威海市免疫無高致病性禽流感和免疫無口蹄疫區(qū)動物疫病監(jiān)測體系的建立與應用

張華杰 尹昭智 徐 棟

（①山東省威海市動物疫病預防控制中心 264205 ①山東省威海市動物衛(wèi)生監(jiān)督所）

威海市免疫無高致病性禽流感和免疫無口蹄疫區(qū)動物疫病監(jiān)測體系的建立與應用

張華杰①尹昭智①徐 棟①

（①山東省威海市動物疫病預防控制中心 264205 ①山東省威海市動物衛(wèi)生監(jiān)督所）

威海市免疫無高致病性禽流感和免疫無口蹄疫區(qū)(簡稱無疫區(qū))建設(shè)自2001年啟動，至2016年6月12日建成并進入維持狀態(tài)。2013年以來，威海市無疫區(qū)動物疫病監(jiān)測體系建設(shè)不斷完善，監(jiān)測能力和監(jiān)測隊伍均達到無疫區(qū)管理技術(shù)規(guī)范關(guān)于規(guī)定動物疫病監(jiān)測的要求，承擔了高致病性禽流感和口蹄疫證明無疫、維持無疫、H7N9剔除計劃、小反芻獸疫消滅計劃、畜間布魯氏菌病、種畜禽場主要動物疫病監(jiān)督監(jiān)測，規(guī)模場主要動物疫病凈化，及時發(fā)布監(jiān)測預警信息等任務，為全市無疫區(qū)建設(shè)和重大動物疫病防控提供了重要的技術(shù)支撐。

1 威海市無疫區(qū)動物疫病監(jiān)測體系的建立

1.1 動物疫病監(jiān)測機構(gòu)建立 威海市動物疫病預防控制中心、威海市環(huán)翠區(qū)動物疫病預防控制中心、文登區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務中心、榮成市動物疫病預防控制中心、乳山市畜牧獸醫(yī)工作站分別建有通過農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)實驗室考核的二級生物安全獸醫(yī)實驗室，承擔高致病性禽流感和口蹄疫證明無疫、維持無疫、H7N9剔除計劃、小反芻獸疫消滅計劃、牲畜布魯氏菌病監(jiān)測，規(guī)模場主要動物疫病凈化，及時發(fā)布監(jiān)測預警信息等任務，高區(qū)、經(jīng)區(qū)、臨港區(qū)三個國家級開發(fā)區(qū)屬于非農(nóng)業(yè)縣，無獸醫(yī)實驗室，動物疫病監(jiān)測工作由威海市動物疫病預防控制中心和開發(fā)區(qū)鎮(zhèn)基層站共同承擔。

1.2 獸醫(yī)實驗室檢測能力建立 威海市轄區(qū)5個獸醫(yī)實驗室均具有口蹄疫、高致病性豬藍耳病、豬瘟、豬偽狂犬、豬細小病毒、豬圓環(huán)病毒、豬鏈球菌病、禽流感、禽白血病、雞白痢、新城疫、布魯氏菌病、等重大疫病的病原學和血清學檢測能力，每年都參加省局組織的實驗室檢測能力比對，涵蓋了口蹄疫、禽流感、小反芻獸疫、豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征等重大動物疫病，包括ELISA、HI等血清學方法和PCR等病原學監(jiān)測方法，所有獸醫(yī)實驗室檢測結(jié)果全部準確。

1.3 三級動物疫病監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)建立 全市以規(guī)模場、屠宰場、無害化處理場、集貿(mào)市場、村為流行單元，以高風險區(qū)域為監(jiān)測重點，建立了市、區(qū)市、鎮(zhèn)三級動物疫病監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)。市、區(qū)市、鎮(zhèn)根據(jù)分工分別承擔高致病性禽流感和口蹄疫疫情監(jiān)測、免疫效果監(jiān)測和監(jiān)測采樣工作，對轄區(qū)動物疫情進行全面評估預警。全市在文登區(qū)侯家鎮(zhèn)和乳山市下初鎮(zhèn)辛莊村分別建立病死動物無害化處理場2處，由文登區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務中心和乳山市畜牧獸醫(yī)工作站負責監(jiān)測。

1.4 動物疫病監(jiān)測經(jīng)費保障體系建立 2013年以來威海市所有獸醫(yī)實驗室、疫病監(jiān)測、流行病學調(diào)查、檢疫監(jiān)督、動物隔離、疫情處置、無害化處理、應急物資儲備等工作經(jīng)費足額納入財政預算，確保我市不發(fā)生高致病性禽流感和口蹄疫。三個國家級開發(fā)區(qū)由于沒有獸醫(yī)實驗室，監(jiān)測經(jīng)費由市級財政和開發(fā)區(qū)財政共同負擔。

2 威海市無疫區(qū)動物疫病監(jiān)測體系的應用

2.1 根據(jù)每種動物疫病易感動物的不同，全市分病種建立了動物疫病的抽樣框 根據(jù)每種動物疫病易感動物群的不同，涵蓋威海市所有易感動物，以場和村為單元建立了每種疫病的抽樣框，按照2013-2016年《山東省動物疫病監(jiān)測與流行病學調(diào)查計劃》高致病性禽流感和口蹄疫建立的抽樣單元分別為3022和4032個，抽樣單元每年更新一次，監(jiān)測數(shù)量以膠東半島無疫區(qū)監(jiān)測威海市的配額為依據(jù)；H7N9、小反芻獸疫、新城疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病的布魯氏菌病、結(jié)核病等人畜共患病監(jiān)測數(shù)量，按照中國動物衛(wèi)生與流行病學中心設(shè)計的Epi Sampling Calculator軟件以估計流行率的抽樣方法進行抽樣監(jiān)測。

2.2 進行威海市無疫區(qū)證明無疫、維持無疫的監(jiān)測（1）監(jiān)測技術(shù)路線：一是證明無疫區(qū)內(nèi)部無疫：高致病性禽流感和口蹄疫免疫合格—高致病性禽流感和口蹄疫病原學監(jiān)測陽性率低于某一證明無疫的閾值(比如1%)—沒有感染抗體—臨床病例被動監(jiān)測沒有高致病性禽流感和口蹄疫。二是證明沒有外來病原入侵：野鳥和野生動物無疫—外引動物不攜帶病原。（2）進行高致病性禽流感和口蹄疫常規(guī)主動監(jiān)測(無疫區(qū)凈化監(jiān)測)：口蹄疫感染抗體監(jiān)測和流行病學調(diào)查實驗室檢測方法：豬、牛、羊感染情況檢測首先采用口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP)抗體ELISA方法進行；對NSP抗體檢測結(jié)果為陽性的，牛羊采集O-P液用RT-PCR或熒光RT-PCR方法檢測，如檢測結(jié)果為陰性，應間隔15天再采樣檢測一次，RT-PCR檢測陽性的判定為陽性畜。2015年以前，豬頜下淋巴結(jié)RT-PCR檢測陽性的判定為陽性豬。2015年起生豬NSP抗體檢測結(jié)果為陽性的，間隔2～4周后重復采樣檢測NSP抗體，根據(jù)抗體陽性率變化判斷是否感染口蹄疫病毒，如果NSP抗體水平升高或NSP抗體陽性率在統(tǒng)計學上高于初次檢測陽性率，為口蹄疫病毒傳播 ；NSP抗體水平下降或NSP抗體陽性率在統(tǒng)計學上低于初次檢測陽性率，為口蹄疫病毒未傳播。2013年以來，威海市根據(jù)《膠東半島免疫無高致病性禽流感區(qū)和免疫無口蹄疫區(qū)監(jiān)測凈化抽檢表》中確定的配額，嚴格制定《威海市無規(guī)定疫病區(qū)口蹄疫和高致病性禽流感監(jiān)測凈化方案》并組織實施。在高密度免疫的基礎(chǔ)上，對高致病性禽流感和口蹄疫防控效果進行監(jiān)測、評估和分析。通過血清學和病原學等檢測手段，在畜禽飼養(yǎng)場、養(yǎng)殖小區(qū)、農(nóng)村散養(yǎng)戶、市場和屠宰場等對高致病性禽流感和口蹄疫進行免疫抗體、病原學監(jiān)測，并建立監(jiān)測檔案。全市完成了64個種禽場、112個商品代場、88個散養(yǎng)戶共計264個場點次的29240份高致病性禽流感免疫血清樣品監(jiān)測，檢測H5免疫抗體合格數(shù)為29144份，合格率為99.40%。其中RE-6亞型合格率99.74%、RE-7亞型合格率99.40%、RE-8亞型合格率98.52%。完成了88個種禽場次、160個商品代場次、56個散養(yǎng)戶共計304個場點次禽流感通用型RT-PCR檢測棉拭子及其他樣本21096份，結(jié)果均為陰性。完成了16個種畜場次、160個商品代養(yǎng)殖場次、104個散養(yǎng)戶、8個屠宰場點次共計288個場點次口蹄疫抗體監(jiān)測，監(jiān)測樣品量總數(shù)12424份，合格11640份，合格率93.69%。完成16個種畜場次、168個商品代養(yǎng)殖場次、120個散養(yǎng)戶、16個屠宰場點次共計320個場點次口蹄疫感染抗體監(jiān)測，監(jiān)測豬、牛、羊分別為3872份、1688份、2000份，樣品量總數(shù)7560份，檢測口蹄疫感染抗體陽性樣品場8個，牛陽性樣品24個，豬陽性樣品18個。經(jīng)過對陽性場限制流通并開展調(diào)查、病原學抽樣熒光RT-PCR監(jiān)測等措施處置全部排除口蹄疫野毒感染可能；完成720份豬組織樣品口蹄疫RTPCR檢測，結(jié)果全為陰性。監(jiān)測結(jié)果顯示，四年來年全市高致病性禽流感和口蹄疫的免疫合格率均達到90%以上，免疫合格率較高，免疫效果良好，畜禽得到良好的保護；高致病性禽流感和口蹄疫病原學檢測結(jié)果均為陰性，沒有發(fā)現(xiàn)高致病性禽流感和口蹄疫病毒感染。（3）進行高致病性禽流感和口蹄疫被動監(jiān)測：2013～2016年威海市無疫區(qū)接到疑似禽流感疫情舉報3起，結(jié)合臨床癥狀、流行病學調(diào)查以及發(fā)病狀況，采集病原學樣品4份，進行禽流感病原檢測，檢測結(jié)果全部為陰性，排除了禽流感感染。沒有接到疑似口蹄疫疫情舉報。（4）對野生動物進行高致病性禽流感監(jiān)測和流行病學調(diào)查：威海市無疫區(qū)野生動物主要為大天鵝等鳥類，對于野鳥的監(jiān)測主要是針對野鳥集中出沒的地區(qū)及其周邊的家禽進行高致病性禽流感流行病學調(diào)查，在野鳥棲息地調(diào)查有無野鳥非正常死亡，對于死亡的野鳥進行實驗室監(jiān)測，并采集新鮮的野鳥糞便進行監(jiān)測。2013～2016年共采集36個(次)野鳥棲息地的新鮮野鳥糞便680份，進行禽流感病原檢測，檢測結(jié)果均為陰性；對其中的480份樣品進行H5亞型禽流感病原檢測，檢測結(jié)果全部為陰性。（5）對外引動物進行高致病性禽流感和口蹄疫檢測：威海市無規(guī)定疫病區(qū)引入的動物主要為種禽，種豬、奶牛、羊等引入產(chǎn)地主要有北京、吉林、安徽、河北四川等省份。引入的動物采用RT-PCR方法(或熒光RT-PCR方法)檢測禽流感病原。采用口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP)抗體ELISA方法檢測口蹄疫感染抗體，檢測結(jié)果若為陽性進行隔離，隔離期間采集病原學樣品采用RT-PCR(熒光RT-PCR)方法進行病原檢測。2013～2016年無疫區(qū)從非無疫區(qū)引入種雞、種鴨共24批679000只，采集樣品500份，進行了禽流感病原檢測，檢測結(jié)果均為陰性。引入種豬、奶牛6批2149頭，采集樣品186份，采用口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP)抗體ELISA方法進行檢測，檢測結(jié)果均為陰性。

2.3 承擔了威海市H7N9剔除計劃、小反芻獸疫消滅計劃、畜間布魯氏菌病監(jiān)測和流行病學調(diào)查等任務 （1）持續(xù)實施威海市H7N9剔除計劃。 技術(shù)路線和防控措施：限制家禽由高風險區(qū)向低風險區(qū)調(diào)運。圍繞活禽交易市場、養(yǎng)禽場和野生禽鳥棲息地等重點區(qū)域，開展基于風險的監(jiān)測和流行病學調(diào)查，發(fā)現(xiàn)并清除家禽 H7N9 流感病毒。血清學監(jiān)測：威海市所有種禽場(父母代種禽場)全部進行血清學監(jiān)測。商品代家禽養(yǎng)殖場、活禽批發(fā)市場、農(nóng)貿(mào)市場(活禽交易攤位/檔口)按照證明無疫方式隨機抽樣，采用血凝抑制試驗(HI)。病原學監(jiān)測：活禽批發(fā)市場、農(nóng)貿(mào)市場按證明無疫方式隨機抽樣，血清學監(jiān)測陽性的，采集同群活禽的咽喉/泄殖腔棉拭子樣品進行病原學監(jiān)測。榮成天鵝湖為1個風險監(jiān)測點，每年候鳥遷徙至此地后抽檢野鳥糞和野鳥棲息地周邊養(yǎng)殖場隨機抽樣。采用農(nóng)業(yè)部推薦的或者國家禽流感參考實驗室的 RT-PCR或者熒光RT-PCR檢測方法。2014～2016年，威海市沒有接到H7N9流感疫情舉報，共緊急監(jiān)測H7N9流感3次，市動物疫病預防控制中心獸醫(yī)實驗共抽檢父母代種禽場75個、禽場(戶)132個，血清學檢測禽血清樣品5130份，病原學檢測家禽咽喉棉拭子1110份、榮成天鵝湖大天鵝糞便120份、大天鵝咽喉棉拭子15份，H7亞型流感抗體和病原學檢測結(jié)果均為陰性結(jié)果均為陰性；四區(qū)市動物疫病預防控制中心獸醫(yī)實驗室共監(jiān)測活禽交易攤位和商品養(yǎng)禽場54個，血清學檢測血清學樣品3600份，病原學檢測家禽咽喉棉拭子樣品1540份，H7亞型流感抗體和病原學檢測結(jié)果均為陰性主動監(jiān)測沒有發(fā)現(xiàn)家禽H7N9流感。（2）全面推進小反芻獸疫消滅計劃，切實做好小反芻獸疫監(jiān)測與流行病學調(diào)查工作。技術(shù)路線：威海市實施小反芻獸疫強制免疫，羊群以病原學監(jiān)測為主，對病原學陽性羊及同群羊進行撲殺和無害化處理，并做好追溯排查等防控工作。免疫效果評估抗體檢測采用競爭ELISA、阻斷ELISA方法。病原檢測學檢測采集拭子或者組織樣品，采用RT-PCR或者熒光RT-PCR方法進行檢測。2014～2016年，威海市沒有接到小反芻獸疫疫情舉報，已完成小反芻獸疫緊急流行病學調(diào)查2次，專項流行病學調(diào)查3次，完成了小反芻獸疫總體狀況評估。共抽檢羊場112個，血清學樣品3110個，小反芻獸疫免疫抗體水平合格率常年保持在97%以上，病原學檢測結(jié)果均為陰性。（3）畜間布魯氏菌病監(jiān)測和流行病學調(diào)查：牲畜布魯氏菌病防控技術(shù)路線：加強飼養(yǎng)管理，提高抗病能力—檢測凈化，淘汰陽性畜—強化檢疫監(jiān)督—強化監(jiān)測預警—嚴格無害化處理，防止疫病傳播擴散。威海市無疫區(qū)內(nèi)禁止牲畜布魯氏菌病免疫，動物疫病監(jiān)測機構(gòu)嚴格按照《山東省牲畜布魯氏菌病防控技術(shù)指南》和《布魯氏菌病防治規(guī)范》要求，對所有奶牛、奶山羊、種牛羊每年進行兩次布魯氏菌病檢測凈化，對所有出欄牛羊和引入牛羊?qū)嵤┎剪斒暇z疫檢測，根據(jù)人間畜間布病流行病學調(diào)查結(jié)果對可疑動物單元進行監(jiān)測，追溯和追蹤患病動物并無害化處理，消滅傳染源。2014年以來檢測出布病陽性牛12頭、陽性羊456只，并進行了撲殺和無害化處理。目前本市牲畜布魯氏菌病處于控制狀態(tài)。

2.4 對全市強制免疫重大動物疫病免疫效果進行評價監(jiān)測 每年在春秋兩季重大動物疫病集中免疫過后一個月，全市分別采集規(guī)模場、散養(yǎng)戶的畜禽樣品進行口蹄疫、高致病性禽流感、小反芻獸疫、豬瘟、新城疫等重大動物疫病免疫抗體水平檢測。特別對自購強免疫苗養(yǎng)殖場的疫苗免疫效果進行全面檢測，對免疫抗體合格率沒有達到農(nóng)業(yè)部規(guī)定70%標準的場戶，進行補免和再檢測。自2014年以來，全市對120多個抗體水平不合格場點進行了補免和再檢測。

2.5 對威海市所有種畜禽場主要動物疫病進行監(jiān)督監(jiān)測2014～2016年持續(xù)3年開展全市種畜禽場主要動物疫病監(jiān)督監(jiān)測工作，5個獸醫(yī)實驗室對轄區(qū)內(nèi)35個種畜禽場每年至少完成一次主要疫病和垂直傳播疫病監(jiān)測，檢測范病種及范圍包括強制免疫病種免疫抗體檢測，種豬場(豬人工授精站)豬瘟、高致病性豬藍耳病、口蹄疫、豬偽狂犬病原學檢測，種牛場口蹄疫感染抗體、布魯氏菌病血清學、牛結(jié)核病病原學檢測，種羊場口蹄疫病原感染抗體、布魯氏菌病血清學檢測，種禽場禽流感(H5、H7、H9亞型)、新城疫、禽白血病病原學和雞白痢血清學檢測。從源頭上保證了無疫區(qū)內(nèi)種質(zhì)資源的生物安全。

2.6 開展規(guī)?；B(yǎng)殖場主要動物疫病凈化示范場、創(chuàng)建場 規(guī)模場主要動物疫病凈化技術(shù)路線：針對不同疫病本底調(diào)查情況，一場一冊制定相應凈化方案。采取嚴格的生物安全措施、免疫預防措施、病原學檢測、免疫抗體監(jiān)測、野毒感染與疫苗免疫鑒別診斷監(jiān)測，淘汰帶毒動物，分群飼養(yǎng)，建立健康動物群。對假定陰性群加強綜合防控措施，逐步擴大凈化效果，最終建立凈化場。同時加強人流、物流管控和實行全進全出生產(chǎn)模式，降低疫病水平與傳播風險；強化本場留種和引種的檢測，避免外來病原傳入風險；建立完善的防疫和生產(chǎn)管理等制度，優(yōu)化生產(chǎn)結(jié)構(gòu)和建筑設(shè)計布局，構(gòu)建持續(xù)有效的生物安全防護體系。2014年起威海市動物疫病檢測機構(gòu)組織啟動了規(guī)?；B(yǎng)殖場“動物疫病凈化創(chuàng)建場”和“動物疫病凈化示范場”創(chuàng)建活動，分別在全市22個大型規(guī)模雞、豬、牛、羊場分別開展禽白血病、雞白痢、豬偽狂犬病、布魯氏菌病凈化示范，2016年益生畜禽股份有限公司祖代蛋雞六場達到禽白血病凈化標準，獲中國動物疫病預防控制中心認證禽白血病凈化示范場。

2.7 定期發(fā)布動物疫情預警信息 威海市動物疫病預防控制中心聯(lián)合各區(qū)市動物疫病監(jiān)測機構(gòu)成立了動物疫情風險評估小組，每季度開展一次動物疫情風險評估，統(tǒng)計分析蛋雞、肉雞、豬、羊、水貂主要疫病，及時把握疫情動態(tài)并發(fā)布預警信息。自2014年以來，全市通過監(jiān)測和流行病學調(diào)查等措施排除重大動物疫情17起，最大限度的降低了養(yǎng)殖場的損失。

S851.33

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1007-1733(2017)03-0045-03

2016-11-21）