高效液相色譜法測定復方青霉素膠囊劑中氨芐青霉素的含量

趙子臻

摘 要：本實驗采用高效液相色譜法對復方青霉素膠囊劑中的氨芐青霉素的進行了含量測定。方法：采用迪馬C18鉆石色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（93∶7）為流動相，檢測波長為230nm，流速為1.0ml/min。氨芐青霉素在50～800μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。氨芐青霉素平均回收率分別為99.3%。結論：本法簡便、準確，可用于復方青霉素膠囊劑中氨芐青霉素的含量測定。關鍵詞：復方青霉素膠囊劑；含量；測定

復方青霉素膠囊劑由氨芐青霉素和鄰氯青霉素組成。氨芐青霉素為廣譜半合成青霉素，毒性極低，對草綠色鏈球、溶血性鏈球菌、腸球菌有較強的抗菌作用。氨芐青霉素主要用于治療由敏感的金葡菌、溶血性鏈球菌、淋球菌、百日咳桿菌、流感桿菌、痢疾桿菌等引起的感染性疾?。蝗缥改c炎及消化道感染（肝、膽感染性疾患、急慢性胃腸炎、菌痢、傷寒及副傷寒等）、呼吸道感染（肺炎、急慢性支氣管炎、百日咳等）、泌尿到感染（淋病、尿道炎、膀胱炎等）、軟組織感染等。本實驗采用高效液相色譜法對復方青霉素膠囊劑中的氨芐青霉素的進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：XSYF-D實驗室廢水處理設備（北京湘順源科技有限公司）；ZXTA-20雙極反滲透實驗室超純水機（北京卓信博澳儀器有限公司）；實驗室用高純水制備器（北京科譽興業(yè)科技發(fā)展有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；HN超聲波清洗機加熱型（上海汗諾儀器有限公司）；DK-S24電熱恒溫水浴鍋（上海五相儀器儀表有限公司）；STI-501Plus梯度高效液相色譜儀（上海色譜儀器有限公司）；可見分光光度計（掃描型）（石家莊偉天科學儀器設備有限公司）。

1.2 色譜柱：迪馬C18鉆石色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：氨芐青霉素

1.4 試劑：三乙胺（紹興經(jīng)濟開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、甲醇（天津市海潤萊化工有限公司）、乙腈（紹興經(jīng)濟開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、磷酸（武漢唐氏豐禾化工有限公司）、磷酸二氫鈉（武漢唐氏豐禾化工有限公司）、氫氧化鈉（紹興經(jīng)濟開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、冰乙酸（紹興經(jīng)濟開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）。

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[1-5]。流動相：0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（93∶7）為流動相，檢測波長：230nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按氨芐青霉素峰計算應不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取氨芐青霉素對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含100μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取供試品適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相10mL，密塞，精密稱定重量，超聲處理5分鐘，放冷，精密稱定，用流動相補足重量，濾過。取續(xù)濾液，即得。

2.4 精密度試驗

精密稱取氨芐青霉素對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為100μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.86%，表明本方法精密度良好。

2.5 對照品的線性考察

精密稱取適量氨芐青霉素對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8毫克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，氨芐青霉素在50～800μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.6 重現(xiàn)性試驗

稱取同一批的復方青霉素膠囊劑樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.86%，結果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 準確度試驗

精密稱取已知含量的樣品9份，分別精密加入氨芐青霉素對照品，按項下方法制備成120%、140%、160%。取模擬樣品照試驗方法試驗，計算回收率為99.3%，RSD為0.86%。

2.8 樣品穩(wěn)定性試驗

取同一批復方青霉素膠囊劑樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4小時，精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定復方青霉素膠囊劑中氨芐青霉素的RSD=0.83%。結果表明供試品4小時內穩(wěn)定。

2.9 專屬性試驗

取鄰氯青霉素等，照2.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結果在氨芐青霉素出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定復方青霉素膠囊劑三批樣品中氨芐青霉素的含量，結果三批樣品的含量分別為標示量100.2%、99.9%、99.8%。

3 討論

分別考察0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（93∶7），0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（90∶10），0.05mol/LPH6.5磷酸鹽緩沖液-乙晴（6：1），乙腈-甲醇-水-三乙胺（20：20：60∶0.01），乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（60：40），乙腈-0.033mol/L磷酸二氫鉀溶液（40：60），甲醇-水-冰乙酸（80：19：1），甲醇-磷酸鹽緩沖液（取0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液一定量，用氫氧化鈉試液調節(jié)pH值至6.5）（70：30）不同比例的流動相，結果以0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（93∶7）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（93∶7）為流動相。本實驗表明此方法分離效果好、方法簡便、快捷、準確，、專屬性好，可用于復方青霉素膠囊劑中氨芐青霉素的含量測定。復方青霉素膠囊劑的含量應為標示量的95-105%。

參考文獻

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