• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    全自動氨基酸分析儀法測定4 種貝類肌肉中谷胱甘肽和游離氨基酸含量

    2017-03-27 06:50:45張?zhí)K平邱偉強陳舜勝
    食品科學 2017年4期
    關(guān)鍵詞:縊蟶文蛤貝類

    張?zhí)K平,邱偉強,盧 祺,陳舜勝

    (上海海洋大學食品學院,上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心,上海 201306)

    全自動氨基酸分析儀法測定4 種貝類肌肉中谷胱甘肽和游離氨基酸含量

    張?zhí)K平,邱偉強,盧 祺,陳舜勝*

    (上海海洋大學食品學院,上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心,上海 201306)

    建立一種測定貝類肌肉中谷胱甘肽和游離氨基酸的全自動氨基酸分析儀法,以4 種常見貝類為研究對象,采用0.02 mol/L鹽酸溶液作為提取劑,體積分數(shù)5%磺基水楊酸溶液為蛋白沉淀劑,同時優(yōu)化了緩沖溶液的組成及洗脫程序,并對該方法的線性范圍、檢出限、精密度以及回收率進行測定。結(jié)果表明:貝類肌肉中的谷胱甘肽和游離氨基酸有著較好的分離效果,線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為0.999 1~0.999 9,檢出限(RSN=3)為0.07~0.27 μmol/L,加標平均回收率為86.40%~102.42%,日內(nèi)和日間相對標準偏差分別為0.31%~0.73%和1.14%~2.60%。4 種貝類肌肉組織中的游離氨基酸含量比較豐富,總游離氨基酸含量分別為1 396.39、1 016.04、911.15、287.01 mg/100 g,文蛤>青蛤>縊蟶>牡蠣,主要的游離氨基酸為牛磺酸(Tau)、谷氨酸(Glu)、丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg);谷胱甘肽含量分別為103.20、82.53、61.77、33.37 mg/100 g,青蛤>文蛤>縊蟶>牡蠣。該方法適用于貝類肌肉中谷胱甘肽和游離氨基酸含量的測定與分析。

    貝類肌肉;谷胱甘肽;游離氨基酸;全自動氨基酸分析儀法

    貝類屬軟體動物門中的瓣鰓綱(或雙殼綱),常見的螺類、蛤類、扇貝、牡蠣等都屬于該類,貝類具有非常高的食用價值和藥用價值。由于其生存環(huán)境的復雜性,使得貝類含有很多陸地生物沒有的具有特殊生理活性的物質(zhì),含有非常豐富的活性肽和氨基酸等非揮發(fā)性的含氮物質(zhì)[1]。

    谷胱甘肽(glutathione,GSH)一直因為其獨特和重要的生理功能為國內(nèi)外學者所研究,如參與氨基酸的吸收和轉(zhuǎn)運、維持細胞正常生長、抗氧化作用[2-3]等,目前對于植物和血漿中的GSH含量的測定已經(jīng)作出過很多研究[4-5],但是關(guān)于貝類肌肉中GSH含量的測定方法研究較少。

    游離氨基酸(free amino acids,F(xiàn)AA)是非蛋白氮的重要組成部分,它們對水產(chǎn)食品新鮮度的評價和風味的貢獻有非常重要作用,如丙氨酸、谷氨酸以及甘氨酸都會影響其風味以及口感。丙氨酸和谷氨酸具有甜味,谷氨酸尤其在甲殼類動物肌肉中起重要的鮮味作用[6]。此外,F(xiàn)AA還可作為許多魚類以及甲殼類動物品質(zhì)評價的重要鮮度潛在指標[7-8]。章超樺等[9]在研究翡翠貽貝肉的食品化學特性時認為呈味FAA對甜味、甘味有重要貢獻;楊文鴿等[10]通過對縊蟶冰藏?;钇陂g呈味物質(zhì)的變化研究發(fā)現(xiàn)FAA對縊蟶鮮味風味起到重要作用,精氨酸能夠賦予海鮮一個適宜的整體風味[11]。關(guān)于植物中游離氨基酸含量的測定方法為大多國內(nèi)外學者所青睞[12-16],但是關(guān)于貝類肌肉中的游離氨基酸卻沒有一種簡便快捷的測定方法。

    目前國內(nèi)外相關(guān)測定GSH和FAA的方法有很多,主要有高效液相色譜法[17-21]、比色法[22-26]、毛細管電泳法[27]、氨基酸自動分析(amino acid analyzer,AAA)法[28-31]等。AAA法是最常用的一種分析方法,它是以陽離子交換樹脂為固定相,酸性緩沖液為流動相,在柱后采用茚三酮溶液與氨基酸衍生生成具有可見光吸收的衍生物進行檢測,具有重復性好、儀器穩(wěn)定、結(jié)果可靠等優(yōu)點?,F(xiàn)有的方法主要表現(xiàn)在對GSH或FAA含量的單獨測定,并且貝類中GSH或FAA的測定方法相關(guān)的研究較少,針對貝類肌肉中GSH和FAA的測定鮮見一種快速、有效的方法。

    本實驗將通過調(diào)節(jié)緩沖液pH值以及優(yōu)化洗脫程序,建立一種測定貝類肌肉中GSH和FAA的AAA法,同時對該方法進行方法學驗證,確定該方法的準確性和穩(wěn)定性,為建立貝類資源的開發(fā)提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    文蛤、青蛤、縊蟶、牡蠣 上海臨港蘆潮港水產(chǎn)市場;運回實驗室立即處理,并于4 ℃條件下保存。

    GSH標準品、多種氨基酸混合標準溶液 美國Sigma公司;二水合5-磺基水楊酸(分析純),檸檬酸鈉、氫氧化鈉、氯化鈉(均為色譜純),檸檬酸、乙醇、鹽酸(均為優(yōu)級純) 國藥集團化學試劑有限公司。

    1.2 儀器與設備

    L-8800氨基酸全自動分析儀 日本日立公司;FJ-200高速分散均質(zhì)機 上海標本模型廠;501XL全自動研磨機 普瑞科學儀器公司;BSA124S電子天平 大連格萊瑞機械有限責任公司;TopPette手動固定移液器、PH-240A干燥培養(yǎng)箱 上海精密儀器儀表有限公司;FRQ-1010HT超聲波清洗器 杭州法蘭特超聲波科技有限公司;GL-26M/MI立式高速冷凍離心機 上海趙迪生物科技有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 混合標液的配制

    準確稱量76.83 mg GSH標準品,用超純水定容至100 mL容量瓶中,即得2.5 μmol/mL標準溶液,從中準確取出2 mL混合溶液,加入2 mL含有多種標準氨基酸組分(2.5 μmol/mL)的混合液,用超純水定容至50 mL,即為0.10 μmol/mL混合標準溶液,保存至4 ℃冰箱。

    1.3.2 樣品前處理

    樣品處理方法采用Tanimoto等[32]測定牡蠣在冷藏過程中FAA的變化為基礎(chǔ),稍加修改。

    準確稱量1 g貝類肉組織,加入15 mL 0.02 mol/L稀鹽酸,充分均質(zhì)后用超聲波清洗5 min,然后用冷凍離心機(5 000 r/min,4 ℃)離心10 min,收取上清液。將剩余殘渣加入10 mL 0.02 mol/L稀鹽酸后攪拌,再次離心(5 000 r/min,4 ℃)5 min,合并上清液,定容至50 mL。定容后移取2 mL,加入2 mL體積分數(shù)5%磺基水楊酸溶液,再次離心(10 000 r/min,4 ℃)10 min,然后經(jīng)0.22 μm水相過濾膜過濾,上機測定。3 組平行實驗,測定結(jié)果取平均值。

    1.3.3 緩沖溶液的配制

    緩沖溶液的配制及茚三酮反應液的組成如表1、2所示。

    表1 緩沖液的配制Table1 Preparation of buffer solution

    表2 茚三酮反應液的組成Table2 Composition of reaction systems containing ninhydrin

    1.3.4 洗脫程序及升溫過程優(yōu)化

    采用氨基酸全自動分析儀的梯度洗脫程序在原有基礎(chǔ)上修改,如表3所示。

    表3 氨基酸分析儀的梯度洗脫以及升溫程序優(yōu)化Table3 Gradient elution of amino acid analyzer and optimization of heating process

    1.3.5 氨基酸自動分析儀參數(shù)條件

    分離柱(4.6 mm×60 mm),樹脂為陽離子交換樹脂;分離柱溫度57 ℃;檢測波長570 nm(脯氨酸為440 nm);進樣量20 μL;緩沖液流速0.35 mL/min;反應液:茚三酮試劑,流速0.35 mL/min;單元溫度135 ℃;使用自帶軟件進行數(shù)據(jù)分析。

    1.3.6 回收率和精密度測定

    各取1 g文蛤肌肉組織,樣品中添加高、中、低3 種不同濃度的混合標準溶液,按1.3.2節(jié)方法進行樣品處理,按照1.3.5節(jié)方法進行參數(shù)設定并上機檢測,每種濃度進樣5 次,用外標法計算其實際含量與加標平均回收率。

    對同一樣本溶液在1 d內(nèi)進行5 次重復實驗分析日內(nèi)變化,對同一樣本連續(xù)測定5 d(每天測定1 次)的變化,分別確定日內(nèi)與日間精密度?;厥章拾聪率接嬎悖?/p>

    2 結(jié)果與分析

    2.1 混合標準溶液與樣品圖譜

    L-8800全自動氨基酸分析儀的基本原理是以不同pH值梯度的緩沖溶液來洗脫出(酸性、中性、堿性)FAA,與茚三酮反應液會發(fā)生顯色反應,從而對FAA進行定性與定量分析[33]。由于GSH中的氨基在弱酸性溶液中與茚三酮反應生成藍紫色化合物,于波長570 nm處有最大吸收峰,因此也可以對此進行定性和定量分析。

    圖1 標準混合溶液和4 種貝類肌肉樣品圖譜Fig.1 Amino acid profiles of mixed standard solution and muscle samples from four shellfish species

    由圖1可以看出,標準混合溶液和4 種貝類肌肉的樣品圖譜在經(jīng)過優(yōu)化后,GSH與FAA達到了較好的分離效果,其中圖1C、D、E中GSH處有其他物質(zhì)干擾,可能為青蛤、縊蟶、牡蠣肌肉中的其他FAA或者活性肽,有待進一步的分析與研究。

    2.2 方法性能評價

    通過線性范圍、檢出限、精密度以及回收率等指標來評價該方法性能[34-35]。

    2.2.1 線性范圍、檢出限測定結(jié)果

    將標準混合溶液用0.02 mol/L鹽酸溶液進行適當稀釋,使其質(zhì)量濃度分別為1、10、50、100、250 μg/mL,按1.3.5節(jié)方法進行測定,每個質(zhì)量濃度的標準混合溶液分別進樣3 次,通過保留時間作為定性的依據(jù),以所測色譜的峰面積和其相對應的質(zhì)量濃度作出標準曲線,用線性相關(guān)系數(shù)(R2)評價[18];根據(jù)信噪比,當所測物質(zhì)色譜峰的峰高為噪音3 倍時(RSN=3),確定其混合標準組分的檢出限,當色譜峰的峰高為噪音10 倍時(RSN=10),確定其混合標準組分定量限[36]。

    如表4所示,在1~250 μg/mL范圍內(nèi),GSH和FAA的線性相關(guān)系數(shù)R2在0.999 1~0.999 9之間,表明優(yōu)化過后的全自動氨基酸分析儀法中色譜峰的面積與質(zhì)量濃度之間有著比較好的線性關(guān)系,混合標準溶液中的各組分的定量限在0.21~0.94 μmol/L之間,檢出限在0.07~0.27 μmol/L之間。表明優(yōu)化過后的全自動氨基酸分析儀法對于測定貝類肌肉中的GSH與FAA有著較好的靈敏度。

    表4 GSH與多種氨基酸標準混合溶液線性相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限Table4 Linear correlation coeff i cients, detection limits and quantitation limits of mixed standard solution of glutathione and amino acids

    2.2.2 回收率和精密度測定結(jié)果

    表5 GSH與氨基酸混合標準溶液加標回收率和精確度(n=5)Table5 Recovery and precision of mixed standard solution of glutathione and amino acids (n= 5)

    通過加標實驗以及加標回收率的計算,由表5可知,混合標準溶液各組分加標平均回收率在86.40%~102.42%之間,日內(nèi)相對標準偏差在0.31%~0.73%之間,日間相對標準偏差在1.14%~2.60%之間,符合實驗室質(zhì)量控制規(guī)范中食品理化檢測[37]的相關(guān)要求。

    2.2.3 GSH、氨基酸含量測定與分析

    貝類之所以食用起來口感獨特,味道鮮美以及營養(yǎng)豐富,這其中與GSH以及FAA的含量有著很大的關(guān)系。GSH由于其具有獨特的生理活性具有抗氧化、抗菌、降血壓等生理功能[3],F(xiàn)AA則是水產(chǎn)品新鮮度和風味的重要評價指標,也是非蛋白氮的重要組成部分;不同的FAA具有不同的滋味,呈現(xiàn)鮮、甜、酸、苦等多種滋味,會直接反應出水產(chǎn)品食物的味道以及鮮美程度。如甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)主要呈味特性為甜味,為食物本身提供清香的甜味,Glu主要呈味特性為鮮味,是FAA中最重要的鮮味劑,具有保護肝臟的功能,有著非常高的營養(yǎng)價值以及生理功能[38]。

    表6 4 種貝類肌肉中GSH與FAA的組成及含量(n=3)Table6 Contents of glutathione and free amino acids in four species of shellfish (n=3)

    取每種貝類肌肉組織各1 g平行做3 個樣品,按照1.3.2節(jié)進行樣品的處理,并按照參數(shù)條件進行檢測,對檢測數(shù)據(jù)進行SPSS分析,并得出顯著性,如表6所示。4 種貝類肌肉組織中FAA和GSH非常豐富,總FAA含量方面,文蛤含量最高,為1 396.39 mg/100 g,牡蠣為287.01 mg/100 g??侳AA含量為文蛤>青蛤>縊蟶>牡蠣,這與劉云等[39]對煙臺近海3 種貝類中FAA的測定結(jié)果略有不同,可能是由于貝類在不同地域以及不同生長環(huán)境的原因?qū)е麦w內(nèi)FAA的含量以及比例存在差異;呈味氨基酸占總FAA的比重較大,其中牡蠣肌肉中呈味氨基酸的含量為143.55 mg/100 g,占總FAA的50.02%,達到一半的比例;青蛤中呈味氨基酸比例最低,為32.91%;呈味氨基酸含量為文蛤>縊蟶>青蛤>牡蠣;貝類肌肉中含有人體必需的大部分氨基酸,縊蟶肌肉中必需氨基酸含量為103.49 mg/100 g,占總FAA的11.36%,牡蠣雖然含量稍低,為54.19 mg/100 g,但比例為18.88%;必需氨基酸含量為縊蟶>青蛤>牡蠣>文蛤,文蛤最低,只有48.15 mg/100 g,占比3.45%。

    FAA組成方面,文蛤肌肉組織中主要的FAA為Tau、Glu、Ala、Arg,占FAA含量的比例分別為37.26%、10.55%、32.54%、7.12%,這4 種氨基酸的比例達到了87.47%,這與Konosu等[40]對蛤中FAA的組成成分分析結(jié)果相同;青蛤肌肉中主要的FAA為Tau(42.58%)、Glu(11.00%)、Ala(15.12%)、Arg(9.48%);縊蟶肌肉中主要的FAA為Tau(22.70%)、Glu(5.99%)、Ala(30.47%)、Arg(16.74%),這與楊文鴿等[10]冰藏期間對縊蟶中FAA含量及比例差別不大;牡蠣肌肉中主要的FAA為Tau(18.89%)、Glu(10.95%)、Gly(19.00%)、Ala(16.94%)、Arg(4.08%),這與Je等[41]測定牡蠣中主要的FAA結(jié)果相同;通過對比可以發(fā)現(xiàn),貝類肌肉中主要的FAA為Tau、Glu、Ala、Arg,占FAA總量中很大的比例,這與Chen Dewei等[42]對北部灣雙殼類軟體動物中FAA的組成測定的結(jié)果相同。

    貝類肌肉組織中含有豐富的GSH,和其他水產(chǎn)生物相比含量較高,和陸地生物血液中的含量相當,遠高于植物中的GSH[43]。文蛤、青蛤、縊蟶、牡蠣的含量分別為82.53、103.20、61.77、33.37 mg/100 g;通過比較得知,青蛤中GSH的含量最高,含量從高到底依次為青蛤>文蛤>縊蟶>牡蠣,這與張靜等[25]利用熒光分光光度法測定海洋生物中的GSH中含量略有差異,可能由于部分FAA沒有檢測出,與GSH的特征峰重疊。由于GSH的獨特的生理活性和功能,通過GSH含量的分析也反應了貝類具有非常高的營養(yǎng)價值。

    2.2.4 氨基酸呈味效果及味道強度值分析

    味道強度值(taste activity value,TAV)通常是指各種呈味物質(zhì)在樣品中的含量與其相對應的呈味閾值的比值。一般情況下,當TAV大于1時,認為該呈味物質(zhì)對樣品的呈味效果有比較重要的貢獻[44]。相反的,如果TAV小于1,可以判定該呈味物質(zhì)呈味效果不顯著,貢獻不大。

    表7 常見貝類主要FAA呈味特征、呈味閾值及TAV分析[42]Table7 Taste characteristics, taste threshold and TAV analysis of the main free amino acids in the common shellf i shes

    如表7所示,對文蛤肌肉呈味貢獻最大的是Ala,TAV為7.57,其次是Glu、Arg,TAV分別為4.91、1.99,呈味效果顯著;對青蛤、縊蟶呈味貢獻較大的為Glu、Ala、Arg,其中青蛤TAV分別為3.73、2.56、1.93,縊蟶TAV分別為1.82、4.63、3.05;對牡蠣肌肉呈味貢獻比較大的只有Glu,其TAV為1.05,這與楊文鴿等[10]測定結(jié)果相似;通過比較可以發(fā)現(xiàn),對貝類呈味貢獻較大的為鮮味和甜味氨基酸,這也是貝類具有非常強烈的鮮味以及口感甘甜的重要原因。

    3 討 論

    本實驗以4 種常見貝類為研究對象,采用0.02 mol/L鹽酸溶液作為提取劑,以體積分數(shù)5%磺基水楊酸溶液為蛋白沉淀劑,同時優(yōu)化了緩沖溶液的組成及洗脫程序,采用L-8800全自動氨基酸分析儀測定,可以實現(xiàn)較好的分離效果,并對貝類肌肉組織中的GSH與FAA進行了準確定量。經(jīng)過方法學的驗證,該方法具有良好的線性關(guān)系、檢出限、精密度以及回收率,此方法適用于貝類肌肉組織中GSH與多種FAA的測定。

    4 種常見貝類肌肉中FAA含量比較豐富,文蛤含量最高,為1 396.39 mg/100 g,牡蠣為287.01 mg/100 g??侳AA含量為文蛤>青蛤>縊蟶>牡蠣,呈味氨基酸含量為文蛤>縊蟶>青蛤>牡蠣,必需氨基酸含量為縊蟶>青蛤>牡蠣>文蛤;貝類肌肉中主要的FAA為Tau、Glu、Ala、Arg;此外,GSH的含量從高到底依次為青蛤>文蛤>縊蟶>牡蠣,對4 種貝類呈味貢獻較大的鮮味和甜味氨基酸,主要包括Glu、Ala、Arg,這也是貝類具有非常強烈的鮮味以及口感甘甜的重要原因。

    由于GSH水溶液在常溫條件下容易氧化[45],在樣品處理過程中如何防止GSH被氧化,使用何種濃度以及種類的抗氧化劑來保證GSH水溶液不被氧化且不會影響FAA的含量,有待進一步深入研究。此外,本研究只測定出18 種FAA與GSH的含量,還有部分FAA和活性肽沒有檢測出或者特征峰沒有分離出來,還有待進一步的研究、分離以及優(yōu)化。

    [1] 吳曉灑, 蔡路昀, 曹愛玲, 等. 水產(chǎn)品加工廢棄物中的蛋白及生物活性肽的研究進展[J]. 食品工業(yè)科技, 2014, 35(23): 372-376; 381. DOI:10.13386/j.issnl002-0306.2014.23.070.

    [2] 齊劍英. 谷胱甘肽的光學性質(zhì)及其分析測定研究[D]. 廣州: 暨南大學, 2003.

    [3] 宋增廷, 姜寧, 張愛忠, 等. 谷胱甘肽生物學功能的研究進展[J].飼料研究, 2008(9): 25-27.

    [4] 朱亞玲. 枸杞中谷胱甘肽的含量測定研究[D]. 延吉: 延邊大學, 2010.

    [5] 蔡鵬, 劉敘儀, 王萍. 谷胱甘肽還原酶循環(huán)法測定血漿谷胱甘肽含量在腫瘤化療中的意義[J]. 中國腫瘤臨床, 1994, 21(10): 717-719.

    [6] 李婉君. 南極磷蝦與南美白對蝦營養(yǎng)與滋味成分比較[D]. 上海:上海海洋大學, 2015.

    [7] 陳桂平. 草魚低溫貯藏期間質(zhì)構(gòu)及風味物質(zhì)變化研究[D]. 長沙:湖南農(nóng)業(yè)大學, 2014.

    [8] 李春萍. 臭鱖魚發(fā)酵中營養(yǎng)和風味變化的研究[D]. 杭州: 浙江工商大學, 2014. DOI:10.7666/d.Y2531617.

    [9] 章超樺, 洪鵬志, 鄧尚貴, 等. 翡翠貽貝肉的食品化學特性及其在海鮮調(diào)味料的應用[J]. 水產(chǎn)學報, 2000, 24(3): 267-270. DOI:10.3321/ j.issn:1000-0615.2000.03.013.

    [10] 楊文鴿, 徐大倫, 孫翠玲, 等. 縊蟶冰藏?;钇陂g呈味物質(zhì)的變化[J]. 中國食品學報, 2009, 9(3): 181-186. DOI:10.3969/ j.issn.1009-7848.2009.03.030.

    [11] 陳德慰, 蘇鍵, 劉小玲, 等. 廣西北部灣3 種貝類中主要呈味物質(zhì)的測定及呈味作用評價[J]. 食品科學, 2012, 33(10): 165-168.

    [12] 李丹, 黃龍, 朱巍, 等. 反相高效液相色譜法測定煙葉中的游離氨基酸[J]. 煙草科技, 2003, 24(2): 54-57. DOI:10.3969/ j.issn.1002-0861.2003.02.009.

    [13] SHIBA T, SHIRAKI N, FURUSHITA M, et al. Free amino acid and ATP-Related compounds in sterile tiger puffer fi sh (Takifugu rubripes) fi llets stored at 4 ℃[J]. Journal of Food Processing and Preservation, 2014, 38(3): 791-797. DOI:10.1111/jfpp.12031.

    [14] WU L, ZHOU J, XUE X, et al. Fast determination of 26 amino acids and their content changes in royal jelly during storage using ultraperformance liquid chromatography[J]. Journal of Food Composition and Analysis, 2009, 22(3): 242-249. DOI:10.1016/j.jfca.2008.10.022.

    [15] 王敏, 張敬書, 趙艷麗, 等. HPLC法測定玉米漿中游離氨基酸的含量[J]. 中國釀造, 2010, 29(5): 156-159. DOI:10.3969/ j.issn.0254-5071.2010.05.047.

    [16] 山廣志, 左利民, 余立, 等. 柱前衍生HPLC法測定脾氨肽口服液中17 種游離氨基酸[J]. 中國新藥雜志, 2013(11): 1255-1258.

    [17] 陳芬, 趙曉燕, 饒欽雄, 等. HPLC測定姬松茸中谷胱甘肽的含量[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2014(9): 1454-1457.

    [18] 魏斌, 李鵬, 崔勝云. HPLC法測定蓮子中還原型谷胱甘肽(GSH)和總巰基(-SH)含量[J]. 食品研究與開發(fā), 2015(8): 68-72. DOI:10.3969/j.issn.1005-6521.2015.08.019.

    [19] 陳文, 王光輝, 李丹, 等. 反相高效液相色譜法測定煙葉中的游離氨基酸[J]. 氨基酸和生物資源, 2003, 24(2): 54-57. DOI:10.3969/ j.issn.1006-8376.2002.01.020.

    [20] CSAPó J, ALBERT C, LóKI K, et al. Separation and determination of the amino acids by ion exchange column chromatography applying postcolumn derivatization[J]. Acta Universitatis Sapientiae-Alimentaria, 2008: 5-29.

    [21] PARAMáS A M G, BáREZ J A G, MARCOS C C, et al. HPLC-fl uorimetric method for analysis of amino acids in products of the hive (honey and bee-pollen)[J]. Food Chemistry, 2006, 95(1): 148-156. DOI:10.1016/j.foodchem.2005.02.008.

    [22] 邵金良, 黎其萬, 董寶生, 等. 茚三酮比色法測定茶葉中游離氨基酸總量[J]. 中國食品添加劑, 2008(2): 162-165. DOI:10.3969/ j.issn.1006-2513.2008.02.039.

    [23] 劉慧燕, 德力格爾桑, 方海田. 茚三酮比色法測定牛肉中游離氨基酸的試驗研究[J]. 保鮮與加工, 2006, 6(2): 23-25. DOI:10.3969/ j.issn.1009-6221.2006.02.011.

    [24] 郭黎平, 劉國良, 張卓勇, 等. 熒光光度法測定大豆提取液中還原型谷胱甘肽[J]. 東北師大學報(自然科學版), 2001, 33(1): 34-38. DOI:10.3321/j.issn:1000-1832.2001.01.007.

    [25] 張靜, 吉宏武, 周靜, 等. 熒光分光光度法測定海洋生物中的谷胱甘肽[J]. 廣東海洋大學學報, 2005, 25(4): 32-34. DOI:10.3969/ j.issn.1673-9159.2005.04.008.

    [26] 景蓓蓓, 楊曉紅, 張勝海, 等. 基于鈣黃綠素的熒光分光光度法測定谷胱甘肽[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學進展, 2011, 11(7): 1359-1362.

    [27] 沈佐君, 吳琳. 高效毛細管電泳法快速測定血清中游離氨基酸[J]. 中華醫(yī)學檢驗雜志, 1998(3): 516-517. DOI:10.3760/ j:issn:1009-9158.1998.03.007.

    [28] 曹讓, 張林生, 張旺鋒, 等. 用氨基酸分析儀測定棉花幼苗葉片中的還原型谷胱甘肽含量[J]. 植物生理學報, 2007, 43(4): 761-764.

    [29] 莫潤宏, 湯富彬, 丁明, 等. 氨基酸分析儀法測定竹筍中游離氨基酸[J].化學通報, 2012, 75(12): 1126-1131.

    [30] 王曜, 陳舜勝. 野生與養(yǎng)殖克氏原螯蝦游離氨基酸的組成及比較研究[J]. 食品科學, 2014, 35(11): 269-273. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201411054.

    [31] ZHANG H, WANG Z Y, YANG X, et al. Determination of free amino acids and 18 elements in freeze-dried strawberry and blueberry fruit using an amino acid analyzer and ICP-MS with micro-wave digestion[J]. Food Chemistry, 2014, 147(4): 189-194. DOI:10.1016/ j.foodchem.2013.09.118.

    [32] TANIMOTO S, KAWAKAMI K, MORIMOTO S. Changes in the free amino acid content of the shucked oyster Crassostrea gigas stored in salt water at 3 ℃[J]. Fisheries & Aquatic Science, 2013, 16(2): 63-69. DOI:10.5657/FAS.2013.0063.

    [33] 陳忠云. α-氨基酸和茚三酮顯色反應機理[J]. 中國大學教學, 1991(2): 36-37.

    [34] MA X, ZHAO D, LI X, et al. Chromatographic method for determination of the free amino acid content of chamomile fl owers[J]. Pharmacognosy Magazine, 2015, 11(41): 1324-1329. DOI:10.4103/0973-1296.149735.

    [35] GUANG C, JUN L, ZHIWEI S, et al. Rapid and sensitive ultrasonicassisted derivatisation microextraction (UDME) technique for bitter taste-free amino acids (FAA) study by HPLC-FLD[J]. Food Chemistry, 2014, 143(1): 97-105. DOI:10.1016/j.foodchem.2013.07.099.

    [36] 張梅秀, 王錫昌, 劉源. 薄層色譜和高效液相色譜聯(lián)用測定暗紋東方鲀肌肉中肌肽和谷胱甘肽的含量[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2012, 24(7): 928-932. DOI:10.3969/j.issn.1001-6880.2012.07.017.

    [37] 中國合格評定國家認可中心. 實驗室質(zhì)量控制規(guī)范: GB/T 27404—2008[S]. 北京: 中國標準出版社, 2008.

    [38] 趙靜, 丁奇, 孫穎, 等. 豬骨湯中的游離氨基酸及其呈味特征分析[J]. 食品研究與開發(fā), 2015, 36(18): 1-6. DOI:10.3969/ j.issn.1005-6521.2015.18.001.

    [39] 劉云, 宮向紅, 徐英江, 等. 煙臺近海3 種貝類中呈味核苷酸和氨基酸的測定及比較分析[J]. 中國水產(chǎn)科學, 2014, 21(2): 351-360.

    [40] KONOSU S, FUJIMOTO K, TAKASHNNA Y, et al. Constituents of the extracts and amino acid composition of the protein of shortnecked clam[J]. Nippon Suisan Gakkaishi, 1965, 31(9): 680-686. DOI:10.2331/suisan.31.680.

    [41] JE J Y, PARK P J, JUNG W K, et al. Amino acid changes in fermented oyster (Crassostrea gigas) sauce with different fermentation periods[J]. Food Chemistry, 2005, 91(1): 15-18. DOI:10.1016/ j.foodchem.2004.05.061.

    [42] CHEN Dewei, SU Jian, LIU Xiaoling, et al. Amino acid profiles of bivalve mollusks from Beibu Gulf, China[J]. Journal of Aquatic Food Product Technology, 2012, 21(4): 369-379. DOI:10.1080/10498850.20 11.604820.

    [43] 劉云國, 李八方, 汪東風, 等. 海洋生物活性肽研究進展[J]. 中國海洋藥物, 2005, 24(3): 52-57. DOI:10.3969/j.issn.1002-3461.2005.03.013.

    [44] CHEN Dewei, ZHANG Min. Non-volatile taste active compounds in the meat of Chinese mitten crab (Eriocheir sinensis)[J]. Food Chemistry, 2007, 104(3): 1200-1205. DOI:10.1016/j.foodchem.2007.01.042.

    [45] 朱義福. 還原型谷胱甘肽的穩(wěn)定性研究[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2011, 27(8): 919-923. DOI:10.3969/j.issn.1673-9078.2011.08.013.

    Determination of Glutathione and Free Amino Acids in Muscles of Four Shellf i sh Species by Automatic Amino Acid Analyzer

    ZHANG Suping, QIU Weiqiang, LU Qi, CHEN Shunsheng*
    (Shanghai Aquatic and Storage Engineering Technology Research, College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China)

    An analytical method was established for the simultaneous determination of glutathione and free amino acids in shellf i sh using a fully automatic amino acid analyzer. The extraction of the analytes was carried out using 0.02 mol/L hydrochloric acid solution as the extraction solvent followed by protein precipitation with 5% sulfonic acid solution. The buffer composition and the elution procedure were optimized at the same time. The linear range, limit of detection (LOD), precision and recovery rate of the method were determined. The results showed that good separation of glutathione and free amino acids in shellf i sh was achieved by this method with a good linear relationship. The correlation coeff i cients of the calibration curves were between 0.999 1 and 0.999 9. The minimum LODs at a signal to noise ratio (RSN) of 3 ranged from 0.07 to 0.27 μmol/L. The average recovery rates of spiked samples were between 86.40% and 102.42%. The relative standard deviations (RSDs) of intra-day and inter-day assays were 0.31%–0.73% and 1.14%–2.60%, respectively. Free amino acids were abundant in muscle tissue of four shellf i sh species, and their total free amino acid contents in decreasing order were clam (1 396.39 mg/100 g) > Cyclina sinensis (1 016.04 mg/100 g) > razor clam (911.15 mg/100 g) > oyster (287.01 mg/100 g). The main free amino acids were taurine, glutamic acid, alanine, and arginine. The glutathione contents of Cyclina sinensis, clam, razor clam and oyster were 103.20, 82.53, 61.77, and 33.37 mg/100 g, respectively. This method is suitable for the determination of glutathione and free amino acids in shellf i sh.

    shellf i sh muscle; glutathione; free amino acids; automatic amino acid analyzer

    10.7506/spkx1002-6630-201704027

    TS254

    A

    1002-6630(2017)04-0170-07

    2016-06-29

    國家自然科學基金面上項目(31471685);上海海洋大學??萍及l(fā)展專項(A2-0203-00-100208);上海海洋大學校博士啟動基金項目(A2-0203-00-100340)

    張?zhí)K平(1989—),男,碩士研究生,研究方向為水產(chǎn)品加工和貯藏。E-mail:626038339@qq.com

    *通信作者:陳舜勝(1956—),男,教授,本科,研究方向為水產(chǎn)品加工、食品理化分析和食品感官評定。E-mail:sschen@shou.edu.cn

    張?zhí)K平, 邱偉強, 盧祺, 等. 全自動氨基酸分析儀法測定4 種貝類肌肉中谷胱甘肽和游離氨基酸含量[J]. 食品科學, 2017, 38(4): 170-176. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201704027. http://www.spkx.net.cn

    ZHANG Suping, QIU Weiqiang, LU Qi, et al. Determination of glutathione and free amino acids in muscles of four shellf i sh species by automatic amino acid analyzer[J]. Food Science, 2017, 38(4): 170-176. (in Chinese with English abstract)

    DOI:10.7506/spkx1002-6630-201704027. http://www.spkx.net.cn

    猜你喜歡
    縊蟶文蛤貝類
    我國海水貝類養(yǎng)殖低碳效應評價
    海洋通報(2022年5期)2022-11-30 12:04:10
    池塘養(yǎng)殖文蛤死亡原因分析及防控對策
    蘇北沿海縊蟶養(yǎng)殖死亡的原因分析及防控措施
    沿海縊蟶養(yǎng)殖春季肥水技術(shù)
    QuEChERS-液相色譜-高分辨質(zhì)譜法測定貝類中6種親脂性貝類毒素
    鮮美貝類可能暗藏毒素
    食品與生活(2019年8期)2019-10-30 12:13:09
    以文蛤為主題課程的實踐與反思
    寧波近岸海域縊蟶有機氯農(nóng)藥風險評估
    撿文蛤
    LAND OF RAZOR CLAMS
    漢語世界(2015年5期)2015-01-05 08:12:07
    亚洲国产看品久久| 99热网站在线观看| 美女午夜性视频免费| 亚洲精品在线美女| 色播在线永久视频| 久久热在线av| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美成狂野欧美在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 大陆偷拍与自拍| 日韩欧美三级三区| 天天影视国产精品| 另类精品久久| 国产成人精品久久二区二区免费| 又黄又粗又硬又大视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产精品熟女久久久久浪| 9热在线视频观看99| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲人与动物交配视频| 丝袜人妻中文字幕| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 嫩草影院入口| 叶爱在线成人免费视频播放| 舔av片在线| 久久香蕉国产精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲激情在线av| 午夜免费成人在线视频| 悠悠久久av| 精品国产乱子伦一区二区三区| 色av中文字幕| 99久国产av精品| 在线观看日韩欧美| av女优亚洲男人天堂 | 操出白浆在线播放| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 成人欧美大片| 亚洲在线观看片| 国产高清三级在线| 黄色丝袜av网址大全| 国产单亲对白刺激| 国产97色在线日韩免费| 操出白浆在线播放| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 男插女下体视频免费在线播放| 成人午夜高清在线视频| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美最黄视频在线播放免费| 淫妇啪啪啪对白视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 综合色av麻豆| 男女床上黄色一级片免费看| 波多野结衣高清无吗| 精品电影一区二区在线| 国产一区二区三区视频了| 日本成人三级电影网站| 美女扒开内裤让男人捅视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| tocl精华| www.www免费av| 观看美女的网站| 精品久久久久久久毛片微露脸| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 精品国产美女av久久久久小说| 国产成人福利小说| 最近最新中文字幕大全免费视频| x7x7x7水蜜桃| 怎么达到女性高潮| 亚洲熟女毛片儿| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 最新中文字幕久久久久 | 在线观看午夜福利视频| 欧美乱妇无乱码| 亚洲精品456在线播放app | 在线国产一区二区在线| 国产精品1区2区在线观看.| 特级一级黄色大片| 日本五十路高清| 国产三级黄色录像| 九色成人免费人妻av| 香蕉丝袜av| 男插女下体视频免费在线播放| 免费在线观看成人毛片| 精品一区二区三区av网在线观看| 天堂网av新在线| 精品福利观看| 无遮挡黄片免费观看| 欧美3d第一页| 中文字幕最新亚洲高清| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲熟女毛片儿| 免费看a级黄色片| 宅男免费午夜| 一夜夜www| 1024手机看黄色片| 精品久久蜜臀av无| 丁香六月欧美| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 动漫黄色视频在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 美女大奶头视频| 国产精品av久久久久免费| 欧美在线一区亚洲| 成人性生交大片免费视频hd| 日本三级黄在线观看| 9191精品国产免费久久| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲美女黄片视频| 亚洲中文av在线| 日韩高清综合在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美精品啪啪一区二区三区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 舔av片在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 淫妇啪啪啪对白视频| 日韩精品中文字幕看吧| 国产男靠女视频免费网站| 一区福利在线观看| 美女免费视频网站| 免费高清视频大片| 免费高清视频大片| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 舔av片在线| 国产黄色小视频在线观看| www.999成人在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 少妇丰满av| 日本与韩国留学比较| 97碰自拍视频| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲电影在线观看av| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产免费男女视频| 老汉色∧v一级毛片| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久精品影院6| 免费搜索国产男女视频| av片东京热男人的天堂| 亚洲在线自拍视频| 国产毛片a区久久久久| 国产精品影院久久| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产高清有码在线观看视频| 午夜免费激情av| 人妻久久中文字幕网| 精品一区二区三区av网在线观看| 黄色成人免费大全| 亚洲成人中文字幕在线播放| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 无遮挡黄片免费观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 天天躁日日操中文字幕| 国产人伦9x9x在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲国产精品999在线| 日本免费a在线| 国产v大片淫在线免费观看| 成人一区二区视频在线观看| 国产99白浆流出| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 一个人免费在线观看的高清视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 99精品在免费线老司机午夜| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产午夜精品久久久久久| 一进一出抽搐动态| 国产成人av激情在线播放| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 99久久99久久久精品蜜桃| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 日韩欧美免费精品| 少妇丰满av| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 一二三四在线观看免费中文在| 美女免费视频网站| 中文字幕熟女人妻在线| 久久性视频一级片| 99久久成人亚洲精品观看| 国产精品国产高清国产av| 最新中文字幕久久久久 | 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美成人免费av一区二区三区| 波多野结衣巨乳人妻| 我的老师免费观看完整版| 在线免费观看的www视频| 中国美女看黄片| www国产在线视频色| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩中文字幕欧美一区二区| 91av网一区二区| 久久人人精品亚洲av| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 18美女黄网站色大片免费观看| 91麻豆av在线| 看片在线看免费视频| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲国产看品久久| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲人成电影免费在线| 精品国产乱子伦一区二区三区| 激情在线观看视频在线高清| av中文乱码字幕在线| 淫秽高清视频在线观看| av女优亚洲男人天堂 | 丰满的人妻完整版| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 成人永久免费在线观看视频| 国产野战对白在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产精品久久视频播放| 国产精品永久免费网站| 久久香蕉精品热| 97超视频在线观看视频| 午夜免费激情av| 最近最新中文字幕大全电影3| 一二三四在线观看免费中文在| 日本 av在线| 国产伦人伦偷精品视频| 午夜福利成人在线免费观看| 不卡av一区二区三区| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲av成人av| 麻豆av在线久日| 亚洲欧美精品综合久久99| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 日韩免费av在线播放| 日本精品一区二区三区蜜桃| 成人无遮挡网站| 99热这里只有精品一区 | 精品人妻1区二区| 国产精品九九99| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 好男人电影高清在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 午夜精品在线福利| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 精品国产亚洲在线| 日本与韩国留学比较| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 高清毛片免费观看视频网站| 日韩欧美国产在线观看| av天堂中文字幕网| 啦啦啦韩国在线观看视频| 小说图片视频综合网站| 天堂动漫精品| 午夜激情欧美在线| 亚洲av成人精品一区久久| 国产乱人视频| 性色av乱码一区二区三区2| 99热这里只有精品一区 | 男人舔奶头视频| 久久中文字幕一级| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 一个人看视频在线观看www免费 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美中文综合在线视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产亚洲欧美98| 男女那种视频在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 嫩草影院精品99| 久久午夜亚洲精品久久| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久久久久久久中文| 动漫黄色视频在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产精品av久久久久免费| 久久久久性生活片| 久久久久免费精品人妻一区二区| 美女午夜性视频免费| 国产成人影院久久av| 亚洲国产中文字幕在线视频| h日本视频在线播放| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲成人久久爱视频| 中文字幕高清在线视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 免费观看的影片在线观看| 亚洲专区字幕在线| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久精品91蜜桃| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 欧美黄色片欧美黄色片| av女优亚洲男人天堂 | 午夜免费成人在线视频| 日韩三级视频一区二区三区| x7x7x7水蜜桃| 亚洲av五月六月丁香网| 99久久精品热视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 午夜福利成人在线免费观看| 91在线观看av| 国产三级中文精品| 国产成年人精品一区二区| 日韩av在线大香蕉| 成年免费大片在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲成人久久性| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费av不卡在线播放| 最新中文字幕久久久久 | 久久九九热精品免费| 日韩欧美在线二视频| 欧美日韩综合久久久久久 | 黄色 视频免费看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 欧美色欧美亚洲另类二区| 老司机在亚洲福利影院| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲国产色片| 成人18禁在线播放| 亚洲 欧美一区二区三区| 99视频精品全部免费 在线 | 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 99久国产av精品| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产高清激情床上av| 亚洲黑人精品在线| 日本三级黄在线观看| 免费av不卡在线播放| 国产精品一及| 十八禁人妻一区二区| 日韩大尺度精品在线看网址| 动漫黄色视频在线观看| 日韩欧美三级三区| 国产麻豆成人av免费视频| 日本熟妇午夜| 最新中文字幕久久久久 | 国产美女午夜福利| 国产成人精品久久二区二区免费| 免费看a级黄色片| 欧美zozozo另类| 日韩欧美国产在线观看| ponron亚洲| 亚洲av第一区精品v没综合| 91老司机精品| 午夜免费成人在线视频| 国产成人精品无人区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产高潮美女av| а√天堂www在线а√下载| x7x7x7水蜜桃| 韩国av一区二区三区四区| 午夜影院日韩av| 国产黄色小视频在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 哪里可以看免费的av片| 一本一本综合久久| 99精品在免费线老司机午夜| 动漫黄色视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久| 一本一本综合久久| 日韩大尺度精品在线看网址| av在线蜜桃| 哪里可以看免费的av片| 成人鲁丝片一二三区免费| h日本视频在线播放| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲精品456在线播放app | 国语自产精品视频在线第100页| 久久人人精品亚洲av| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美成人免费av一区二区三区| 岛国在线观看网站| 国产精品九九99| 国产人伦9x9x在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 天堂动漫精品| 亚洲一区高清亚洲精品| 一二三四在线观看免费中文在| 国产高清视频在线观看网站| bbb黄色大片| 国产乱人伦免费视频| АⅤ资源中文在线天堂| 99久久综合精品五月天人人| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩av在线大香蕉| 亚洲在线观看片| av天堂在线播放| 男女视频在线观看网站免费| 丁香六月欧美| 男女下面进入的视频免费午夜| 免费观看的影片在线观看| 色综合婷婷激情| 久久中文看片网| 老司机午夜十八禁免费视频| 免费无遮挡裸体视频| 国产91精品成人一区二区三区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品女同一区二区软件 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久久国产精品麻豆| 中出人妻视频一区二区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 99久久精品国产亚洲精品| 久久精品91蜜桃| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲片人在线观看| 女警被强在线播放| 一二三四在线观看免费中文在| 听说在线观看完整版免费高清| 成人亚洲精品av一区二区| 大型黄色视频在线免费观看| 午夜免费激情av| 手机成人av网站| 黄色视频,在线免费观看| 国产成人av激情在线播放| 婷婷六月久久综合丁香| 日本黄色片子视频| 两个人的视频大全免费| 国产精品 国内视频| 亚洲成av人片在线播放无| 五月玫瑰六月丁香| 欧美一级毛片孕妇| 午夜福利高清视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 婷婷丁香在线五月| 人妻夜夜爽99麻豆av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 窝窝影院91人妻| 国产精品免费一区二区三区在线| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 99视频精品全部免费 在线 | 他把我摸到了高潮在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 国内揄拍国产精品人妻在线| www.www免费av| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲av成人av| 高清在线国产一区| 大型黄色视频在线免费观看| 久久久久国内视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 99国产综合亚洲精品| 激情在线观看视频在线高清| 成人18禁在线播放| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产 | 色综合婷婷激情| 美女免费视频网站| tocl精华| 国产精品国产高清国产av| 国产成人福利小说| 亚洲第一电影网av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲国产精品成人综合色| 国产探花在线观看一区二区| av欧美777| 国产淫片久久久久久久久 | 成人av一区二区三区在线看| 两个人视频免费观看高清| 窝窝影院91人妻| 精品国产三级普通话版| 在线免费观看不下载黄p国产 | 欧美日韩精品网址| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久久久国产一级毛片高清牌| av在线蜜桃| 天天躁日日操中文字幕| 国产亚洲精品一区二区www| 丰满人妻一区二区三区视频av | 天堂动漫精品| 成人三级做爰电影| 999久久久国产精品视频| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲成人久久爱视频| 熟女电影av网| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲专区字幕在线| 亚洲精品色激情综合| 久久热在线av| 精华霜和精华液先用哪个| 久久这里只有精品19| 一区二区三区激情视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 老司机深夜福利视频在线观看| 露出奶头的视频| 国产成人av激情在线播放| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久久国产成人精品二区| 国产高潮美女av| 久久午夜亚洲精品久久| 岛国在线观看网站| 90打野战视频偷拍视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产不卡一卡二| 国产视频内射| 大型黄色视频在线免费观看| 久久性视频一级片| 白带黄色成豆腐渣| 国产精品精品国产色婷婷| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 99久久精品热视频| 日本在线视频免费播放| 他把我摸到了高潮在线观看| 天堂影院成人在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产成人aa在线观看| 国产精品综合久久久久久久免费| av女优亚洲男人天堂 | 欧美黄色片欧美黄色片| 国产综合懂色| 精品乱码久久久久久99久播| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产av在哪里看| 天天躁日日操中文字幕| 超碰成人久久| 亚洲,欧美精品.| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲 国产 在线| 国产真实乱freesex| 身体一侧抽搐| 日韩高清综合在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产高清有码在线观看视频| 又黄又粗又硬又大视频| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 女人被狂操c到高潮| 亚洲精品一区av在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲18禁久久av| 色综合欧美亚洲国产小说| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲五月天丁香| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 88av欧美| 男女那种视频在线观看| 在线永久观看黄色视频| 欧美中文综合在线视频| 色在线成人网| 女人被狂操c到高潮| 国产av在哪里看| 免费在线观看亚洲国产| 1000部很黄的大片| 禁无遮挡网站| 日本黄色视频三级网站网址| a在线观看视频网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国内精品美女久久久久久| 99国产综合亚洲精品| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 精品国产乱码久久久久久男人| 91九色精品人成在线观看| 久久久久久大精品| 欧美高清成人免费视频www| 综合色av麻豆| 亚洲av成人一区二区三| 久久久久久大精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 90打野战视频偷拍视频| 国产av麻豆久久久久久久| 国产成人福利小说| 一级毛片女人18水好多| 天堂动漫精品| 男女那种视频在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 一级毛片女人18水好多| 久久中文字幕一级| h日本视频在线播放| 国产精品 国内视频| 国产亚洲av高清不卡| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产高潮美女av| 无人区码免费观看不卡| 亚洲自拍偷在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 黄色女人牲交| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 久久久水蜜桃国产精品网|