復方降脂軟膠囊對高脂血癥小鼠的藥效學和毒理學試驗

梁曉煒，李培杉，李

1.杜仲栽培與利用河南省工程實驗室，河南 開封 475004；2.河南省中藥藥效國際聯(lián)合實驗室，河南 開封 475004；3.河南大學 藥學院，河南 開封475004

復方降脂軟膠囊對高脂血癥小鼠的藥效學和毒理學試驗

1.杜仲栽培與利用河南省工程實驗室，河南 開封 475004；2.河南省中藥藥效國際聯(lián)合實驗室，河南 開封 475004；3.河南大學 藥學院，河南 開封475004

〔目的〕研究復方降脂軟膠囊對飲食誘導所致高脂血癥小鼠的影響?！卜椒ā硨⒗ッ餍∈?0只隨機分為6組，分別為：空白對照組、高脂模型對照組、洛伐他汀對照組、軟膠囊高劑量組、軟膠囊中劑量組、軟膠囊低劑量組。高脂模型對照組和各藥物劑量組飼喂高脂飼料造小鼠高脂血癥模型，造模期2周后空白對照組、高脂模型對照組給予相同體積5 g/L CMC-Na，洛伐他汀對照組灌胃給予洛伐他汀，3個軟膠囊劑量組灌胃給予相應劑量的軟膠囊內(nèi)容物。每兩天稱體重，實驗結(jié)束后測定小鼠血漿中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平以及肝臟系數(shù)?！步Y(jié)果〕復方降脂軟膠囊能顯著降低高血脂癥小鼠血中TC、TG和LDL-C水平，增高HDL-C水平，并且能夠降低高脂血癥小鼠的體重和肝臟系數(shù)?！步Y(jié)論〕復方降脂軟膠囊具有良好的降血脂作用，并能夠控制高脂血癥小鼠體重增長和改善由脂質(zhì)代謝紊亂造成的肝臟系數(shù)變化。

降脂軟膠囊；高脂血癥；小鼠；調(diào)節(jié)血脂

高脂血癥(Hyperlipidemia)是一種常見的代謝紊亂疾病，發(fā)病原因是由于脂肪代謝或運轉(zhuǎn)異常使血漿一種或多種脂質(zhì)高于或低于正常水平，臨床表現(xiàn)為血中總膽固醇(Total cholesterol,TC)或甘油三酯(Triglyceride,TG)升高或者兩者兼有。高脂血癥最主要的危害是促進動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展，有研究[1]證明高脂血癥患者血漿致動脈粥樣硬化指數(shù)水平與其他一些血栓形成危險因子的相關(guān)性明顯要高于正常人群，同時高脂血癥是高血壓、糖尿病形成的重要危險因素，還可能導致脂肪肝、肥胖癥等疾病[2]。臨床上常采用他汀類和貝特類[3]藥物治療高脂血癥，其療效確切，但是副作用明顯[4]，在一定程度上制約了其使用。中醫(yī)藥治療高脂血癥因其療效好且副作用小，并且中藥材來源廣泛，因此其相關(guān)研究日益增多[5-8]。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級昆明小鼠，雄性，體重18～20g，許可證號：SCXK(豫)2015-0004，由河南省實驗動物中心提供。

1.2 實驗藥物

復方降脂軟膠囊：內(nèi)容物處方由杜仲籽油、亞麻籽油、納豆凍干粉、蜂蠟與維生素E油組成。實驗中將軟膠囊內(nèi)容物與5 g/L CMC-Na按一定比例用渦旋振蕩器混勻，然后給實驗動物灌胃。洛伐他汀膠囊：揚子江藥業(yè)集團有限公司(批號：15121642)。

1.3 實驗主要材料與試劑

基礎(chǔ)飼料由河南省實驗動物中心提供；高脂飼料：體積分數(shù)58.35%基礎(chǔ)飼料，體積分數(shù)1.5%膽固醇，體積分數(shù)20%脂肪，體積分數(shù)10%蔗糖，體積分數(shù)10%蛋黃粉，體積分數(shù)0.15%膽酸鈉；小鼠LDL-C、HDL-C、TG、TC檢測試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)；肝素鈉注射液(江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司)。

1.4 實驗主要儀器

全波長酶標儀(美國Bio-Tek公司)；電子分析天平(瑞士Mettler-Toledo公司)；渦旋振蕩器(美國Thermo Fisher科技公司)。

2 實驗方法

2.1 急性毒性實驗

小鼠20只，體重20 g左右，采用最大一次限量法，軟膠囊內(nèi)容物10 g/Kg給小鼠灌胃，觀察小鼠有無異常情況，12 d后脫臼處死小鼠并解剖。

2.2 調(diào)節(jié)血脂實驗

2.2.1 小鼠高脂模型的建立 60只小鼠適應性喂養(yǎng)5 d后，稱體重并隨機分為6組，分別為：空白對照組、洛伐他汀對照組、高脂模型對照組、軟膠囊低劑量組、軟膠囊中劑量組、軟膠囊高劑量組?？瞻讓φ战M在實驗期內(nèi)飼喂基礎(chǔ)飼料，其余5組適應期結(jié)束后飼喂高脂飼料，每周稱取體質(zhì)量。

2.2.2 小鼠給藥方法 造模期2周后開始對小鼠進行灌胃，每組飼喂飼料及灌胃劑量如下：空白對照組：基礎(chǔ)飼料+0.3 mL5 g/L CMC-Na；高脂模型對照組：高脂飼料+0.3 mL5 g/L CMC-Na；洛伐他汀對照組：高脂飼料+洛伐他汀(10 mg/Kg)；軟膠囊低劑量組：高脂飼料+軟膠囊內(nèi)容物(167 mg/Kg)；軟膠囊中劑量組：高脂飼料+軟膠囊內(nèi)容物(333 mg/Kg)；軟膠囊高劑量組：高脂飼料+軟膠囊內(nèi)容物(1 g/Kg)。3個軟膠囊低、中、高劑量組劑量分別為人體推薦劑量的5倍、10倍、30倍。每天灌胃1次，連續(xù)灌胃4周，灌胃期間自由飲水和進食，每兩天稱取體質(zhì)量。

2.2.3 小鼠血漿中脂質(zhì)水平的測定以及肝臟系數(shù)測定 末次給藥后，禁食不禁水12 h，眼眶靜脈叢采血，放置于肝素浸泡過夜并烘干的離心管中，3 000 r/min離心15 min，吸取上清液，盡快測定小鼠血漿中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量，測定方法嚴格按照相應的測定試劑盒說明書。小鼠取血后，頸椎脫臼處死，打開腹腔分離肝臟，在冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱量濕重并計算肝臟系數(shù)。肝臟系數(shù)計算公式為：肝臟系數(shù)=(肝臟重量/小鼠體重)×100%

2.3 統(tǒng)計分析

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0進行處理，多組均數(shù)進行方差齊性檢驗(Homogenity of variances)，組間比較采用單因素方差(One-Way ANOVA)分析。實驗數(shù)據(jù)結(jié)果以s表示。

3 實驗結(jié)果與分析

3.1 小鼠急性毒性實驗

灌胃后喂養(yǎng)12 d，在觀察期內(nèi)動物活動、進食、行為等均正常，未出現(xiàn)中毒癥狀或不良反應。實驗結(jié)束后解剖小鼠，肉眼觀察小鼠各個臟器均無異常。說明小鼠急性經(jīng)口的最大耐受量大于10 g/Kg，相當于人推薦用量的300倍，根據(jù)急性毒理性分級標準，該樣品屬無毒級。

3.2 復方降脂軟膠囊對小鼠血漿中LDL-C和HDL-C含量的影響(見表1)

由表1可知，高脂模型對照組小鼠血漿中LDL-C含量極顯著高于空白對照組(P<0.01)，說明高脂血癥小鼠模型造模成功。在LDL-C含量方面，軟膠囊中劑量組小鼠血漿中的LDL-C水平顯著低于高脂模型對照組(P<0.05)，軟膠囊高劑量組小鼠血漿中的LDL-C水平極顯著低于高脂模型對照組(P<0.01)，說明軟膠囊內(nèi)容物中、高劑量組可顯著降低高脂血癥小鼠血漿的LDL-C水平。在HDL-C含量方面，軟膠囊低劑量組HDL-C水平顯著低于高脂模型對照組(P<0.05)，軟膠囊中、高劑量組HDL-C水平均極顯著低于高脂模型對照組(P<0.01)，說明軟膠囊內(nèi)容物能顯著升高高脂血癥小鼠血漿的HDL-C含量。

表1 各組小鼠血漿中LDL-C和HDL-C的含量 (s,mmol·L-1)

注：1.與空白對照組比較，◆◆P<0.01，極顯著性差異；◆P<0.05，顯著性差異。2.與高脂模型對照組比較，**P<0.01，極顯著性差異；*P<0.05，顯著性差異。

3.3 復方降脂軟膠囊對小鼠血漿中TG和TC含量的影響(見表2)

由表2可知，高脂模型對照組小鼠血漿中TG和TC含量均極顯著高于空白對照組(P<0.01)，說明高脂血癥小鼠模型造模成功。在TG含量方面，軟膠囊低、中、高3個劑量組小鼠血漿中的TG水平均顯著低于高脂模型對照組(P<0.05)，說明軟膠囊內(nèi)容物可顯著降低高脂血癥小鼠血漿的TG水平。在TC含量方面，軟膠囊中、高劑量組TC水平顯著低于高脂模型對照組(P<0.05)，說明軟膠囊內(nèi)容物中、高劑量能顯著升高高脂血癥小鼠血漿的HDL-C含量。

表2 各組小鼠血漿中TG與TC的含量(s,mg·dL-1)

注：1.與空白對照組比較，◆◆P<0.01，極顯著性差異；◆P<0.05，顯著性差異。2.與高脂模型對照組比較，**P<0.01，極顯著性差異；*P<0.05，顯著性差異。

3.4 復方降脂軟膠囊對小鼠體重和肝臟系數(shù)的影響(見表3)

由表3可知，連續(xù)給藥4周后，與空白對照組相比，高脂模型對照組小鼠體重極顯著增加，說明長期的高脂飲食會影響體重變化。軟膠囊低、中、高3個劑量組在實驗期內(nèi)的增重均極顯著低于高脂模型對照組(P<0.01)，說明軟膠囊內(nèi)容物可以控制高脂血癥小鼠的體重增長趨勢。在小鼠肝臟系數(shù)方面，軟膠囊低、中、高3個劑量組均顯著低于高脂模型對照組(P<0.05)，說明軟膠囊內(nèi)容物能夠改善高脂飲食引起的肝臟系數(shù)變化。

表3 各組小鼠體重與肝臟系數(shù)結(jié)果(s)

注：1.與空白對照組比較，◆◆P<0.01，極顯著性差異；◆P<0.05，顯著性差異。2.與高脂模型對照組比較，**P<0.01，極顯著性差異；*P<0.05，顯著性差異。

4 結(jié)論

我們研究以脂質(zhì)代謝紊亂的高脂血癥小鼠作為實驗對象，通過灌胃給予復方降脂軟膠囊內(nèi)容物，考察其是否具有調(diào)節(jié)血脂的功效。上述結(jié)果表明，軟膠囊內(nèi)容物3種不同劑量灌胃小鼠后都能不同程度地改善小鼠的血脂水平，降低其血漿中TC、TG、LDL-C含量，并能顯著提高血漿中HDL-C的含量。分析其原因，可能與復方降脂軟膠囊中含有豐富的不飽和脂肪酸、大豆異黃酮、納豆激酶和木酚素等有關(guān)，可能與調(diào)節(jié)血脂[9]、抗氧化[10]、降低血漿纖維蛋白原[11]等綜合作用的結(jié)果。我們研究結(jié)果還顯示復方降脂軟膠囊能夠控制高脂血癥小鼠體重增長，改善由脂質(zhì)代謝紊亂引起的肝臟系數(shù)變化，但是其作用機理有待進一步研究。小鼠急性毒性實驗證明，小鼠急性毒性實驗測不出LD50，最大耐受量為10g/Kg，相當于人推薦用量的300倍，說明復方降脂軟膠囊屬于無毒級。

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[責任編輯 李武營]

Pharmacodynamic and Toxicological Tests of Soft Capsule on Blood Lipids Regulation of Mice with Hyperlipemia

1. Eucommia ulmoides Cultivation and Utilization of Henan Engineering Laboratory，Kaifeng 475004, China; 2. Henan International Joint Laboratory of traditional Chinese Medicine，Kaifeng 475004, China; 3.pharmaceutical of College of Henan University，Kaifeng 475004, China

〔Objective〕To investigate the effect of compound lipid lowering soft capsule in diet-induced hyperlipemia mice.〔Methods〕Sixty Kunming male mice were randomly divided into 6 groups:normol control group (NC), high fat model control group(MC), lovastatin control group,soft capsule high dose group, soft capsule medium group, soft capsule low dose group. The hyperlipemia model was established by feeding the mice of high-fat model control group and the drug dose group with high-Nfat diet.With different feed continuous feeding for two weeks,the mice of NC and MC were treated with 0.5% CMC-Na.Mice of lovastatin control group were treated with lovastatin by gavage,and mice of the three soft capsule dose were treated with corresponding dose of soft capsule contents.Weighed every two days.The plasma total cholesterol(TC),triglyceride(TG),low density lipoprotein cholesterol(LDL-C), high density lipoprotein cholesterol (HDL-C)levels and liver coefficient were evaluated after four weeks.〔Results〕Compound lipid-lowering soft capsule could significantly reduced hyperglycemia mice plasma TC, TG, LDL-C level.The HDL-C could also increased.Furthermore, the weight and liver coefficient of hyperlipemia mice were reduced.〔Conclusion〕Compound lipid lowering soft capsule had a good hypolipidemic effect and it could controlled the weight gain in mice and improved the liver coefficient change that caused by lipid metabolic disorder.

lipid lowering soft capsule; hyperlipemia; mice; regulation of blood lipids

1672-7606(2017)01-0019-04

2016-08-10

河南省教育廳科學技術(shù)研究重點項目(16B360001)；國家中藥標準化項目(ZYBZH-Y-HEN-19)

梁曉煒(1991-)，女，河南安陽人，碩士研究生，從事中藥活性成分和質(zhì)量控制研究工作。

李欽(1965-)，男，河南鄭州人，博士，教授，碩士生導師，從事中藥質(zhì)量評價及新藥研究工作。

R285.5

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