山東省蜜蜂白堊病防控技術(shù)建議規(guī)程

馬蘭婷 王穎 趙光棟 胥保華 郭興啟*（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東泰安 271018 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)技術(shù)處 山東泰安 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 山東泰安）

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山東省蜜蜂白堊病防控技術(shù)建議規(guī)程

馬蘭婷①王穎②趙光棟③胥保華①郭興啟③*（①山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東泰安 271018 ②山東農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)技術(shù)處 山東泰安 ③山東農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 山東泰安）

蜜蜂白堊病(Bee Chalkbrood Disease)，又稱(chēng)石灰子病，是由蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)引起的一種頑固性真菌傳染病，是目前危害我國(guó)養(yǎng)蜂業(yè)發(fā)展的最重要的蜜蜂疾病之一。自2016年以來(lái)，山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蜂產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)對(duì)全省17地市127家蜂場(chǎng)的蜜蜂病害發(fā)生情況進(jìn)行了詳細(xì)調(diào)查。調(diào)查結(jié)果表明，蜜蜂白堊病嚴(yán)重制約山東省蜜蜂產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，大部分蜂場(chǎng)均面臨白堊病的威脅，特別是日照、泰安、濟(jì)南等地區(qū)，白堊病的發(fā)病率均在60%以上，給當(dāng)?shù)胤洚a(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重的損失。盡管白堊病對(duì)養(yǎng)蜂業(yè)危害嚴(yán)重，但至今未有規(guī)范的防控技術(shù)規(guī)程。根據(jù)白堊病的發(fā)生規(guī)律及防治實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，我們制定了蜜蜂白堊病綜合防控技術(shù)建議規(guī)程(以下簡(jiǎn)稱(chēng)規(guī)程)，旨在為今后逐步實(shí)現(xiàn)蜜蜂白堊病預(yù)防、控制和治療技術(shù)的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化提供技術(shù)參考。

1 蜜蜂白堊病及其發(fā)病規(guī)律

蜜蜂白堊病是由蜜蜂球囊菌屬中的微生物所致的一類(lèi)蜜蜂傳染性疾病。白堊病多發(fā)于西方蜜蜂工蜂和雄蜂幼蟲(chóng)，又以4~5日齡工蜂幼蟲(chóng)及3~4日齡雄蜂幼蟲(chóng)最易感染此病。

1.1 傳播途徑 蜜蜂白堊病主要通過(guò)蜜蜂球囊菌的孢子侵染幼蟲(chóng)，食物傳播(例如幼蟲(chóng)吞食感染蜜蜂球囊菌孢子的花粉)、水源傳播、空氣傳播和接觸傳播(例如蜂農(nóng)飼養(yǎng)管理中隨意調(diào)換蜂脾、使用蜂具等)和媒介動(dòng)物傳播(例如經(jīng)攜帶病原菌的盜蜂、迷巢工蜂、蜂螨或老鼠等媒介動(dòng)物傳播等)是其主要傳播途徑。

1.2 流行特點(diǎn) 蜜蜂白堊病的發(fā)生與氣候環(huán)境條件有密切的關(guān)系，且具有明顯的季節(jié)性，多發(fā)生在春末夏初，氣候多雨潮濕、氣溫不穩(wěn)時(shí)。另外，養(yǎng)蜂蜂場(chǎng)地勢(shì)低洼、潮濕、陽(yáng)光不足，蜂箱內(nèi)部通風(fēng)不良、高溫高濕，或恰遇連陰雨天或巢內(nèi)本身濕度過(guò)大時(shí)，白堊病病情加重。一般而言，山東地區(qū)蜜蜂白堊病一般從早春2月底、3月上旬開(kāi)始零星出現(xiàn)，4~5月病勢(shì)較重，槐花、荊條流蜜期內(nèi)病勢(shì)漸輕，8月初開(kāi)始再度復(fù)發(fā)。

2 診斷方法

2.1 癥狀診斷 患白堊病的幼蟲(chóng)一般在封蓋后前兩天或預(yù)蛹期內(nèi)死亡。蟲(chóng)體腫脹、長(zhǎng)滿(mǎn)白毛；箱底、巢門(mén)前可見(jiàn)有呈塊狀、體表變灰白色或黑綠色樣的蟲(chóng)尸?；疾》淙簝?nèi)出現(xiàn)插花子脾，蜂齡比例失調(diào)，群勢(shì)發(fā)展緩慢。

2.2 顯微鏡診斷 從蜂群中挑取疑患白堊病死亡蜜蜂幼蟲(chóng)尸體，粉碎(或勻漿)后取少許于載玻片上，加1滴無(wú)菌水、1滴乳酸棉藍(lán)液，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀(guān)察(一般放大400倍)，若發(fā)現(xiàn)有具橫膈膜、白色分枝狀菌絲，末端膨大呈圓球形黑色子實(shí)體，或孢子球內(nèi)多個(gè)橢圓形孢子者，可確診。

2.3 分子生物學(xué)診斷 提取疑似病蜂的DNA，利用特異性引物ASCU: GCTAGGTGCCCCTAAACAAGGC和ASCD：ACTAGAGCGAAAGACAAAGCC，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系為：10×EasyTaq Buffer，2.5μl；dNTP mixture (10mM)，1μl；引物ASCU(10μM)，1μl；引物ASCD(10μM)，1μl；DNA樣品，1μl；Ex Taq DNA聚合酶，0.25μl；ddH2O，18.25μl。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃ 10min，包括40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括：94℃ 40s，55℃40s，72℃ 40s，最后72℃ 10min。PCR反應(yīng)產(chǎn)物利用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行檢測(cè)。在陰性對(duì)照不出現(xiàn)條帶的情況下，如某一被檢樣品擴(kuò)增產(chǎn)物的DNA條帶與陽(yáng)性對(duì)照大小一致，則該被檢樣品判定為陽(yáng)性。

3 防治原則

3.1 預(yù)防為主，綜合防治 白堊病的防治應(yīng)采取“預(yù)防為主，綜合防治”的原則，根據(jù)白堊病的發(fā)生規(guī)律，以加強(qiáng)蜂群飼養(yǎng)管理為主，輔以物理防治和合理地使用藥物治療等相結(jié)合的綜合防控措施，有效預(yù)防和控制白堊病的危害。

3.2 選擇適宜時(shí)期進(jìn)行防治 應(yīng)根據(jù)蜜蜂白堊病流行特點(diǎn)，從春繁伊始做好白堊病預(yù)防工作，包括制定并嚴(yán)格執(zhí)行蜂場(chǎng)白堊病防疫制度，提前做好蜜蜂飼料、蜂脾及蜂機(jī)具消毒滅菌、蜂群保溫等工作，發(fā)現(xiàn)蜂群開(kāi)始零星發(fā)生白堊病時(shí)，及時(shí)采取有效措施進(jìn)行積極預(yù)防和治療。

3.3 安全合理用藥 使用藥物治療時(shí)，應(yīng)選用對(duì)蜜蜂安全、低毒、低殘留藥物，優(yōu)先選用中草藥防治白堊病，并嚴(yán)格執(zhí)行停藥期規(guī)定。

4 預(yù)防措施

4.1 嚴(yán)格檢疫 飼養(yǎng)無(wú)白堊病病原的健康蜂群，做到不從患白堊病蜂場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)蜂群或種蜂王，不到白堊病嚴(yán)重發(fā)生區(qū)放蜂，不使用來(lái)歷不明和受白堊病病原菌污染的蜂花粉、人工代用花粉或糖蜜等蜜蜂飼料。

4.2 加強(qiáng)蜂群飼養(yǎng)管理 （1）蜂場(chǎng)選址：選擇背風(fēng)向陽(yáng)、地勢(shì)干燥、空氣流動(dòng)的地方放蜂；蜂箱墊高(離地10 cm以上)；保持蜂場(chǎng)場(chǎng)地衛(wèi)生，及時(shí)清理蜂場(chǎng)內(nèi)的雜草、落葉等雜物。為蜂群創(chuàng)造清爽適宜的小氣候條件。（2）飼養(yǎng)強(qiáng)群：調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，凡是蜂群內(nèi)飼料不足、群勢(shì)偏弱的蜂群，在白堊病流行季節(jié)易感染該病。因此，在飼養(yǎng)管理過(guò)程中應(yīng)保持強(qiáng)群飼養(yǎng)，根據(jù)蜂群具體情況，靈活采取弱群并入強(qiáng)群、無(wú)王群并入有王群，或保留優(yōu)良、健壯、繁殖力強(qiáng)的蜂王，淘汰老、劣、傷、殘或受精不良蜂王等措施，適時(shí)合理合并蜂群。同時(shí)，供應(yīng)蜂群優(yōu)質(zhì)充足的飼料，保證蜂群在恢復(fù)期和減弱期內(nèi)蜂多于脾、在發(fā)展期和分蜂期內(nèi)蜂脾相稱(chēng)或蜂多于脾，以增強(qiáng)蜂群自身調(diào)節(jié)巢內(nèi)溫濕小氣候、清理巢房的能力，有效提高蜂群對(duì)白堊病的抵抗力。（3）選用抗病品種：引進(jìn)抗白堊病的種王，或從本場(chǎng)選用抗白堊病強(qiáng)的蜂群培育蜂王和雄蜂后進(jìn)行換王，逐漸增強(qiáng)蜂群對(duì)白堊病的抵抗能力。（4）做好蜂群保溫、遮雨工作：蜂群恢復(fù)期內(nèi)要做好蜂群保溫工作，在蜂箱外部、箱內(nèi)空隙處及副蓋上加保溫物，提高蜂箱保溫能力。保證蜂箱箱體(特別是箱蓋)結(jié)構(gòu)完整，及時(shí)填補(bǔ)好蜂箱縫隙，以防止在雨天漏雨造成箱內(nèi)潮濕、蜂箱腐爛。

5 治療方案

5.1 病群管理 蜂群發(fā)生白堊病后，立即囚王，做到不加脾或少加脾，促使工蜂清理蜂房中病蟲(chóng)；待子出完后將群內(nèi)的脾全部抽出換上無(wú)病群的子脾和蜜脾，并及時(shí)用抗病蜂王替換發(fā)生患病蜂群蜂王。

5.2 消毒 （1）蜂場(chǎng)消毒：定期用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的漂白粉溶液或生石灰潑灑蜂場(chǎng)及周邊，以殺滅蜂場(chǎng)及周邊的病原孢子。（2）蜂機(jī)具消毒：對(duì)蜂掃、起刮刀、蜂箱等蜂機(jī)具進(jìn)行定期消毒，對(duì)從輕度患病蜂群換下的蜂箱、蜂脾用2份甲醛兌入1份高錳酸鉀密閉熏蒸，或用5%的高錳酸鉀溶液浸泡24h，嚴(yán)格消毒后再使用。（3）飼料消毒：必須使用混有白堊病病原菌或來(lái)源不明的蜂花粉、代用花粉等飼料時(shí)，必須進(jìn)行嚴(yán)格消毒或輻照處理(輻照劑量不低于7.0Kgy)后使用。

5.3 幼蟲(chóng)尸體及重病群蜂脾的處理 蜂箱內(nèi)外患白堊病死亡的幼蟲(chóng)尸體，以及重病群撤換下的蜂脾不得隨意丟棄，應(yīng)當(dāng)將其運(yùn)送至無(wú)害化處理公共設(shè)施進(jìn)行無(wú)害化處理，沒(méi)有無(wú)害化處理公共設(shè)施處理?xiàng)l件的蜂場(chǎng)應(yīng)在遠(yuǎn)離蜂場(chǎng)處進(jìn)行深埋處理，深埋前必須進(jìn)行消毒、焚燒等措施。

5.4 藥物治療 （1）可根據(jù)實(shí)際情況，選用以下方法：①制霉菌素，按照GB/T 19168執(zhí)行；②金銀花、紅花、黃連、大青葉、苦參各15g，大黃、甘草各10g，煎成藥汁500ml，加入500ml的1:1糖漿中，混勻，每群每天喂100ml，連續(xù)喂 3~5d。（2）用制霉素10萬(wàn)IU對(duì)蜂群噴霧或飼喂。隔日治療1次，連續(xù)5~7次為一療程。

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S898.1+37

C

1007-1733(2017)11-0065-02

（2017–07–10）

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蜂產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（SDAIT-24-04）項(xiàng)目資助。

*通訊作者