黃連解毒湯對腹透患者感染病原菌的作用研究*

沈嫣婧 齊 艷 樓正青

浙江省杭州市中醫(yī)院 浙江 杭州 310007

黃連解毒湯對腹透患者感染病原菌的作用研究*

沈嫣婧 齊 艷 樓正青

浙江省杭州市中醫(yī)院 浙江 杭州 310007

目的：研究黃連解毒湯對腹透患者感染的病原菌的作用。方法：對腹透患者感染的病原菌進(jìn)行鑒定和藥敏分析，采用連續(xù)倍比試管稀釋法測定黃連解毒湯對腹透液中常見病原菌的最小抑菌濃度（MIC），結(jié)合抗菌藥物的耐藥情況為臨床用藥提供參考依據(jù)。結(jié)果：送檢的208例腹膜透析液中共檢出病原菌59株，其中革蘭陽性球菌占69.5%，對喹諾酮類敏感性較高；革蘭陰性桿菌占23.7%，對三代頭孢菌素、碳青霉烯類和喹諾酮類敏感性較高。黃連解毒湯對金黃色葡萄球菌的MIC為250mg/ml，對表皮葡萄球菌、甲型溶血性鏈球菌、腸球菌和大腸埃希菌的MIC均大于1000mg/ml。結(jié)論：黃連解毒湯在體外對腹膜透析患者感染的金黃色葡萄球菌有顯著的抗菌活性。

黃連解毒湯 腹透感染 病原菌 耐藥性

細(xì)菌的耐藥性和抗生素的副作用嚴(yán)重困擾著醫(yī)藥學(xué)界，單靠單一化學(xué)藥物治療目前已無法解決這一難題。中藥在治療細(xì)菌性感染疾病具有副作用小、細(xì)菌耐藥性較少等優(yōu)勢，越來越受到人們的重視。黃連解毒湯具有清熱解毒之功效，臨床常用于治療敗血癥、膿毒血癥、肺炎等[1]，在腹膜透析相關(guān)感染中的作用研究較少。筆者探討黃連解毒湯對腹透感染常見病原菌的作用，以期對推動抗菌中藥的研究和開發(fā)提供幫助。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源:選取杭州市中醫(yī)院腎內(nèi)科2015年5月至2016年4月就診治療的腹膜透析患者208例，年齡在20～80歲。

1.2 標(biāo)本處理:由腎內(nèi)科醫(yī)師無菌操作抽取透析液8～10ml，分別注入需氧瓶和厭氧瓶中，送微生物室。收到標(biāo)本后立即放入全自動血培養(yǎng)儀中進(jìn)行培養(yǎng)，若標(biāo)本陽性則儀器自動報(bào)警，后轉(zhuǎn)種血平板、巧克力平板或厭氧平板中進(jìn)行培養(yǎng)鑒定。若培養(yǎng)5天未報(bào)警，則表示該標(biāo)本無細(xì)菌和真菌生長。

1.3 病原菌鑒定和藥敏試驗(yàn):嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行操作。應(yīng)用法國生物梅里埃公司Vitek-2鑒定儀及配套鑒定卡進(jìn)行菌種鑒定，采用K-B法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌（ATCC25922）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）、金黃色葡萄球菌（ATCC25923）和糞腸球菌（ATCC29212），均由浙江省臨檢中心提供。

1.4 黃連解毒湯的制備:分別稱取中藥飲片黃連、黃芩、黃柏和梔子9g、6g、6g、9g（質(zhì)量比為3∶2∶2∶3）混合，加10倍量純化水浸泡30min，煎煮60min，8層紗布濾過，藥渣再加5倍純化水煎煮60min，8層紗布濾過，將兩次煎煮濾液合并，離心后濃縮為10ml，即每毫升濃縮液相當(dāng)于原生藥3g。將濃縮液作為黃連解毒湯儲備液置100℃，20min飽和蒸汽高壓滅菌后，4℃保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用營養(yǎng)肉湯稀釋至適宜濃度。

1.5 供試菌液的制備:將培養(yǎng)陽性的透析液（實(shí)驗(yàn)菌）純化后接種于營養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)24h，菌液用3ml營養(yǎng)肉湯校正濃度至0.5cfu，作為供試菌液。

1.6 抗菌作用檢測:采用連續(xù)倍比試管稀釋法，取營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基配制好后，分裝于8根試管中并編號。1號試管加入4ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，2～8號試管每管均加3ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，于121℃，15min高壓滅菌后備用。取黃連解毒湯2ml加入1號試管中充分搖勻，濃度為1000mg/ml。從1號試管中吸取3ml藥液置2號試管中充分混勻。3～6號試管采用該法依次倍比稀釋1/4、1/8、1/16、1/32，使1～6號試管藥液濃度依次為1000、500、250、125、62.5、31.25mg/ml；然后每根試管加入0.3ml供試菌液。同時(shí)，7號試管加入0.3ml滅菌營養(yǎng)肉湯作為空白對照組，8號試管加入0.3ml供試菌液作為陽性對照組。將1～8號試管充分搖勻后，于35℃孵育16～24小時(shí)。以在試管內(nèi)完全抑制細(xì)菌生長的最低藥物濃度為最小抑菌濃度（MIC）。

2 結(jié)果

2.1 病原菌分布和構(gòu)成:208例送檢標(biāo)本中陽性標(biāo)本為52例，陽性率為25.0%。其中革蘭陽性球菌41例占69.5%，革蘭陰性桿菌14例占23.7%。所分離的細(xì)菌主要為革蘭陽性球菌，尤以凝固酶陰性葡萄球菌為主占32.2%，其次為鏈球菌屬、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌。見表1。

表1 病原菌分布和構(gòu)成

表2 腹透液分離的59株病原菌耐藥率

表3 腹透液中葡萄球菌屬的耐藥情況

2.2 病原菌的耐藥性分析:表2、3顯示，腹透液中的革蘭陽性球菌對喹諾酮類敏感性較高，革蘭陰性桿菌對三代頭孢菌素、碳青霉烯類、喹諾酮類敏感性較高。凝固酶陰性葡萄球菌的檢測株數(shù)和耐藥株數(shù)均高于金黃色葡萄球菌，兩者均對抗菌藥物多藥耐藥。

2.3 黃連解毒湯的抗菌試驗(yàn)結(jié)果:除對金黃色葡萄球菌的MIC為250mg/ml外，其余均大于1000mg/ml?？梢婞S連解毒湯在體外對腹膜透析患者感染的金黃色葡萄球菌具有顯著的抗菌活性。

3 討論

中藥及其復(fù)方制劑的抗菌作用不僅體現(xiàn)在方劑有效成分對細(xì)菌的直接抑制,同時(shí)還表現(xiàn)在方劑中各味藥多種成分相互作用的綜合效應(yīng)上[2]。黃連解毒湯中黃連、黃芩、黃柏、梔子均性寒味苦，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效。四藥聯(lián)合，協(xié)同作用更強(qiáng)。據(jù)報(bào)道[3]，黃連和黃芩在體外具有明顯的抑菌作用，可能與增強(qiáng)白細(xì)胞及肝網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬能力有關(guān)；黃柏對金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好，其抗菌原理主要為抑制細(xì)菌的呼吸和RNA的合成。本研究發(fā)現(xiàn)黃連解毒湯對金黃色葡萄球菌具有顯著的抗菌活性。

本研究中感染率最高的為凝固酶陰性葡萄球菌、鏈球菌屬和腸球菌屬，均為人體的正常菌群，可能與腹膜透析侵入性操作有關(guān)。腹腔內(nèi)置管作為異物置入后，破壞了原有密閉的腹膜腔內(nèi)環(huán)境，加之透析患者體內(nèi)多種免疫功能減退，使人體的正常寄生菌乘虛而入造成感染。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，任何疾病的發(fā)生發(fā)展過程都是致病因素作用于人體，引起正邪斗爭，導(dǎo)致陰陽氣血偏盛偏衰或臟腑經(jīng)絡(luò)機(jī)能失常的結(jié)果。故中藥的治療作用主要是扶正驅(qū)邪、消除病因、糾正紊亂的臟腑氣機(jī)及陰陽氣血的偏盛偏衰現(xiàn)象，恢復(fù)臟腑經(jīng)絡(luò)的正常生理功能，達(dá)到治愈疾病的目的。由于中藥及其復(fù)方制劑成分復(fù)雜多樣,所以不能單純從體外抑菌、殺菌試驗(yàn)的效果來評價(jià)中藥在體內(nèi)的作用。因此，黃連解毒湯對金黃色葡萄球菌的作用機(jī)制、在腹透感染患者體內(nèi)是否發(fā)揮抗感染作用及其作用機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。

[1]張鵬暉,張建亭.黃連解毒湯藥理作用研究進(jìn)展[J].浙江中醫(yī)雜志,2012,47(6):458-460.

[2]劉云寧,李小鳳,班旭霞,等.中藥抗菌成分及其抗菌機(jī)制的研究進(jìn)展[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2015,8(8):1012-1017.

[3]徐濤.中藥黃柏的現(xiàn)代藥理作用研究[J].中國中醫(yī)藥咨訊,2010,34(2):111.

2016-08-18

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目質(zhì)粒介導(dǎo)產(chǎn)KPC酶大腸埃希菌的克隆流行及傳播機(jī)制研究，編號：81301490