紅醋、糖果、年糕、牛肉干、海鮮醬、辣椒醬、胡椒粉、辣椒粉、辣椒油、火鍋底料為分析對象，分別添加1、10、40mg/kg3個質(zhì)量濃度水平，每個添加水平平行測定6次，計算回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。試驗結(jié)果如表2所示，樣品平均回收率在80%以上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%（n=6）

表2 食品中紅2G的添加回收試驗結(jié)果（n=6）Table2 Recovery of red 2G from spiked samples in food（n=6）

續(xù)表2食品中紅2G的添加回收試驗結(jié)果（n=6）Continue table2 Recovery of red 2G from spiked samples in food（n=6）

3實際樣品檢測

從本地超市和批發(fā)市場隨機購買了香腸、紅酒、紅醋、糖果、年糕、牛肉干、海鮮醬、辣椒醬、胡椒粉、辣椒粉、辣椒油、火鍋底料各10份樣，應(yīng)用所建立的分析方法對這些樣品進行了紅2G測定，結(jié)果均未檢出。雖然檢測結(jié)果顯示，在隨機選取的12種食品中均未檢測到紅2G，但由于檢測樣本量少，并不代表不存在紅2G違法添加的潛在風(fēng)險，因此有必要持續(xù)對市售的食品進行監(jiān)測，以保證食品質(zhì)量安全。

4結(jié)論

本試驗用甲醇-水提取紅2G，通過WAX固相萃取柱進行凈化前處理，采用超高效液相色譜儀進行檢測，建立了用于食品中檢測紅2G的液相分析方法，該方法靈敏度高，抗干擾能力強，快速準(zhǔn)確，適用于食品中紅2G的日常分析和監(jiān)測。

[1]周梅.歐盟將禁止使用食品色素“紅色2G”[J].世界農(nóng)業(yè),2007 (11):70

[2]屠海云,肖海龍,朱順達(dá),等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定食品中紅2G、酸性紅、酸性紅52著色劑方法研究[J].中國食品,2011 (10):82-84

[3]劉瀚升.高效液相色譜法同時測定熟肉制品中的羅丹明B、蘇丹紅I、II、III、IV、堿性橙2、21、22、酸性橙II和紅2G[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué),2016,23(1):108-110

[4]宋月,白欣,康譯友,等.熟肉制品中紅2G的超高效液相色譜檢測法[J].微量元素與健康研究,2015,32(4):32-33

[5]周日東,林勝軍,丘福保,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定火腿腸中的紅2G工業(yè)染料[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2015, 25(15):2497-2499

[6]馮峰,楊爍,凌云,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速篩查葡萄酒中的14種禁用食品添加劑[J].分析化學(xué),2011,39(11):1732-1737

[7]伊雄海,鄧曉軍,楊惠琴,等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測食品中的多種易濫用著色劑[J].色譜,2011,29(11):1062-1069

Determ ination of Red 2G in Food by Solid Phase Extraction-Ultra High Performance Liquid Chromatography

WANGWei-da，XIAOZe-en，LIYun，CUIJing，DUYe-gang*
（Shenzhen Academy ofMetrology and Quality Inspection，Shenzhen 518100，Guangdong，China）

A method based on solid phase extraction-ultra high performance liquid chromatography for rapid determination of red 2G in foodwasestablished.Taking sausage，redwine，red vinegar，candy，rice cake，beef jerky，hoisin sauce，chillisauce，pepper，paprika，capsicol and hotpot condiment in which red 2G probably wasadded as research objects，red 2G in sampleswas extracted by 50%（volume fraction）methanol aqueous solution and then purified with a solid phase extraction column.Red 2G was separated by a C18 column（100 mm×3.0 mm，1.7μm）with methanol and ammonium acetate（0.01 moL/L）containing acetic acid（0.02 moL/L）as mobile phase.The detection wavelength was 508 nm and a good linear relationship was achieved over the rangeof0.2mg/L to100mg/Lwith a correlation coefficientof1.000 0.The detection limitwas 0.03mg/kg and the average recovery for spiked sampleswasover 80%with the relative standard deviation less than 5%（n=6）.Themethod possessed high sensitivity，good precision and shorteranalysis time，suitable for fastdetermination of red 2G in food.

red 2G；solid phaseextraction；ultraperformance liquid chromatography

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.05.036

2016-06-16

深圳市計量質(zhì)量檢測研究院科技項目（2016-YA19）

王韋達(dá)（1984—），男（漢），工程師，碩士，研究方向：食品化學(xué)分析。