晏曉清,曹 丹,張艷芳,何新安,李玉強(qiáng)
黃岡大別山檢測認(rèn)證有限公司
高效液相色譜法同時(shí)測定植物油中BaP、BHT、BHA、TBHQ的含量
晏曉清,曹 丹,張艷芳,何新安,李玉強(qiáng)
黃岡大別山檢測認(rèn)證有限公司
建立同時(shí)測定植物油中BaP、BHA、BHT、TBHQ的固相萃取-高效液相色譜分析方法。樣品溶解后固相萃取凈化,C18色譜柱分離,甲醇和水為等度洗脫,DAD檢測。最佳條件下,方法的回收率為80.0%~110.0%。該方法所用設(shè)備耗材常見,操作簡單、成本低,可用于植物油中BaP、BHA、BHT、TBHQ的測定。
固相萃取;反相高效液相色譜;植物油
BHA(叔丁基羥基茴香醚)、BHT(二叔丁基羥基甲苯)、TB?HQ(特丁基對(duì)苯二酚)是我國允許在食品中使用的3種常見抗氧化劑,可中斷油脂氧化過程,達(dá)到抗氧化、防酸敗、防變色的目的。過量攝入會(huì)對(duì)人體的肝、脾、肺等器官產(chǎn)生不利影響。苯并(a)芘(BaP)是油脂生產(chǎn)工藝的副產(chǎn)物,其在人體內(nèi)的代謝物二羥環(huán)氧苯并芘是直接的強(qiáng)致癌物。
HPLC測定植物油中BHA、BHT、TBHQ、BaP的方法很多,但大部分都是將抗氧化劑、BaP分開檢測。四種物質(zhì)一起分析的,近年來也有報(bào)道。前處理用到昂貴的凝膠滲透色譜,成本較高。
本實(shí)驗(yàn)擬采用固相萃取法對(duì)樣品進(jìn)行凈化,HPLC法對(duì)植物油中的BaP、BHA、BHT、TBHQ同時(shí)測定,以建立一種操作簡單、快速、成本低廉的植物油中BaP、BHA、BHT、TBHQ同時(shí)測定的分析方法。
1.1 主要儀器和試劑:
Agilent 1200液相色譜儀(DAD),固相萃取小柱ProElut ALN22g/60mL,超聲波震蕩器;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;固相萃取儀。
BaP(國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心,100mg/L)、BHA(純度97.0%)、BHT(純度99.5%)、TBHQ(純度99.0%),乙腈、正己烷、甲醇、乙酸乙酯均為色譜純。
1.2 方法
1.2.1 色譜條件
色譜柱SpursilTM C18,5μm,250×4.6mm;流動(dòng)相甲醇:水=95:5,柱溫30℃;進(jìn)樣量10μL;波長230nm。
1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置
分別準(zhǔn)確稱取500.0mgBHA、BHT、TBHQ于100mL容量瓶中,甲醇溶解、定容為5.0mg/mL的儲(chǔ)備液,4℃保存。各取四種單一儲(chǔ)備液混合,甲醇稀釋至50mL配置成混合標(biāo)準(zhǔn)使用液,濃度為:BHA、BHT、TBHQ5.00mg/L,BaP 2.00 mg/L。
1.2.3 樣品處理
提?。河貌AQ取0.4g試樣(精確到1mg),用5mL正己烷溶解稀釋,待凈化。
凈化:30mL正己烷活化小柱后,上樣,50mL(乙腈:正己烷1: 1)混合溶劑洗脫(分層不影響結(jié)果),收集淋洗液,濃縮后定容至1mL,過濾膜后待測。
2.1 淋洗液的選擇
先后嘗試用正己烷和乙酸乙酯、正己烷和甲醇、正己烷和乙腈分別按照1:1、1:2、1:3、1:4的比例混合作為淋洗液,經(jīng)方法分析后回收率見表1(未在表中列出者回收率過低)。最終選取乙腈:正己烷1:1為淋洗液。
表1 BHA、BHT、TBHQ、BaP的回收率
2.2 色譜條件的選擇
當(dāng)采用流動(dòng)相甲醇-水(97:3)洗脫時(shí),TBHQ與BHA部分重疊;甲醇-水90:10時(shí),TBHQ與BHA完全層疊。甲醇-水95:5,兩者可完全分開,如圖1。
圖1 4種目標(biāo)化合物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC色譜圖
建立了固相萃取凈化,HPLC-DAD同時(shí)檢測植物油中BaP和3種抗氧化劑(BHA、BHT、TBHQ)的方法。樣品經(jīng)溶解、固相萃取凈化,HPLC等度洗脫,HPLC-DAD同時(shí)分析出植物油中四種化學(xué)物質(zhì)含量。所用設(shè)備耗材常見,且操作簡單、成本低,利于應(yīng)用推廣。