幾種殺菌劑對(duì)秀珍菇及鏈孢霉抑菌效果分析

張柳蓮 王慶福 黃清鏵 張偉偉 陳盈盈 梁磊*

（1 廣東省生物工程研究所（廣州甘蔗糖業(yè)研究所），廣東廣州510316；2 廣東省甘蔗改良與生物煉制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510316；3 廣東省植物纖維綜合利用工程技術(shù)研究開(kāi)發(fā)中心，廣東廣州510316；4 廣州市植物纖維綜合利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510316；5 廣東省生物質(zhì)高值化利用工程實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510316）

秀珍菇（Pleurotus geesteranus Singer）是平菇[1]家族的主要成員，因其營(yíng)養(yǎng)豐富、口感脆嫩，菇味清香濃郁，深受消費(fèi)者喜愛(ài)[2]。在秀珍菇栽培過(guò)程中的主要污染雜菌是鏈孢霉、綠色木霉、黑曲霉及細(xì)菌，其中危害最大的是鏈孢霉（Neurospora）。鏈孢霉主要種類有橙色鏈孢霉、粗糙鏈孢霉、好食鏈孢霉、問(wèn)型鏈孢霉等，呈絨毛狀，白色或灰色，匍匐生長(zhǎng)，分枝。分生孢子梗直接從菌絲上長(zhǎng)出，與菌絲無(wú)明顯差異，梗頂端形成分生孢子[3，4]。鏈孢霉含有大量分生孢子，傳染能力極強(qiáng)。鏈孢霉在自然界分布廣泛，其菌絲生長(zhǎng)速度與毛霉極為相似，適宜條件下僅2～3 d 即可布滿培養(yǎng)料表面，與食用菌的菌絲爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)、水分和空間，是目前影響食用菌企業(yè)生產(chǎn)最嚴(yán)重的病害之一，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)斐山^收，導(dǎo)致企業(yè)嚴(yán)重虧損[5]，因而選取高效殺菌劑十分急迫。試驗(yàn)考察多菌靈、甲基托布津、來(lái)蘇爾消毒液、二氯異氰尿酸納等四種食用菌生產(chǎn)常用殺菌劑[6～9]對(duì)秀珍菇、鏈孢霉的菌絲生長(zhǎng)及孢子萌發(fā)抑制情況，以期為秀珍菇生產(chǎn)和鏈孢霉防治提供了參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料①供試菌株:秀珍菇GX01，保藏于廣東省生物工程研究所（廣州甘蔗糖業(yè)研究所）；鏈孢霉菌株為N.Cr01，從秀珍菇污染菌袋中分離。

②供試藥劑:多菌靈（50%可濕性粉劑，四川農(nóng)化股份有限公司）、甲基托布津（70%可濕性粉劑，江蘇龍燈化學(xué)有限公司）、來(lái)蘇爾消毒液德州安捷高科消毒制品有限公司）、二氯異氰尿酸鈉（50%，山西康派偉業(yè)生物科技有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藥劑濃度梯度設(shè)置 25%多菌靈（質(zhì)量/體積）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

70%甲基托布津（質(zhì)量/體積）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

來(lái)蘇爾消毒液（體積比）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

二氯異氰尿酸納（質(zhì)量/體積）:1∶200，1∶400，1∶600，1∶800，1∶1000，1∶1500；

1.2.2 培養(yǎng)板的準(zhǔn)備 采用平板實(shí)驗(yàn)法[3]，按濃度梯度依次加入殺菌劑，以不加藥組為空白對(duì)照。

1.2.3 秀珍菇菌絲生長(zhǎng)試驗(yàn) 在無(wú)添加殺菌劑的PDA培養(yǎng)上將秀珍菇母種活化，置于25°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌絲將要長(zhǎng)滿平板時(shí)使用。接種時(shí)取直徑6 mm的菌塊至實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)皿中間，每處理重復(fù)3次，置25℃下培養(yǎng)，同時(shí)接種無(wú)添加殺菌劑的PDA平板作為對(duì)照。

每隔24 h觀察1次，觀察菌絲的生長(zhǎng)趨勢(shì)，至其中一種處理菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿后測(cè)量所有處理的菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)度。按照公式計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速率/（mm·d-1）、不同濃度的4種殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率。菌絲生長(zhǎng)速率/（mm·d-1）=（菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)度-接種的菌片半徑）/培養(yǎng)天數(shù)。抑制率/%=[（對(duì)照菌絲生長(zhǎng)速率-殺菌劑處理菌絲生長(zhǎng)速率）/對(duì)照菌絲生長(zhǎng)速率]×100。

1.2.4 鏈孢霉菌絲生長(zhǎng)試驗(yàn) 鏈孢霉孢子萌發(fā)，采用涂布平板法。將從秀珍菇污染菌袋中分離出來(lái)鏈孢霉菌株，在PDA 培養(yǎng)基試管中培養(yǎng)3 d，再將培養(yǎng)好的鏈孢霉用無(wú)菌水洗出，稀釋到在10×10倍顯微鏡下每個(gè)視野中含有30～50個(gè)分生孢子。在1.2.2培養(yǎng)板上均勻涂布0.1 mL 的鏈孢霉孢子懸浮液，每處理重復(fù)3次。涂布后的玻片平板反置，于25℃下恒溫培養(yǎng)，18 h后檢查萌發(fā)情況，計(jì)算孢子萌發(fā)數(shù)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試藥劑對(duì)秀珍菇菌絲生長(zhǎng)的影響從表1可以看出甲基托布津、來(lái)蘇爾消毒液對(duì)秀珍菇菌絲的生長(zhǎng)影響不大，高濃度的多菌靈對(duì)秀珍菇有一定的抑制作用，而1000 倍以上就基本上沒(méi)有抑制作用；秀珍菇菌絲在添加甲基托布津、多菌靈、來(lái)蘇爾消毒液這三種殺菌劑的培養(yǎng)基中，菌絲厚實(shí)潔白，生長(zhǎng)勢(shì)與無(wú)添加的對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差別。但二氯異氰尿酸納對(duì)秀珍菇菌絲的生長(zhǎng)有極強(qiáng)的抑制作用，秀珍菇菌絲無(wú)法正常生長(zhǎng)。

表1 供試四種殺菌劑對(duì)秀珍菇生長(zhǎng)影響

2.2 鏈孢霉菌絲平板抑菌試驗(yàn)結(jié)果從表2 可以看出甲基托布津、來(lái)蘇爾消毒液對(duì)秀珍菇致病鏈孢霉菌絲的生長(zhǎng)抑制能力較弱，只有高濃度（200 倍）具有較明顯的抑制；但是多菌靈和二氯異氰尿酸納在供試濃度范圍內(nèi)均對(duì)鏈孢霉菌絲生長(zhǎng)表現(xiàn)完全抑制作用。

表2 供試四種殺菌劑對(duì)鏈孢霉菌絲生長(zhǎng)影響

2.3 供試殺菌劑對(duì)鏈孢霉孢子萌發(fā)的影響從表3的數(shù)據(jù)可以看出:四種殺菌劑中甲基托布津和來(lái)蘇爾消毒液對(duì)鏈孢霉的孢子萌發(fā)的抑制作用比較弱，只有在高濃度（200倍）下，才能完全抑制孢子的萌發(fā)；而添加多菌靈和二氯異氰尿酸鈉組在供試濃度下鏈孢霉的孢子均不能萌發(fā)，達(dá)到完全抑制的效果。

表3 供試四種殺菌劑對(duì)鏈孢霉孢子萌發(fā)的影響

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，四種殺菌劑在相同的條件下，對(duì)秀珍菇菌絲和致病鏈孢霉、鏈孢霉孢子分別有不同的影響，多菌靈對(duì)鏈孢霉具有很強(qiáng)的抑制性，可以完全抑制鏈孢霉菌絲的生長(zhǎng)和鏈孢霉孢子的萌發(fā)；同時(shí)對(duì)秀珍菇菌絲的抑制能力較弱，秀珍菇菌絲在添加多菌靈的培養(yǎng)基中，菌絲的生長(zhǎng)厚實(shí)致密；甲基托布津和來(lái)蘇爾消毒液均對(duì)秀珍菇菌絲的生長(zhǎng)基本沒(méi)有影響，但兩種殺菌劑對(duì)鏈孢霉的抑制能力也較弱，只有在高濃度才具有較明顯抑制，在秀珍菇防治鏈孢霉污染的應(yīng)用受到限制；二氯異氰尿酸納對(duì)秀珍菇、鏈孢霉和鏈孢霉孢子均有很強(qiáng)的抑制性。由此可見(jiàn)多菌靈是適合秀珍菇防霉抗病的高效殺菌劑。