恩度聯(lián)合化療對晚期非小細胞肺癌患者血清EPO、EPO-R mRNA水平的影響

王強，馬玲，陶潔，韓志剛

(新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊830011)

·臨床研究·

恩度聯(lián)合化療對晚期非小細胞肺癌患者血清EPO、EPO-R mRNA水平的影響

王強，馬玲，陶潔，韓志剛

(新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊830011)

目的 觀察恩度聯(lián)合化療對晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者血清促紅細胞生成素(EPO)、促紅細胞生成素受體(EPO-R)mRNA水平的影響。方法 選擇22例晚期NSCLC患者，在順鉑聯(lián)合三代化療藥物的基礎上加用恩度，共治療2周期。采用RT-PCR法檢測治療前后血清EPO、EPO-R mRNA水平，采用RECIST1.0評價標準評價臨床療效，分析EPO、EPO-R mRNA水平與療效的關系。結果 治療后患者血清EPO、EPO-R mRNA水平均降低，與治療前比較P均<0.05。治療后有效9例，無效13例。有效患者血清EPO、EPO-R mRNA水平較治療前降低(P均<0.05)，無效患者治療前后無明顯變化(P均>0.05)。結論 恩度聯(lián)合化療可降低晚期NSCLC患者血清EPO、EPO-R mRNA水平，EPO、EPO-R mRNA水平變化對療效評價有參考意義。

非小細胞肺癌；促紅細胞生成素；促紅細胞生成素受體；重組人血管內(nèi)皮抑制素；藥物療法

恩度(重組人血管內(nèi)皮抑制素)為血管抑制素類新生物制品，具有多靶點發(fā)揮抗腫瘤血管生成的作用。其作用機制是通過抑制形成血管的內(nèi)皮細胞遷移而抑制腫瘤新生血管的生成，阻斷腫瘤的營養(yǎng)供給，從而抑制腫瘤增殖或轉移。促紅細胞生成素(EPO)是細胞因子超家族成員，與促紅細胞生成素受體(EPO-R)結合，在紅細胞的生成過程中發(fā)揮主要調(diào)節(jié)作用。研究表明，EPO與EPO-R在人類腫瘤細胞中的表達具有重要作用，可以調(diào)節(jié)腫瘤細胞的生長發(fā)育，引起惡性腫瘤新生血管的生長，與腫瘤的復發(fā)、轉移及預后密切相關[1]。目前，恩度聯(lián)合化療已廣泛用于NSCLC的臨床治療。腫瘤患者使用恩度治療后，血液中血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)水平下降[2]。本研究通過觀察NSCLC患者采取恩度聯(lián)合化療治療前后血清EPO、EPO-R mRNA的變化，探討血清EPO、EPO-R mRNA水平與療效的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院2015年1月～2016年1月收治的初診NSCLC患者22例，男15例、女7例，年齡30～77歲、中位年齡64歲。均經(jīng)病理檢查確診，鱗癌6例、腺癌16例，ⅢB期8例、Ⅳ期14例，ECOG評分0～1分。患者均經(jīng)CT或PET-CT證實有可測量的腫瘤病灶，均按計劃連續(xù)完成2個周期化療，血常規(guī)、肝腎功能及心電圖無明顯異常，排除其他惡性腫瘤病史。患者均簽署知情同意書。

1.2 治療方法 在順鉑聯(lián)合三代化療藥物的基礎上加用恩度，共治療2個周期。其中6例給予GP方案聯(lián)合恩度注射液，16例給予PP方案聯(lián)合恩度注射液。GP方案：吉西他濱1 000 mg/m2靜滴第1、8天，順鉑75 mg/m2靜滴1 d或總量分2～3 d注射，21 d為1個周期。PP方案：培美曲塞500 mg/m2靜滴第1天，順鉑75 mg/m2靜滴1 d或總量分2～3 d注射，21 d為1個周期。恩度注射液于治療周期的第1天開始使用300 mL推注泵持續(xù)泵入，連用10 d。

1.3 療效評價標準 采用WHO實體腫瘤療效評價(RECIST1.0)標準，病灶消失且持續(xù)4周為完全緩解(CR)；腫瘤最大長徑之和減少≥30%，并保持4周以上為部分緩解(PR)；出現(xiàn)新病灶或基線病灶長徑之和增加≥20%為疾病進展(PD)；病灶增加未達到PD或縮小未達到PR為病灶穩(wěn)定(SD)?；熋舾袨镃R+PR，非敏感為SD+PD。以CR+PR計算有效率，CR+PR+SD計算疾病控制率。

1.4 血清EPO、EPO-R mRNA檢測 采用RT-PCR法。于首次化療前7 d內(nèi)及化療2個周期后，采集患者清晨空腹外周靜脈血3～5 mL，EDTA抗凝，離心分離血清，-80 ℃保存。使用TRIzol試劑盒抽提RNA，逆轉錄合成cDNA，進行PCR擴增。GAPDH引物序列：上游5′-TGGGTGTGAACCATGAGAAGT-3′，下游5′-TGAGTCCTTCCACGATACCAA-3′；EPO基因引物序列：上游5′-CCTGTTGGTCAACTCTTCCC-3′，下游5′-CAGAGCCCGAAGCAGAGT-3′；EPO-R基因引物序列：上游5′-TTGTGGTATCTGACTCTGGCA-3′，下游5′-GCTGGGATAAGGCTGTTCTC-3′。擴增條件：94 ℃ 10 min；94 ℃ 20 s，55 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，共40個循環(huán)。以目的基因與內(nèi)參基因GAPDH的比值表示目的基因的相對表達量，采用2-ΔΔCt法分析各組目的基因的表達差異。

2 結果

2.1 治療前后血清EPO、EPO-R mRNA水平比較 治療前后患者的血清EPO mRNA水平分別為0.88±0.09、0.81±0.13；EPO-R mRNA水平分別為0.91±0.09、0.84±0.07。治療前血清EPO、EPO-R mRNA水平均高于治療后(P均<0.05)。

2.2 血清EPO、EPO-R mRNA水平與療效的關系 治療后CR 1例，PR 8例，SD 8例，PD 5例，有效率為40.9%，疾病控制率為77.3%。有效患者治療前后血清EPO mRNA的水平分別為0.90±0.09、0.79±0.05，EPO-R mRNA水平分別為0.97±0.09、0.80±0.09，治療后均較治療前降低(P均<0.05)。無效患者治療前后血清EPO mRNA水平分別為0.86±0.10、0.82±0.07，EPO-R mRNA水平分別為0.86±0.06、0.87±0.04，治療前后比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。

3 討論

近年來，靶向治療因其可靠的療效及較輕的不良反應，已成為NSCLC最受關注和最有前途的治療手段之一。但適用于靶向治療的患者有限，而且靶向治療患者多數(shù)會出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，因此需要在合適的時機引入化療。然而化療的療效已達到平臺期，因此需要尋找新的治療方法進一步提高療效。研究顯示，在晚期惡性腫瘤臨床試驗中，抗血管生成藥物如貝伐單抗、恩度、沙利度胺等對腫瘤周圍新生血管有明顯的抑制作用，與其他化療藥物聯(lián)合具有協(xié)同效應[3]。恩度具有廣譜抗血管生成活性，已成為SFDA批準使用的新型血管內(nèi)皮抑制劑。研究顯示，恩度聯(lián)合標準化療方案可提高晚期NSCLC患者化療的有效率和臨床收益率，改善局部晚期和晚期NSCLC患者的中位生存時間和總生存率，且不增加化療的嚴重不良反應[4～7]。有研究[8，9]報道，恩度聯(lián)合長春瑞濱與順鉑具有協(xié)同作用，能明顯提高晚期NSCLC的生存率，延長中位腫瘤進展時間，且安全性高。本研究采用恩度聯(lián)合標準化療方案治療晚期NSCLC患者的總有效率為40.9%，疾病控制率為77.3%，高于采用傳統(tǒng)化療方案治療晚期NSCLC的有效率及疾病控制率[10，11]。

腫瘤的生長轉移依賴于血管生成，血管生成促進因子和血管生成抑制因子在腫瘤新生血管的生成過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。VEGF是最重要的血管生成促進因子，NSCLC腫瘤組織中的VEGF mRNA表達顯著高于正常肺組織，其表達與患者預后具有顯著相關性[12]。EPO屬于內(nèi)源性血管生成因子，參與多種人類惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[2]。EPO與其特異性受體EPOR結合后，細胞內(nèi)生物學效應的產(chǎn)生通過多個信號途徑，包括細胞增殖、凋亡和對放化療的敏感性，促使與其相連的激酶激活。我們的前期研究顯示，EPO、EPO-R mRNA表達在NSCLC組織中明顯高于癌旁組織及肺良性病變組織，提示EPO、EPO-R mRNA參與了NSCLC的發(fā)生。EPO、EPO-R mRNA可能通過調(diào)控血管生成，參與了腫瘤血管的形成。本研究結果顯示，晚期NSCLC患者在使用標準化療方案基礎上，聯(lián)合恩度治療后，血清EPO、EPO-R mRNA水平降低。分析其機制可能為：恩度是血管生成抑制劑，它作用于微血管的內(nèi)皮細胞，抑制其遷移，誘導其凋亡，從而抑制血管生成和腫瘤生長。有研究發(fā)現(xiàn)，恩度可直接下調(diào)VEGF mRNA表達，阻斷VEGF受體的信號轉導，阻止VEGF與內(nèi)皮細胞結合,從而抑制VEGF介導的內(nèi)皮細胞遷移和血管生成[13]。

本研究還顯示，臨床療效達到有效的患者，治療后血清EPO、EPO-R mRNA水平較治療前降低，而無效患者治療前后無明顯變化。提示血清EPO、EPO-R mRNA水平可能與臨床療效有關，臨床治療有效的患者，體內(nèi)腫瘤負荷相對減少，進入血液循環(huán)中腫瘤組織生成的EPO、EPO-R也相應減少，故推測其變化可能為療效評價提供參考。

綜上所述，恩度聯(lián)合化療可降低晚期NSCLC患者血清EPO、EPO-R mRNA水平，監(jiān)測EPO、EPO-R mRNA在治療前后的變化有助于判斷療效。由于腫瘤血管生成不僅是這兩種因子起作用，而是若干因素綜合作用的結果，多個信號傳導通路參與其中，故今后還需進行更大規(guī)模的多中心、大樣本、隨機臨床觀察。

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新疆醫(yī)科大學科研創(chuàng)新基金項目(XYDCX201474)。

韓志剛(E-mail: 1378213986@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.06.012

R734.2

B

1002-266X(2017)06-0038-03

2016-08-28)