犬發(fā)情期血清孕酮水平與最佳配種時(shí)間的測(cè)定

林嘉寶 ， 陳宋杰 ， 黃 薇 ， 陳艷云 ， 鐘友剛

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院 ，北京海淀100029)

犬發(fā)情期血清孕酮水平與最佳配種時(shí)間的測(cè)定

林嘉寶 ， 陳宋杰 ， 黃 薇 ， 陳艷云 ， 鐘友剛

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院 ，北京海淀100029)

通過(guò)對(duì)中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)教學(xué)動(dòng)物醫(yī)院臨床發(fā)情母犬血清孕酮檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)發(fā)情期母犬血清孕酮水平，并探索藏獒和德國(guó)牧羊犬最佳配種時(shí)機(jī)，為優(yōu)秀犬種的繁育工作提供實(shí)踐指導(dǎo)。結(jié)果表明，藏獒血清孕酮值在20～30 ng/mL時(shí)，受孕率可達(dá)到80%以上；德國(guó)牧羊犬血清孕酮值在10～20 ng/mL范圍內(nèi)時(shí)，受孕率最高。藏獒發(fā)情后第10～15天，大部分犬血清孕酮值能達(dá)到20 ng/mL以上，在此期間為最佳的配種時(shí)機(jī)。德國(guó)牧羊犬發(fā)情第9～14天，血清孕酮值基本在10 ng/mL以上，此時(shí)為最佳的配種時(shí)機(jī)。

孕酮 ； 母犬 ； 發(fā)情 ； 配種時(shí)機(jī)

犬的發(fā)情是指犬達(dá)到性成熟后，在下丘腦-垂體-性腺軸控制分泌的激素作用下，表現(xiàn)出的一系列生理和行為的周期性變化。犬為季節(jié)性單次或雙次發(fā)情動(dòng)物，一般在每年春季和秋季發(fā)情。但由于犬的生殖生理有別于其他家畜，不同品種犬的排卵時(shí)間變化范圍較大；另外，犬排卵后排出的是未成熟的卵子，需要在體內(nèi)發(fā)育一段時(shí)間后才具備受精能力。犬生殖周期的這種特殊性使得犬種繁育工作具有非常大的挑戰(zhàn)性。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇2014年10月至2015年5月到中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)教學(xué)動(dòng)物醫(yī)院監(jiān)測(cè)孕酮的發(fā)情母犬共222例；VIDAS Progesterone孕酮檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)熒光法)，購(gòu)自梅里埃診斷產(chǎn)品(上海)有限公司；Eppendorf移液器；miniVIDAS激素檢測(cè)儀。

1.2 發(fā)情狀態(tài) 所有受試犬均為動(dòng)物主人觀察到該犬出現(xiàn)陰門(mén)腫脹，并出現(xiàn)血性分泌物的時(shí)間作為發(fā)情期開(kāi)始的標(biāo)志。

1.3 血清孕酮的測(cè)定 后肢隱靜脈采集1.5 mL血液，3 500 r/min離心5 min分離出血清備用。

2 結(jié)果

2.1 年齡分布 調(diào)查期間檢測(cè)孕酮的犬年齡分布如表1所示，表中可見(jiàn)，有34.5%來(lái)醫(yī)院進(jìn)行血清孕酮檢測(cè)的犬年齡在1歲以下，此時(shí)一般為初次發(fā)情，在這其中尤以德國(guó)牧羊犬居多，占該犬種的一半以上(52.9%)；大部分檢測(cè)孕酮的犬是在1～5歲之間，占總數(shù)的55.9%；另外有小部分(9.5%)的犬年齡在5歲以上。

2.2 品種分布 調(diào)查結(jié)果表明，在調(diào)查期間，來(lái)院檢測(cè)孕酮的犬大部分為大型犬，其中藏獒占70.5%；約23.2%為德國(guó)牧羊犬；其他犬種包括比特犬、杜賓犬、金毛尋回犬、格力犬、拉布拉多犬、貴賓/泰迪犬、京巴犬等中小型犬種(表2)。

表1 犬發(fā)情期孕酮檢測(cè)年齡分布

注：樣本總量N=220；各品種百分比%=該品種年齡段犬?dāng)?shù)/該品種樣本量×100%；總計(jì)百分比%=該年齡段各犬種總數(shù)/樣本總量×100%

表2 犬發(fā)情期孕酮檢測(cè)品種分布

注：樣本總數(shù)N=220；百分比%=該犬種數(shù)量/樣本總數(shù)×100%

2.3 血清孕酮水平 本次試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)期間，對(duì)動(dòng)物醫(yī)院臨床共220只犬進(jìn)行有效統(tǒng)計(jì)(表3)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，繁殖場(chǎng)藏獒普遍采用人工授精方法進(jìn)行繁殖，當(dāng)藏獒(N=155)孕酮值在10～30 ng/mL之間時(shí)，配種成功率大于70%，與其他范圍組相比存在顯著差異；其中，當(dāng)藏獒血清孕酮值達(dá)到20～30 ng/mL范圍內(nèi)時(shí)，配種成功率大于80%。

表3 藏獒、德國(guó)牧羊犬血清孕酮水平與配種成功率

注：藏獒樣本總量N=155，配種成功率%=該組孕酮值范圍懷孕犬只數(shù)/該組孕酮值范圍犬只總數(shù)×100%；德國(guó)牧羊犬樣本總量N=51，配種成功率%=該組孕酮值范圍懷孕犬只數(shù)/樣本總量×100%

德國(guó)牧羊犬繁殖場(chǎng)則采用人工授精與自然交配相結(jié)合的繁育方式。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，當(dāng)?shù)聡?guó)牧羊犬(N=51)孕酮值范圍在10～20 ng/mL之間時(shí)，與其他組相比，該組總體配種成功率最高，各組之間存在顯著差異。

2.4 最佳配種時(shí)機(jī) 繁殖場(chǎng)養(yǎng)殖者通常將犬陰門(mén)出現(xiàn)血性分泌物的第1天視為發(fā)情期的開(kāi)始，從統(tǒng)計(jì)的藏獒發(fā)情天數(shù)與孕酮值之間關(guān)系看，一般在發(fā)情開(kāi)始后10～15d左右，藏獒血清孕酮值能達(dá)到上述適宜配種范圍內(nèi)。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)如圖1所示，兩條虛線(xiàn)之間數(shù)據(jù)點(diǎn)為藏獒最佳受孕血清孕酮值范圍。

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，德國(guó)牧羊犬在出現(xiàn)血性分泌物后的9～14 d左右，血清孕酮水平能上升到10 ng/mL以上，達(dá)到最適配種范圍內(nèi)。如圖2所示，兩條虛線(xiàn)之間為受孕率最高的孕酮值范圍。

3 討論

母犬發(fā)情，是犬達(dá)到性成熟后，在下丘腦-垂體-性腺軸控制下，由于激素分泌所引起的犬的一系列生理及行為的周期性變化。犬的發(fā)情期可人為劃分成發(fā)情前期，發(fā)情期，發(fā)情后期和乏情期四個(gè)階段。一般情況下，根據(jù)犬種差異，發(fā)情前期約 6～11 d，發(fā)情期持續(xù)5～9 d，發(fā)情后期約56～60 d，乏情期可持續(xù)數(shù)月。在發(fā)情間期，母犬血清雌激素維持在一個(gè)較低的基礎(chǔ)水平，隨著卵泡發(fā)育成熟，體內(nèi)雌激素水平逐漸上升至平臺(tái)期，引起母犬一系列生理行為變化；發(fā)情前期最初的幾天內(nèi)，卵泡細(xì)胞開(kāi)始分泌孕酮作為雌激素分泌的前驅(qū)激素；進(jìn)入發(fā)情期的前1～2 d，母犬血清雌激素濃度達(dá)到峰值。卵泡發(fā)育成熟后，雌激素濃度下降，進(jìn)入發(fā)情期。隨著卵泡黃體化，分泌大量孕酮，在接下來(lái)的5～20 d，雌激素將逐漸下降到基礎(chǔ)值[1]。發(fā)情前期犬血清中逐漸增加的孕酮濃度和不斷下降的雌激素水平導(dǎo)致母犬的行為從拒絕交配變?yōu)槌霈F(xiàn)主動(dòng)求偶行為。另外，激素水平的變化對(duì)下丘腦和垂體有強(qiáng)烈的正反饋?zhàn)饔茫勾俾雅萆伤谾SH和促黃體生成素LH開(kāi)始分泌。

孕酮是由黃體分泌的一種甾體激素，哺乳動(dòng)物雌性的各種生殖活動(dòng)，如排卵、維持妊娠、啟動(dòng)分娩、乳腺發(fā)育等各方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[2]。在發(fā)情前期結(jié)束前的48～72 h，犬血清孕酮濃度較低，基礎(chǔ)值在0.5 ng/mL以下[3]。在發(fā)情前期末和發(fā)情期初，伴隨著雌激素濃度的下降，母犬血清中孕酮濃度會(huì)逐漸上升至1.0 ng/mL以上。從另一方面來(lái)說(shuō)，卵泡細(xì)胞合成和分泌孕酮的功能早于黃體的發(fā)育。這些細(xì)胞分泌的孕酮是發(fā)情前期末血清孕酮濃度增加以及母犬出現(xiàn)特殊的生理和行為變化的原因。隨著卵泡排卵和黃體化程度不斷增加，血清孕酮濃度逐漸上升[4]。Concannon等研究認(rèn)為，黃體形成后，LH分泌峰值出現(xiàn)在排卵前24～48 h[5]，在排卵后達(dá)到峰值并進(jìn)入平臺(tái)期。周天勝[6]對(duì)犬生殖器官發(fā)育及血清激素水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)比格犬發(fā)育到12月齡時(shí)，血清孕酮濃度達(dá)到峰值。發(fā)情周期中，血清孕酮水平在第9天前總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，并在第9天達(dá)到峰值，之后濃度逐漸下降，與本研究統(tǒng)計(jì)結(jié)果一致。

賀星亮[7]等采用“陰道涂片法”觀察母犬在發(fā)情期不同階段的細(xì)胞形態(tài)變化，并比較陰道上皮角化細(xì)胞率分別為70%～80%、80%～90%和90%～100%時(shí)發(fā)情母犬的接受交配情況、受孕率和產(chǎn)仔數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在陰道上皮細(xì)胞角化程度較低時(shí)，母犬配種成功率、受孕率和產(chǎn)仔數(shù)均降低，當(dāng)角化細(xì)胞率達(dá)到90%～100%時(shí)為最佳配種時(shí)機(jī)。而陰道上皮的細(xì)胞學(xué)變化是由母犬體內(nèi)激素水平變化相關(guān)的。徐永志等摸索自然發(fā)情母犬陰道角質(zhì)化上皮細(xì)胞的變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)大部分自然發(fā)情的母犬在陰道出現(xiàn)血性分泌物后第9～13天，角質(zhì)化上皮細(xì)胞比例超過(guò)80%，陰道黏膜出現(xiàn)明顯浮冰樣堆積。本試驗(yàn)通過(guò)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，藏獒和德國(guó)牧羊犬在發(fā)情第9～15天后，大部分犬血清孕酮濃度上升至適宜配種范圍內(nèi)，部分犬陰道涂片中角化細(xì)胞均達(dá)到80%以上，與馬文芝等[8]研究結(jié)果一致。Hori等[9]研究發(fā)現(xiàn)，比格犬在陰道出現(xiàn)血性分泌物以后11 d左右排卵。本次統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，藏獒發(fā)情10～15 d，血清孕酮值在20～30 ng/mL；德國(guó)牧羊犬發(fā)情9～14 d，血清孕酮值在10～20 ng/mL時(shí)，母犬受孕率最高，達(dá)到70%以上，與Hori等研究結(jié)果一致。需引起注意的是，孕酮值并不是越高越好，犬發(fā)情期間，如果體內(nèi)過(guò)高濃度的血清孕酮水平可能會(huì)導(dǎo)致子宮頸口閉鎖，合并細(xì)菌感染會(huì)導(dǎo)致子宮蓄膿的發(fā)生[10-11]。

母犬發(fā)情的鑒定方法有很多種，包括陰道涂片法、激素測(cè)定法、陰道內(nèi)窺鏡觀察法、唾液結(jié)晶法[12]等，每一種方法均有其優(yōu)缺點(diǎn)。由于犬發(fā)情周期與其他動(dòng)物相比具有其特殊性，卵泡發(fā)育及排卵機(jī)制尚未清楚，要準(zhǔn)確把握犬的配種時(shí)期，應(yīng)結(jié)合多種方法綜合判斷。另外，犬的發(fā)情受到品種、年齡、地理環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)條件、光照時(shí)間等多種因素[13]影響，由于本研究中所有的犬均來(lái)自動(dòng)物醫(yī)院臨床，營(yíng)養(yǎng)狀況、飼養(yǎng)環(huán)境等并不一致，因此孕酮值范圍差別較大，但同一品種的變化趨勢(shì)在大體上是一致的，建議后續(xù)研究中對(duì)影響因素進(jìn)行控制，對(duì)犬種繁育提供更多的理論支持和實(shí)踐指導(dǎo)。

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2015-10-08

中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院臨床基金

林嘉寶(1988-)，女，博士生，從事獸醫(yī)臨床工作，E-mail：15801449288@163.com

鐘友剛，E-mail：zhongyougang@126.com

S858.292

B

0529-6005(2017)02-0070-03