雞脾轉(zhuǎn)移因子對雞腸道抗炎因子和致炎因子分泌的影響

佘德勇 ， 董玉蘭 ， 秦卓明 ， 李 晶 ， 黃迪海 ， 楊昆鵬 ， 徐懷英 ， 陳耀星

(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院， 北京海淀100193； 2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所， 山東濟(jì)南250100；3.山東省健牧生物藥業(yè)有限公司， 山東濟(jì)南250100)

雞脾轉(zhuǎn)移因子對雞腸道抗炎因子和致炎因子分泌的影響

佘德勇1， 董玉蘭1， 秦卓明2,3， 李 晶1， 黃迪海3， 楊昆鵬1， 徐懷英2,3， 陳耀星1

(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院， 北京海淀100193； 2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所， 山東濟(jì)南250100；3.山東省健牧生物藥業(yè)有限公司， 山東濟(jì)南250100)

為研究雞脾轉(zhuǎn)移因子對蛋雛雞腸道細(xì)胞因子分泌的影響，試驗(yàn)選取200只SPF白來航蛋雞，隨機(jī)均分成4組。各組從5日齡開始分別灌服0.1 mg/只·d、0.25 mg/只·d及1 mg/只·d劑量的雞脾轉(zhuǎn)移因子(灌服1周，停喂1周)；對照組灌服生理鹽水。40日齡屠宰稱重，取十二指腸、空腸、回腸及直腸組織，ELISA方法檢測TNF-α、IL-10的表達(dá)水平。結(jié)果表明，1 mg劑量組雞的體重顯著高于對照組(P<0.05)。0.25 mg和1.0 mg劑量組十二指腸內(nèi)TNF-α水平顯著降低(P<0.05)；0.25 mg/d劑量組十二指腸、直腸的IL-10含量顯著提高(P<0.05)；1 mg劑量雞脾轉(zhuǎn)移因子顯著提高十二指腸IL-10含量(P<0.05)，極顯著提高空腸、回腸和直腸的IL-10含量(P<0.01)。綜上結(jié)果表明，雞脾轉(zhuǎn)移因子可提高雞腸道抗炎因子表達(dá)，抑制促炎因子分泌，改善腸道黏膜免疫屏障功能。

雞脾轉(zhuǎn)移因子； 腸道黏膜免疫； TNF-α； IL-10

雞脾轉(zhuǎn)移因子(Chicken Spleen Transfer Factor,CSTF)，是一組由雞脾臟淋巴細(xì)胞釋放，無抗原性小分子多肽、核苷酸、氨基酸類物質(zhì)組成的物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)受體細(xì)胞介導(dǎo)免疫的能力，在國內(nèi)外已成為一種應(yīng)用廣泛的增強(qiáng)免疫制劑，其進(jìn)入機(jī)體后可活化淋巴細(xì)胞，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分化，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[1]。研究表明，轉(zhuǎn)移因子可以通過體液免疫及細(xì)胞免疫反應(yīng)途徑對機(jī)體的免疫狀態(tài)進(jìn)行調(diào)節(jié)[2-3]。腸黏膜組織中淋巴細(xì)胞因子分泌平衡對腸道免疫功能至關(guān)重要，但是長期CSTF調(diào)節(jié)腸黏膜局部細(xì)胞因子分泌平衡的相關(guān)報(bào)道相對較少，因此，本研究對蛋雛雞長期應(yīng)用CSTF對腸道局部免疫細(xì)胞因子分泌的影響進(jìn)行探究，以豐富轉(zhuǎn)移因子調(diào)節(jié)腸道免疫機(jī)能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

選取1日齡SPF白來航蛋雞200只，自由采食與飲水。試驗(yàn)雞隨機(jī)均分為4組，其中3組為試驗(yàn)組，5日齡始灌服CSTF，有效劑量分別為：0.10 mg/只·d、0.25 mg/只·d、1.0 mg/只·d。CSTF飼喂1周，停喂1周。對照組灌服生理鹽水。至40日齡各組隨機(jī)挑選8羽進(jìn)行稱重后屠宰，迅速截取十二指腸、空腸、回腸以及直腸全層組織，置-80 ℃冰箱冷凍保存。組織勻漿，應(yīng)用ELISA定量檢測試劑盒(購自北京萊博泰瑞科技發(fā)展有限公司)檢測TNF-α、IL-10水平。試驗(yàn)用CSTF由山東省健牧生物藥業(yè)有限公司制備，其有效濃度為1.0 mg/mL。

2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用One-way ANOVA 來比較不同試驗(yàn)組差異。所有數(shù)據(jù)均使用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P<0.05時(shí)表示差異顯著，用“*”表示，P<0.01時(shí)表示差異極顯著，使用“**”表示，P<0.001時(shí)表示差異極顯著，使用“***”表示。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 CSTF對雞體重的影響 如圖1所示，1 mg劑量組試驗(yàn)雞的體重顯著高于對照組(P=0.0363)。0.1 mg和0.25 mg兩種劑量CSTF對40日齡雞體重的影響差異未達(dá)到顯著水平。因此高濃度CSTF能夠促進(jìn)雞只增重。

圖1 CSTF對雞體重的影響

3.2 CSTF對40日齡雞腸道TNF-α水平的影響 TNF-α是腫瘤壞死因子，它可以促進(jìn)T細(xì)胞產(chǎn)生各種炎癥因子，進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。表1結(jié)果表明，灌服0.25 mg/d和1 mg/d CSTF在40日齡雞的十二指腸中可顯著下調(diào)TNF-α的水平58%(P=0.0446)、37.51%(P=0.0450)，差異顯著。但是3種劑量CSTF對空腸、回腸及直腸中的TNF-α表達(dá)含量沒有顯著影響。因此，CSFP僅對腸道前段致炎因子下調(diào)作用顯著。

3.3 CSTF對40日齡雞腸道IL-10水平的影響 IL-10主要由Th2細(xì)胞，是一種抗炎性因子，發(fā)揮下調(diào)炎癥反應(yīng)、拮抗炎性介質(zhì)的作用。對IL-10含量統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表2所示，灌服0.1 mg/d劑量的CSTF試驗(yàn)雞四個(gè)腸段IL-10表達(dá)水平變化與對照組相比沒有達(dá)到顯著水平。灌服0.25 mg/d CSTF能夠顯著升高十二指腸及直腸內(nèi)IL-10水平(P=0.0160，P=0.0110)，但空腸、回腸內(nèi)IL-10水平與對照組無顯著性差異。灌服1 mg/d的CSTF可以顯著提高十二指腸、空腸、回腸及直腸內(nèi)IL-10水平(P=0.0495，P=0.0099；P=0.0023，P=0.0019)。因此，高濃度的CSTF才能增強(qiáng)腸黏膜抗炎因子的分泌。

表1 CSTF對雞腸道TNF-α含量的影響 (pg/mg)

表2 CSTF對40日齡雞腸道IL-10水平的影響 (pg/mg)

4 討論

20世紀(jì)50年代Lawrence等人[4]首先提出轉(zhuǎn)移因子的概念，經(jīng)過幾十年的研究與臨床應(yīng)用，表明TF具有調(diào)節(jié)受體細(xì)胞介導(dǎo)免疫的能力。臨床利用轉(zhuǎn)移因子治療先天性的小兒反復(fù)呼吸道感染，處理新城疫發(fā)病雞群都有顯著效果[5-6]。

各種致炎因子與抗炎因子之間的協(xié)作是調(diào)控機(jī)體內(nèi)炎性發(fā)展的關(guān)鍵。在腸道免疫應(yīng)答反應(yīng)中 TNF-α 起到促炎性因子的角色[7]，而且對幾個(gè)由基因突變導(dǎo)致且伴有炎癥性腸炎的疾病研究表明，TNF和這種并發(fā)癥存在密切聯(lián)系[8]。TNF-α還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和趨化因子(例如CXCL1，CXCL5和IL-8)的產(chǎn)生，并由此調(diào)節(jié)趨化性和免疫效應(yīng)機(jī)制[9]。本試驗(yàn)表明，CSTF的作用下，十二指腸促炎因子TNF-α水平顯著降低，說明在該段腸道中CSTF有效降低了體內(nèi)的應(yīng)激水平，促進(jìn)了機(jī)體腸道的健康。

IL-10作為腸道炎性疾病中重要的抑炎性細(xì)胞因子，能夠抑制活化的T細(xì)胞產(chǎn)生IL-2、IFN-γ等致炎性細(xì)胞因子，從而防止過度免疫應(yīng)答所造成的損害[10]。IL-10為Th2特異性分泌，Th1/Th2細(xì)胞的平衡紊亂是腸道炎性疾病的重要發(fā)病機(jī)制之一[11-12]。有研究表明，IL-10可以顯著下調(diào)腸道炎性疾病患者固有層單核細(xì)胞分泌TNF-α[13]，TNF-α水平的降低意味著體內(nèi)炎性反應(yīng)將受到抑制。本研究結(jié)果表明，在CSTF作用下，試驗(yàn)組各段腸道中IL-10含量發(fā)生顯著性增加，說明CSTF對于保障Th1/Th2細(xì)胞的平衡有著直接的影響。由此可以推測，CSTF通過對Th1/Th2細(xì)胞相互間轉(zhuǎn)化的影響，來增強(qiáng)腸道體液免疫功能，維護(hù)腸道黏膜健康。

綜上，蛋雛雞長期應(yīng)用CSTF，促進(jìn)腸道局部黏膜組織抗炎因子分泌，在一定腸段抑制致炎因子分泌，調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫平衡，調(diào)控腸道黏膜免疫應(yīng)答，并促進(jìn)雞只增重。

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Effect of chicken spleen transfer factor on secretion of chicken’sintestinal anti-inflammatory and pro-inflammatory cytokines

SHE De-yong1, DONG Yu-lan1, QIN Zhuo-ming2,3, LI Jing1, HUANG Di-hai3,YANG Kun-peng1, XU Huai-ying2, CHEN Yao-xing1

(1.China Agricultural University, College of veterinary medicine, Beijing 100193，China； 2.Poultry Institute, Shandong Academy of Agricultural Science, Jinan 250100，China； 3.Shandong Jianmu Biological Pharmaceutical Co., Ltd.Jinan 250100， China)

In order to study the effect of chicken spleen transfer factor on the expression of intestinal cytokines in laying hens and the regulation of intestinal mucosal immune function,200 SPF white leghorns were selected and evenly divided into 4 groups randomly.The groups were fed with 0.1mg/d,0.25mg/d and 1mg/d doses of chicken spleen transfer factor from 5 days old(fed a week and stop for a week).The control group was administered with physiological saline.When chicken grew to the 40 days old,duodenum,jejunum,ileum and rectum were collected and TNF-α(Tumor necrosis factor-α),and IL-10(Interleukin-10)were analyzed.The results showed that the weight of 1mg-TF-fed chicken was significantly higher than that of control group(P<0.05).Treatment with 0.25 mg/d and 1.0 mg/d TF significantly decreased TNF-α in duodenum compared to control group(P<0.05).IL-10 level was significantly enhanced in duodenum and rectum of chicken with 0.25 mg-TF-fed(P<0.05),and in duodenum(P<0.05),jejunum,ileum and rectum(P<0.01)of chicken with 1.0 mg-TF-fed.Data showed that chicken spleen transfer factors could improve the expression of anti-inflammatory factors,inhibit pro-inflammatory cytokine secretion,and improve intestinal mucosal immune barrier function.

Chicken spleen transfer factor ； Intestinal mucosal immunity ； TNF-α ； IL-10

CHEN Yao-xing

2017-01-06

國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(2013AA102306)；國家自然科學(xué)基金(31372332；31272483；31572476)

佘德勇(1977- )，男，講師，博士，研究方向?yàn)閯?dòng)物腸黏膜免疫學(xué)，E-mail：15855281060@139.com

陳耀星，E-mail：yxchen@cau.edu.cn

S858.31

A

0529-6005(2017)02-0003-03