不同菌種發(fā)酵對(duì)豆豉游離脂肪酸構(gòu)成的影響

謝艷華，陳力力，2，謝靚，李夢(mèng)丹，李跑，陳淼芬，蔣立文，2*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410128；2.食品科技和生物技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南長(zhǎng)沙410128；3.獸用中藥資源與中獸藥創(chuàng)制國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心，湖南長(zhǎng)沙410128）

不同菌種發(fā)酵對(duì)豆豉游離脂肪酸構(gòu)成的影響

謝艷華1，陳力力1，2，謝靚1，李夢(mèng)丹1，李跑1，陳淼芬3，蔣立文1，2*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410128；2.食品科技和生物技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南長(zhǎng)沙410128；3.獸用中藥資源與中獸藥創(chuàng)制國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心，湖南長(zhǎng)沙410128）

熟化黃豆分別接種毛霉（總狀毛霉）、細(xì)菌（納豆芽孢桿菌）和曲霉（米曲霉），經(jīng)不同發(fā)酵工藝形成三種不同類(lèi)型的豆豉，研究三種不同菌種接種發(fā)酵處理對(duì)豆豉中游離脂肪酸構(gòu)成的影響。結(jié)果表明熟化黃豆、毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉、曲霉型豆豉分別鑒定出9種、11種、9種、8種游離脂肪酸；四種樣品中游離脂肪酸含量從高到低依次是毛霉型豆豉（3736.3mg/100g）＞熟化黃豆（1911.16mg/100g）＞細(xì)菌型豆豉（1 421.02 mg/100 g）＞曲霉型豆豉（924.55 mg/100 g），多不飽和脂肪酸含量分別為毛霉型豆豉（2 087.51 mg/100 g）＞熟化黃豆（1 065.53 mg/100 g）＞細(xì)菌型豆豉（731.17 mg/100 g）＞曲霉型豆豉（478.64 mg/100 g）。研究結(jié)果表明，經(jīng)不同菌種發(fā)酵的豆豉游離脂肪酸組成和含量有差異。

豆豉；總狀毛霉；納豆芽孢桿菌；米曲霉；游離脂肪酸

本試驗(yàn)擬在黃豆發(fā)酵過(guò)程中，將總狀毛霉（Mucor racemosus）、納豆芽孢桿菌（Bacillus natto）、米曲霉（Aspergillus oryzae）三者作為發(fā)酵劑分別接種其中，通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）法進(jìn)行分析、鑒定，通過(guò)與脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比，分析比較其中的游離脂肪酸組成和含量情況，探討豆豉發(fā)酵加工過(guò)程中3種菌株對(duì)游離脂肪酸變化所起的作用，以期為合理有效地利用、開(kāi)發(fā)及推廣發(fā)酵豆制品提供可靠數(shù)據(jù)，為傳統(tǒng)發(fā)酵大豆制品升級(jí)提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黃豆：購(gòu)于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)東之源超市；總狀毛霉（Mucor racemosus）CGMCC8700、納豆芽孢桿菌（Bacillus natto）：本教研室從納豆中分離并純化；米曲霉（Aspergillusoryzae）AS3.042：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院提供。

甲醇溶液、正己烷（均為色譜純）、無(wú)水硫酸鈉、KOH、H2SO4、氯仿、異丙醇、乙酸、乙醚（均為分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；37種脂肪酸甲酯混標(biāo)：美國(guó)西格瑪奧德里奇公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-20AT氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：日本島津公司；ML204/02精密天平：梅特勒-托利多（上海）儀器有限公司；KQ5200DE超聲波清洗器：昆山超聲儀器有限公司；DHG-9246A電熱恒溫干燥箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；XW-80A漩渦混合器：上海青浦滬西儀器廠；2323K冷凍離心機(jī)：德國(guó)HERMLE公司；FW100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)：天津市太斯特儀器有限公司；SAX/PSA氨丙基固相萃取柱（6 mL，500 mg）：天津博納艾杰爾科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

先將37種脂肪酸甲酯混標(biāo)配制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和標(biāo)準(zhǔn)工作液。

37種脂肪酸甲酯混標(biāo)儲(chǔ)備液：將質(zhì)量濃度為10 g/L的37種脂肪酸甲酯混標(biāo)1 mL移至10 mL容量瓶中，并用正己烷定容。-20℃條件下避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：吸取2.5 mL37種脂肪酸甲酯混標(biāo)儲(chǔ)備液于5 mL容量瓶中，并用正己烷定容，制成0.500 0 g/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，再?gòu)闹形?.5 mL于新的5 mL容量瓶中，正己烷定容，制成0.250 0 g/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，以此類(lèi)推，逐級(jí)稀釋，分別制成0.500 0 g/L、0.250 0 g/L、0.050 0 g/L、0.025 0 g/L、0.0100g/L、0.0050g/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液以供GC-MS檢測(cè)使用。

使用預(yù)先配制好的37種脂肪酸甲酯混標(biāo)儲(chǔ)備液和標(biāo)準(zhǔn)工作液1.000 0 g/L、0.500 0 g/L、0.250 0 g/L、0.125 00 g/L、0.100 0 g/L、0.050 0 g/L在給定GC-MS條件下進(jìn)樣，進(jìn)樣量l μL，每個(gè)濃度的工作液重復(fù)進(jìn)樣3次。以脂肪酸甲酯質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 純種毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉、曲霉型豆豉的制作

純種毛霉型豆豉的制作：黃豆精選去雜→浸泡→水洗→熟化（121℃、20 min）→冷卻→接種擴(kuò)大培養(yǎng)的毛霉菌→前發(fā)酵（25℃、48～72 h）→厭氧后發(fā)酵（8%食鹽、0.5%蒸餾酒、1%生姜，發(fā)酵時(shí)間30 d以上）→成熟。

純種細(xì)菌型豆豉的制作：黃豆精選去雜→浸泡約12 h使體積增加至2倍左右→熟化（121℃、20 min）→冷卻→接種擴(kuò)大培養(yǎng)的納豆芽孢桿菌液→40℃發(fā)酵24h→冷藏48h。

純種曲霉型豆豉的制作：黃豆精選去雜→浸泡（夏季4～6 h）→熟化（121℃、20 min）→攤涼→冷卻→接種曲霉菌→制曲（30～35℃、48～72 h）→拌料（8%食鹽、2%白酒和1%的甜酒）→裝壇→厭氧保溫后酵3個(gè)月以上。

1.3.3 熟化黃豆、毛霉型、細(xì)菌型和曲霉型豆豉粗脂肪提取[12]

稱取熟化黃豆、毛霉型豆豉、成熟細(xì)菌型豆豉和曲霉型豆豉各60 g，置于80℃烘箱中干燥至恒質(zhì)量，研磨粉碎后過(guò)40目篩得到干粉。將準(zhǔn)確稱取的0.12 g干黃豆粉和干豆豉粉置于15 mL試管中，加入正己烷6 mL。超聲波功率350 W，溫度40℃，提取時(shí)間為30 min。

1.3.4 熟化黃豆、毛霉型、細(xì)菌型和曲霉型豆豉游離脂肪酸

的分離[13]

稱取熟化黃豆、成熟毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉和曲霉型豆豉干粉0.36 g，用1 mL氯仿溶解，然后經(jīng)氨丙基硅膠固相萃取柱吸附，用3 mL氯仿異丙醇（2∶1，V/V）洗脫中性脂肪，用3 mL的2%乙酸-乙醚溶液洗脫游離脂肪酸，將樣品溶劑用氮?dú)獯蹈伞?/p>

1.3.5 熟化黃豆、毛霉型、細(xì)菌型和曲霉型豆豉游離脂肪酸

甲酯化

在已提取游離脂肪酸的15 mL試管中，加入0.5 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液3 mL，60℃水浴酯化15 min，冷卻至室溫，加入體積分?jǐn)?shù)5%硫酸-甲醇溶液3 mL，60℃水浴酯化15min，冷卻后加入少許無(wú)水硫酸鈉，4000r/min離心2min。靜置分層，吸取上清液于干燥潔凈試管中，使用漩渦混合器使其混合均勻，通過(guò)0.22μm的濾膜過(guò)濾后注入干燥好的潔凈樣品瓶中。

1.3.6 GC-MS分析條件

氣相色譜條件：色譜柱：CD-WAX石英毛細(xì)管柱（30m× 0.25 mm，0.25 μm）；升溫程序：柱溫45℃，保持1 min，以5℃/min速率升溫至290℃，最后保持2 min。載氣：高純氦氣（99.999%）；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度為250℃；不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量1 μL。

質(zhì)譜條件：電子電離（electronic ionization，EI）源；離子源溫度200℃；發(fā)射電流150μA；倍增器電壓1037V；萃取頭接口溫度220℃；電子能量70eV；質(zhì)量掃描范圍45～500m/z。

1.3.7 定性定量方法

樣品均進(jìn)行3次重復(fù)，將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行定性和定量分析，采用SAS、Origin7.5等軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，比較不同方法之間的差異性。

定性分析：將檢測(cè)信息用美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究所（nationalinstitute ofstandardsandtechnology，NIST）14s.LIB譜庫(kù)檢索，查詢文獻(xiàn)資料，對(duì)熟化黃豆、毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉和曲霉型豆豉中各脂肪酸甲酯進(jìn)行核對(duì)和確認(rèn)（相似度值≥90%，百分含量≥0.1%）。

定量分析：采用峰面積歸一化法計(jì)算各種成分的相對(duì)含量，外標(biāo)法計(jì)算各種成分的絕對(duì)含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 目標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)曲線及其相關(guān)系數(shù)

按1.3.6中的色譜條件，經(jīng)過(guò)GC-MS分析得到37種脂肪酸甲酯混標(biāo)總離子流色譜圖見(jiàn)圖1。根據(jù)各相關(guān)色譜峰的離子質(zhì)量，并檢索NIST14s.LIB譜庫(kù)，確定其脂肪酸的種類(lèi)。預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示，4種樣品中含有的脂肪酸大致有11種，其主要脂肪酸分別為棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸和亞麻酸。由圖1可知，脂肪酸甲酯總離子流圖基線穩(wěn)定且離子峰基本分離。

圖1 脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流色譜圖Fig.1 Total ion chromatograms of fatty acid methyl ester mixed standards

根據(jù)不同質(zhì)量濃度37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流色譜圖，以標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，相對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 主要脂肪酸甲酯線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Linear regression equations,linear ranges and detection limits of main fatty acid methyl esters

由表1可知，各標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程相關(guān)系數(shù)R2均＞0.9990，說(shuō)明在測(cè)定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，幾種脂肪酸甲酯線性關(guān)系良好，適合于4種大豆及豆豉相關(guān)脂肪酸的定量分析。

2.2 熟化黃豆、毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉及曲霉型豆豉游離脂肪酸的定量分析及不同發(fā)酵劑對(duì)豆豉游離脂肪酸種類(lèi)、含量的影響

熟化黃豆、毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉及曲霉型豆豉中游離脂肪酸的GC-MS總離子流圖見(jiàn)圖2。

圖2 熟化黃豆、毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉及曲霉型豆豉游離脂肪酸的GC-MS總離子流色譜圖Fig.2 Total ion chromatogram of free fatty acid in cooked soybean, Mucor-type Douchi,bacterial-type Douchi andAspergillustype Douchi by GC-MS

根據(jù)NIST 14s.LIB質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)和人工譜圖解析相結(jié)合的手段將色譜圖經(jīng)行比對(duì)，對(duì)總離子流圖中各組分進(jìn)行峰面積歸一化，結(jié)合脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的熟化黃豆、毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉以及曲霉型豆豉中游離脂肪酸種類(lèi)及含量（以干基計(jì)）（表2）。熟化黃豆、毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉、曲霉型豆豉分別含有9種、11種、9種、8種游離脂肪酸，與毛霉型豆豉相比，原料黃豆和細(xì)菌型豆豉均未檢測(cè)到肉豆蔻酸和（Z）-十六烯酸兩種游離脂肪酸，而曲霉型豆豉除了未檢測(cè)到上述兩種游離脂肪酸，順式-11-二十碳烯酸也未檢測(cè)到。微生物具有分解脂質(zhì)的作用，熟化黃豆接種毛霉后，黃豆中的油脂在毛霉和酯酶的作用下，分解得到各種游離脂肪酸，包括肉豆蔻酸和（Z）-十六烯酸。曲霉型豆豉與原料黃豆相比，不含有順式-11-二十碳烯酸，是由于在氧氣充足的條件下不飽和脂肪酸發(fā)生氧化作用[14]。

從脂肪酸的飽和程度分析，由表2可知，熟化黃豆、細(xì)菌型豆豉和曲霉型豆豉均含有5種飽和游離脂肪酸，毛霉型豆豉含有6種飽和游離脂肪酸；熟化黃豆和細(xì)菌型豆豉均含有2種單不飽和游離脂肪酸，而毛霉型豆豉含有3種單不飽和游離脂肪酸，曲霉型豆豉僅1種單不飽和游離脂肪酸；四種樣品中均含有2種多不飽和游離脂肪酸。四者的游離脂肪酸飽和程度比例和種類(lèi)基本類(lèi)似。

表2 熟化黃豆、毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉、曲霉型豆豉中游離脂肪酸的鑒定結(jié)果Table 2 Identification results of free fatty acids in cooked soybean,Mucor-type Douchi,bacterial-type Douchi andAspergillus-type Douchi

熟化黃豆和豆豉中含有幾種C13～C22的飽和游離脂肪酸，如棕櫚酸、硬脂酸等。傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為飽和脂肪酸是一類(lèi)“壞”的脂肪酸，早期研究[15]發(fā)現(xiàn)，富含飽和脂肪酸的膳食會(huì)使血清總膽固醇升高，尤其是低密度脂蛋白膽固醇的水平，增加患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。但最近有研究[16]表明飽和脂肪酸攝入不足也會(huì)對(duì)人體造成影響。另外，還有研究發(fā)現(xiàn)硬脂酸能作為ω-3多不飽和脂肪酸的補(bǔ)充來(lái)源[17]。因此，對(duì)于黃豆及豆豉的喜愛(ài)者不必有過(guò)多的擔(dān)憂。

單不飽和脂肪酸（mono-unsaturatedfattyacids，MUFA）作為膳食脂肪酸中的一類(lèi)，具有特殊的生理功能和獨(dú)特的物理、化學(xué)特性，在日常飲食中也與人們接觸密切。單不飽和脂肪酸最具代表性的是油酸，四種樣品中油酸含量均較高，毛霉型豆豉中油酸含量高達(dá)652.24 mg/100 g。多年來(lái)，對(duì)單不飽和脂肪酸的生理與保健作用存在分歧，但近年來(lái)的研究普遍認(rèn)為順式單不飽和脂肪酸對(duì)膽固醇和血糖有明顯降低的作用[18-20]，即油酸有降低膽固醇和血糖的作用，在四種樣品中毛霉型豆豉的油酸含量最高，降膽固醇和血糖的效果可能更顯著。

目前認(rèn)為營(yíng)養(yǎng)上最具價(jià)值的兩類(lèi)脂肪酸是n-6系列和n-3系列多不飽和脂肪酸（poly-unsaturated fatty acids，PUFA），主要包括亞油酸和亞麻酸。四種樣品中含有較高的多不飽和脂肪酸，含量最低曲霉型豆豉也有478.64 mg/100 g，毛霉型豆豉中多不飽和脂肪酸含量高達(dá)2087.51mg/100g。亞油酸有助于生長(zhǎng)、發(fā)育及妊娠，特別是皮膚和腎的完整性只依賴n-6系列多不飽和脂肪酸，其中亞油酸最為有效[21]。亞麻酸在體內(nèi)代謝可生成二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid，EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA），同時(shí)具備多不飽和脂肪酸的多種生理功能，突出表現(xiàn)在降血脂和對(duì)心血管疾病的防治上[22]。對(duì)于需要攝入較多多不飽和脂肪酸的人群，適當(dāng)?shù)囟嗍秤命S豆及其制品特別是毛霉型豆豉是比較適宜的。

毛霉型豆豉的飽和游離脂肪酸含量是熟化黃豆的1.90倍，不飽和游離脂肪酸是熟化黃豆的1.98倍，油酸、亞油酸、亞麻酸分別是熟化黃豆的2.02、1.94、2.05倍；熟化黃豆的飽和游離脂肪酸含量是細(xì)菌型豆豉的1.24倍，不飽和游離脂肪酸是細(xì)菌型豆豉的1.39倍；而熟化黃豆的飽和游離脂肪酸含量是曲霉型豆豉的1.70倍，不飽和游離脂肪酸是細(xì)菌型豆豉的2.25倍。毛霉型豆豉中游離脂肪酸遠(yuǎn)高于熟化黃豆中游離脂肪酸的原因有以下幾個(gè)：一方面熟化黃豆在酯酶的作用下油脂水解產(chǎn)生大量游離脂肪酸，毛霉能夠產(chǎn)生脂肪酶，將其中的脂肪分解成甘油和游離脂肪酸[23]，使豆豉產(chǎn)生芳香物質(zhì)，同時(shí)改善豆豉風(fēng)味和促進(jìn)豆豉成熟[24]。另一方面毛霉型豆豉后發(fā)酵階段是一個(gè)厭氧發(fā)酵階段，且食鹽、白酒等的添加使大部分微生物生長(zhǎng)受到抑制，在氧氣含量較低的情況下，脂肪酸自動(dòng)氧化速率大大降低。而熟化黃豆接種納豆芽孢桿菌和米曲霉后游離脂肪酸含量有所降低的原因可能是以下幾個(gè)：第一，游離脂肪酸的自動(dòng)氧化的速度高于油脂水解的速度；第二，在酶的作用下，飽和游離脂肪酸發(fā)生β-氧化作用而形成酮酸和甲基酮；第三，發(fā)酵過(guò)程中微生物的生長(zhǎng)需要能量，消耗了大量的碳水化合物之后，需要消耗脂肪酸作為能量補(bǔ)充。分解脂肪酸的酶系可以分解豆豉中的游離脂肪酸，使之成為酯類(lèi)等，從而賦予產(chǎn)品特有的香味。第四，在曲霉菌存在的條件下，飽和游離脂肪酸發(fā)生酶促氧化[25]。有研究發(fā)現(xiàn)丹貝（根霉型豆豉）中不飽和脂肪酸含量是原料黃豆的5.52倍，納豆（細(xì)菌型豆豉）的7.15倍[11]。表明不同微生物和不同加工工藝對(duì)脂肪酸有影響，具體原因有待進(jìn)一步探究。

3 結(jié)論

本研究采用正己烷提取熟化黃豆和豆豉中的脂肪酸，通過(guò)固相萃取柱分離出游離脂肪酸，經(jīng)甲酯化處理，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析，熟化黃豆、毛霉型豆豉、細(xì)菌型豆豉、曲霉型豆豉分別鑒定出9種、11種、9種、8種游離脂肪酸，其主要脂肪酸均為棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸。通過(guò)與脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照，對(duì)樣品中的游離脂肪酸進(jìn)行定量分析，其中毛霉型豆豉中不飽和脂肪酸含量最高，達(dá)2 757.19 mg/100 g，分別是黃豆、細(xì)菌型豆豉、曲霉型豆豉的1.98、2.75、4.44倍。樣品中還含有其他種類(lèi)的含量較少的脂肪酸如：毛霉型豆豉中含有肉豆蔻酸7.60 mg/100 g等。研究表明，不同發(fā)酵工藝和發(fā)酵劑使豆豉中游離脂肪酸在組成及含量上均存在一定的差異。本研究可助力將不同發(fā)酵豆制品開(kāi)發(fā)成不同功能性保健食品，同時(shí)為豆豉中脂肪酸指紋圖譜的建立提供數(shù)據(jù)積累和研究依據(jù)。

[1]楊伊磊，陳力力，李夢(mèng)丹，等.不同條件下毛霉豆豉制曲過(guò)程的動(dòng)態(tài)分析[J].糧食與油脂，2015（11）：30-33.

[2]CHEN K I,ERH M H,SU N W,et al.Soyfoods and soybean products: from traditional use to modern applications[J].Appl Microbiol Biot, 2012,96(1):9-22.

[3]VILLARES A,ROSTAGNO M A,GARCíA-LAFUENTE A,et al.Content and profile of isoflavones in soy-based foods as a function of the production process[J].Food Bioprocess Technol,2011,4(1):27-38.

[4]FAN J,HU X,TAN S,et al.Isolation and characterisation of a novel angiotensin I-converting enzyme-inhibitory peptide derived from douchi, a traditional Chinese fermented soybean food[J].J Sci Food Agr,2009, 89(4):603-608.

[5]孫紅梅，羅蓉，陳瑞儀.四季豆和淡豆豉提取物降血糖動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2016，22（2）：72-75.

[6]索化夷，趙欣，騫宇，等.永川豆豉發(fā)酵過(guò)程中總糖和氨基酸變化與滋味的形成[J].食品科學(xué)，2015，36（21）：100-104.

[7]YUICHI A,MASANORI H,HIROKI N,et al.Very-long-chain polyunsaturated fatty acids accumulate in phosphatidylcholine of fibroblasts from patients withZellweger syndromeand acyl-CoA oxidase1 deficiency[J].Mol Cell Biol Lipid,2014,1841(4):610-619.

[8]TAHA A Y,CHEON Y,MA K,et al.Altered fatty acid concentrations in prefrontal cortex of schizophrenic patients[J].J Psychi Res,2013,47(5): 636-643.

[9]JOHNSON M,M?NSSON J E,?STLUND S,et al.Fatty acids in ADHD: plasma profiles in a placebo-controlled study of Omega 3/6 fatty acids in children and adolescents[J].ADHD,2012,4(4):199-204.

[10]周思靜，李淑榮，王志東，等.丹貝營(yíng)養(yǎng)成分的研究[J].北京：食品工業(yè)科技，2013，34（2）：336-338.

[11]周思靜.丹貝生產(chǎn)工藝優(yōu)化及功能特性的研究[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2012.

[12]謝艷華，謝靚，陳森芬，等.毛霉型豆豉和黃豆脂肪酸檢測(cè)前處理方法比較研究[J].中國(guó)釀造，2016，35（8）：32-36.

[13]孫為正.廣式臘腸加工過(guò)程中脂質(zhì)水解、蛋白質(zhì)降解及風(fēng)味成分變化研究[D].廣州：華南理工大學(xué)，2011.

[14]何東平.油脂化學(xué)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2013：25-30.

[15]OKSMAN M,IIVONEN H,HOGYES E,et al.Impact of different saturated fatty acid,polyunsaturated fatty acid and cholesterol containing diets on beta-amyloid accumulation in APP/PS1 transgenic mice[J]. Neurobiol Dis,2006,23(3):563-572.

[16]LEMAITRE R N,KING I B,RICE K,et al.Erythrocyte very long-chain saturated fatty acids associated with lower risk of incident sudden cardiac arrest[J].Prostag Leukotr Ess,2014,91(4):149-153.

[17]WALKER C G,JEBB S A,CALDER P C.Stearidonic acid as a supplemental source of ω-3 polyunsaturated fatty acids to enhance status for improved human health[J].Nutrition,2013,29(2):363-369.

[18]FINUCANE O M,LYONS C L,MURPHY A M,et al.Monounsaturated fatty acid enriched high fat-diets impede adipose NLRP3 inflammasome mediated IL-1 β secretion and insulin resistance despite obesity [J].Diabetes,2015,64(6):2116-2128.

[19]LI Z,ZHANG Y,SU D,et al.The opposite associations of long-chain versusverylong-chainmonounsaturatedfattyacidswithmortalityamong patients with coronary artery disease[J].Heart,2014,100(20):1597-1605.

[20]BARROS C R D,CEZARETTO A,CURTI M L R,et al.Realistic changes in monounsaturated fatty acids and soluble fibers are able to improve glucose metabolism[J].Diabet Metab Syndr,2014,136(6): 1-8.

[21]ALVHEIM A R,TORSTENSEN B E,LIN Y H,et al.Dietary linoleic acid elevates endogenous 2-arachidonoylglycerol and anandamide in Atlantic salmon(Salmo salarL.)and mice,and induces weight gain and inflammation in mice[J].Brit J Nutr,2013,109(8):1508.

[22]KIM K B,NAM Y A,KIM H S,et al.α-Linolenic acid:nutraceutical, pharmacological and toxicological evaluation[J].Food Chem Toxicol, 2014,70(5):163-178.

[23]封莉，鄧紹林，黃明，等.脂肪酶對(duì)中式香腸脂肪降解、氧化和風(fēng)味的影響[J].食品科學(xué)，2015，36（1）：51-58.

[24]劉思佳，孫曉東，盧萌萌，等.傳統(tǒng)發(fā)酵豆醬中產(chǎn)脂肪酶菌株的篩選[J].中國(guó)釀造，2015，34（12）：34-37.

[25]郜海燕，華穎，陶菲，等.富含不飽和脂肪酸食品加工過(guò)程中的組分變化研究與展望[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2011，11（9）：134-143.

Effect of starter cultures on free fatty acid composition of Douchi

XIE Yanhua1,CHEN Lili1,2,XIE Jing1,LI Mengdan1,LI Pao1,CHEN Miaofen3,JIANG Liwen1,2*
(1.College of Food Science and Technology,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,China;2.Hunan Provincial Key Laboratory of Food Science and Biotechnology,Changsha 410128,China;3.National and Provincial Union Engineering Research Center for the Veterinary Herbal Medicine Resources and Initiative,College of Food Science and Technology,Changsha 410128,China)

Mucor racemosus,Bacillus nattoandAspergillus oryzaewere separately inoculated into cooked soybeans.Three different types of Douchi were prepared with different fermentation processes.The effect of these three strains on free fatty acids composition in Douchi was investigated.The results showed that there were 9,11,9,and 8 kinds of free fatty acids identified in cooked soybean,Mucor-type Douchi,bacterial-type Douchi and Aspergillus-type Douchi,respectively.The total free fatty acids contents in four samples in order wasMucor-type Douchi(3 736.3 mg/100 g),cooked soybean(1 911.16 mg/100 g),bacterial-type Douchi(1 421.02 mg/100 g),Aspergillus-type Douchi(924.55 mg/100 g).The polyunsaturated fatty acids contents in four samples in order wereMucor-type Douchi(2 087.51 mg/100 g),cooked soybean(1 065.53 mg/100 g),bacterial-type Douchi (731.17 mg/100 g)andAspergillus-type Douchi(478.64 mg/100 g).The results showed that the composition and contents of free fatty acids in different fermented Douchi were different.

Douchi;Mucor racemosus;Bacillus natto;Aspergillus oryzae;free fatty acids

TS214.2

0254-5071（2017）03-0080-05

10.11882/j.issn.0254-5071.2017.03.017

2016-12-11

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31371828）

謝艷華（1990-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。

*通訊作者：蔣立文（1968-），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。

豆豉是一種傳統(tǒng)調(diào)味副食品，古代稱為“幽菽”，也叫“嗜”。豆豉以黑豆或黃豆為主要原料，利用毛霉、曲霉或者細(xì)菌蛋白酶的作用，分解大豆蛋白質(zhì)，達(dá)到一定程度時(shí)，通過(guò)加鹽、加酒、干燥等方法，抑制酶的活力，延緩發(fā)酵過(guò)程而制成[1]。研究發(fā)現(xiàn)，豆豉具有抗氧化[2-3]、降血壓[4]、降血糖[5]等多種保健功能。

豆豉在發(fā)酵成熟過(guò)程中發(fā)生著復(fù)雜的化學(xué)變化，主要包括碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪的降解，使其口感更加細(xì)膩綿軟[6]。豆豉風(fēng)味是許多種化合物共同作用并在量上達(dá)到一定平衡才產(chǎn)生的，其中脂類(lèi)物質(zhì)在風(fēng)味的形成中起很重要作用。脂肪組分中，游離脂肪酸不僅是營(yíng)養(yǎng)成分，而且是風(fēng)味形成的前體物質(zhì)，可以改善口感質(zhì)構(gòu)，同時(shí)有保健功效。豆豉中游離脂肪酸主要包含硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸等，這些脂肪酸能顯著影響和改善人類(lèi)神經(jīng)或精神類(lèi)疾病，作用于內(nèi)分泌失調(diào)以及代謝綜合癥相關(guān)的疾病，如糖尿病[7-9]。游離脂肪酸中的不飽和脂肪酸在豆豉風(fēng)味物質(zhì)形成中起著非常重要的作用，其含量越多，最終形成的風(fēng)味就越濃。發(fā)酵型產(chǎn)品微生物能夠分泌脂肪酶，對(duì)產(chǎn)品中游離脂肪酸有一定的影響，有研究發(fā)現(xiàn)丹貝中的不飽和脂肪酸、必需脂肪酸中的亞油酸和亞麻酸的含量與大豆中脂肪酸相比均顯著性增加[10]，并且接種不同微生物發(fā)酵劑對(duì)產(chǎn)品中游離脂肪酸的影響不同[11]。