• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    中華鱘野生群體及遷地群體的MHCⅠa基因遺傳多樣性變異研究

    2017-03-27 16:25:10肖衎杜合軍趙珣劉雪清劉娟娟
    湖北農(nóng)業(yè)科學 2017年2期
    關(guān)鍵詞:中華鱘遺傳多樣性

    肖衎+杜合軍+趙珣+劉雪清+劉娟娟

    摘要:利用特異性引物MHCⅠf和MHCⅠr,分別從30尾野生中華鱘(Acipenser sinensis)、30尾中華鱘子一代和30尾中華鱘子二代的基因組DNA中擴增MHCⅠa基因的多肽結(jié)合位點(PBR)片段,擴增產(chǎn)物長度為127 bp。中華鱘野生群體30個樣品265個有效克隆中共檢測出50條特異序列(單倍型),中華鱘子一代群體30個樣品的278個有效克隆中共檢測出66條特異序列(單倍型),中華鱘子二代群體30個樣品的257個克隆中檢測出64條特異序列(單倍型)。單倍型Acsi-UAB*0101在3個群體中所占的百分比最高,分別為58.1%、38.8%和60.7%。單倍型分布及群體內(nèi)遺傳多樣性參數(shù)分析表明,中華鱘子一代群體的MHC基因遺傳多樣性最豐富,野生中華鱘群體的MHCⅠa基因遺傳多樣性較低。中華鱘野生群體非同義替代與同義替代比率為1.33,分析表明正向選擇可能是中華鱘MHCⅠa多態(tài)性的主要因素。該研究結(jié)果提供了中華鱘從野生群體到子二代群體MHCⅠa基因的部分遺傳信息和遺傳變異規(guī)律,為中華鱘全人工種群優(yōu)化和繁殖管理提供理論依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:中華鱘(Acipenser sinensis);主要組織相容性復(fù)合體(MHC);遺傳多樣性;遺傳管理

    中圖分類號:S965.215;Q75 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2017)02-0306-08

    中華鱘(Acipenser sinensis)是中國特有的古老大型海河洄游性魚類,目前已處于極度瀕危狀態(tài)。建立人工遷地種群是避免該物種在近期滅絕的一種方式,而人工群體往往面臨家養(yǎng)化問題。主要組織相容性復(fù)合體(Major Histocompatibility Complex,MHC)是脊椎動物中與病原識別及防御、親緣識別和婚配等適應(yīng)性遺傳密切相關(guān)的基因。MHC基因包括兩個典型的亞類和非典型的基因類,即典型的Ⅰ類基因、Ⅱ 類基因和補體類細胞因子等Ⅲ類基因,Ⅰ類基因與識別和遞承內(nèi)源性抗原相關(guān),主要識別病毒類抗原。MHC基因已成為近年來研究的熱點基因,廣泛用于疾病相關(guān)性、分子生態(tài)和進化、保護遺傳、繁殖行為等研究領(lǐng)域[1-7]。

    MHC Ⅰ類與MHC Ⅱ類基因家族中抗原結(jié)合區(qū)域(Peptide binding region,PBR)是其變異最高的區(qū)域。在種群遺傳多樣性研究中,通常采用檢測PBR水平來評價群體的MHC遺傳多態(tài)性水平。近年來,MHC基因多態(tài)性與魚類抗病相關(guān)性也已有較多報道。截至目前,國內(nèi)關(guān)于MHC基因多態(tài)性和不同的等位基因與魚類的抗病力相關(guān)性研究主要集中在牙鲆[8-11]。Jia等[12]對德國鏡鯉MHC Ⅰ、Ⅱ基因多態(tài)性也進行了研究。李雪松等[13]和趙雪錦等[14]對“全紅”和“粉玉”體色甌江彩鯉MHC基因多態(tài)性與抗病性的關(guān)系進行了初步研究。國外對此方面的研究則主要集中在少數(shù)幾種鮭科魚類:如虹鱒、大西洋鮭[15-20]。對于鱘形目魚類,目前僅一篇報道有關(guān)中華鱘和匙吻鱘的MHC Ⅰ基因進化研究[21],在GenBank中有大西洋鱘(Acipenser oxyrinchus)和歐洲大西洋鱘(Acipenser sturio)的兩條MHC Ⅱ基因序列(GenBank序列號分別為AJ515709.1、AJ515708.1)以及西伯利亞鱘(Acipenser baerii)MHC Ⅱ 3條基因序列(JO288773.1、JO288774.1、JO288775.1),對中華鱘MHC基因遺傳多樣性相關(guān)的研究還未見報道。

    本研究擬在MHC Ⅰa PBR座位上對野生中華鱘及蓄養(yǎng)在中國長江三峽集團公司中華鱘研究所人工繁殖的中華鱘子一代種群和子二代種群為研究對象,通過分離和篩選中華鱘MHC Ⅰa基因座位,對野生群體及人工繁殖的中華鱘子一代和子二代3個不同種群的MHC Ⅰa遺傳變異水平和遺傳結(jié)構(gòu)及野生種群與人工繁殖種群的遺傳變異差異進行了分析,為中華鱘全人工種群優(yōu)化和繁殖管理提供科學的依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    試驗魚來自中國長江三峽集團公司中華鱘研究所,16齡以上的中華鱘子一代30尾,親本來源為1980~2000年的野生中華鱘;2009、2010和2011年從葛洲壩采集到的野生中華鱘魚卵孵化的苗種各10尾,共計30尾;2011、2012、2013年中華鱘研究所全人工繁殖的子二代中華鱘幼苗各10尾,共計30尾。分別采集少量鰭條,用無水乙醇固定。

    1.2 引物設(shè)計

    根據(jù)Wang等[21]報道的中華鱘MHC Ⅰa基因cDNA序列,利用Primer6.0設(shè)計中華鱘MHC Ⅰa基因PBR區(qū)特異引物:MHCⅠf(5′-TTTGAGTCCCTTGAGGCG-3′)和MHC Ⅰr(5′-TACAGACGAGCCGTGGAA-3′),目的片段大小為127 bp,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

    1.3 DNA提取和PCR擴增

    將無水乙醇固定保存的鰭條樣品剪碎,于70 ℃烘干使乙醇完全揮發(fā)。Qiagen基因組DNA提取試劑盒依據(jù)其說明書進行基因組DNA提取。1.0% Agarose凝膠電泳檢測后,并檢測其濃度和純度,然后將DNA濃度調(diào)整至200 ng/μL,-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    PCR反應(yīng)總體積為50 μL,正、反引物各0.4 μmol/L,模板DNA為40 ng。PCR反應(yīng)程序:94 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃變性30 s,56 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,35個循環(huán);72 ℃延伸7 min。

    1.4 PCR產(chǎn)物的克隆與測序

    50 μL的PCR產(chǎn)物經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳,切下目的片段,用Omega Gel Extraction Kit回收試劑盒進行回收。將回收產(chǎn)物按約3∶1的比例與pMD19-T(TakaRa)載體進行連接,然后將連接產(chǎn)物5 μL用于轉(zhuǎn)化Ecoli DH5α感受態(tài)細胞。根據(jù)藍白斑原理,篩選白色菌斑,接種至3 mL液體培養(yǎng)基過夜培養(yǎng),用M13+/-引物菌液PCR檢測,鑒定含插入片段的菌株。菌液送至上海英駿生物工程有限公司采用自動測序儀進行雙向測序。

    1.5 序列分析

    獲得的序列通過NCBI中BLAST同源檢索,確認是否為目的片段。用Clustal w進行多序列比較,利用MEGA 7.0軟件分析DNA序列和氨基酸序列的變異位點,并輔以人工校對。利用DNasp 5.1進行基因多態(tài)性分析和選擇壓力分析, 利用MEGA 7.0軟件采用kimura雙參數(shù)模型構(gòu)建鄰接(Neighbor joining,NJ)系統(tǒng)發(fā)育樹。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 PCR序列擴增

    對90尾中華鱘的900個有效克隆進行了測序和分析,經(jīng)過在GenBank中Blast保守區(qū)結(jié)構(gòu)域(Conserved domains)比對后發(fā)現(xiàn)擴增得到的序列位于中華鱘MHC Ⅰ基因α1-2結(jié)構(gòu)域內(nèi),確認其為中華鱘MHC Ⅰa基因PBR區(qū)內(nèi)的片段。序列經(jīng)對位排列和變異檢測后,沒有發(fā)現(xiàn)任何插入、缺失或異常的密碼子。該核苷酸序列長度為127 bp,編碼42個氨基酸。

    2.2 MHC Ⅰa單倍型分離情況

    中華鱘野生群體30個樣品265個有效克隆中共檢測出50條特異序列(單倍型),中華鱘子一代群體30個樣品的278個有效克隆中共檢測出66條特異序列(單倍型),中華鱘子二代群體30個樣品的257個克隆中檢測出64條特異序列(單倍型)。MHC Ⅰa單倍型分離情況見表1。

    2009年野生樣品編號為A1-A10;2010年野生樣品編號為B1-B10;2011年野生樣品編號為C1-C10。2011年子二代樣品編號為D1-D10;2012年子二代樣品編號為E1-E10;2013年子二代樣品編號為F1-F10。子一代樣品編號為G1-G30。

    中華鱘3個群體共有單倍型序列7條,其中Acsi-UAB*0101、Acsi-UAB*0103和Acsi-UAB*0105為主要優(yōu)勢單倍型,Acsi-UAB*0101單倍型數(shù)量占野生群體有效克隆總數(shù)的58.1%,Acsi-UAB*0103單倍型數(shù)量占野生群體有效克隆總數(shù)的10.9%,Acsi-UAB*0105單倍型數(shù)量占野生群體有效克隆總數(shù)的7.6%;Acsi-UAB*0101和Acsi-UAB*0103也是中華鱘子一代群體和子二代群體的優(yōu)勢單倍型,分別占子一代群體總數(shù)的38.8%和31.7%,占子二代群體總數(shù)的60.7%和10.1%。3個主要單倍型在中華鱘3個群體中的分布比例見表2。

    2.3 3個群體序列多態(tài)性和遺傳多樣性

    圖1是中華鱘野生群體50個單倍型的核苷酸序列比對結(jié)果,127 bp的核苷酸序列比對后發(fā)現(xiàn)有53個變異位點,變異率為41.73%。其中轉(zhuǎn)換位點25個,顛換位點18個,既有轉(zhuǎn)換又有顛換的位點10個。圖2是中華鱘野生群體50個單倍型的氨基酸序列比對結(jié)果,翻譯后序列長為42個氨基酸,在23個氨基酸位點發(fā)生替代,氨基酸序列多態(tài)性為54.76%。

    圖3是中華鱘子一代群體66個單倍型的核苷酸序列比對結(jié)果,127 bp的核苷酸序列比對后發(fā)現(xiàn)有64個變異位點,變異率為50.39%。其中轉(zhuǎn)換位點30個,顛換位點24個,既有轉(zhuǎn)換又有顛換的位點10個。圖4是中華鱘野生群體66個單倍型的氨基酸序列比對結(jié)果,翻譯后的42個氨基酸序列在26個氨基酸位點發(fā)生替代,氨基酸序列多態(tài)性為61.90%。

    圖5是中華鱘子二代群體64個單倍型的核苷酸序列比對結(jié)果,127 bp的核苷酸序列比對后發(fā)現(xiàn)有62個變異位點,變異率為48.82%。其中轉(zhuǎn)換位點31個,顛換位點22個,既有轉(zhuǎn)換又有顛換的位點9個。圖6是中華鱘野生群體66個單倍型的氨基酸序列比對結(jié)果,翻譯后的42個氨基酸序列在24個氨基酸位點發(fā)生替代,氨基酸序列多態(tài)性為57.14%。

    對3個中華鱘種群的遺傳多樣性分析顯示(表3):單倍型數(shù)目H最大的為子一代群體(66),其次為子二代群體(64),第三為野生群體(50);單倍型多樣性h最大的為子一代群體(0.937),其次為子二代群體(0.898),第三為野生群體(0.879);核苷酸多樣性指數(shù)π最大的為子一代群體(0.056),其次為野生群體(0.043),第三為子二代群體(0.015)。整體而言,子一代種群的各遺傳多樣性參數(shù)最高;子二代群體單倍型數(shù)和單倍型多樣性較野生群體更高,但是核苷酸多樣性、平均核苷酸差異數(shù)則低于野生群體。

    2.4 同義替代和非同義替代

    利用DNasp 5.0計算中華鱘MHC Ⅰa序列中的同義替代率(dn)和非同義替代率(ds),中華鱘野生群體的dn/ds為1.33,中華鱘子一代群體的dn/ds為1.03,中華鱘子二代群體的dn/ds為1.04(表4)。

    2.5 系統(tǒng)發(fā)育樹

    圖7、圖8和圖9分別是中華鱘3個群體MHC Ⅰ基因基于kimura雙參數(shù)模型構(gòu)建鄰接(Neighbor joining,NJ)系統(tǒng)發(fā)育樹。中華鱘3個群體MHC Ⅰ基因明顯地被分為兩大類群,推測中華鱘 MHC Ⅰ基因可能存在兩個基因座位。由于部分單倍型序列差異較小,導(dǎo)致系統(tǒng)發(fā)育樹某些節(jié)點自展值較低。

    3 討論

    3.1 中華鱘MHC Ⅰ基因多態(tài)性

    目前,有關(guān)魚類MHC基因多態(tài)性的研究較多。龐紀彩等[22]從廣東省 3 個不同羅非魚養(yǎng)殖地區(qū)采集的137尾尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)的個體基因組中擴增出長度為775~796 bp片段的MHC ⅡB核苷酸序列,共檢測出49個單堿基突變位點;張玉喜等[9]對牙鲆84個個體的411個陽性克隆進行測序,發(fā)現(xiàn)有13種不同的MHC ⅡB核苷酸序列,分別編碼13種不同的氨基酸序列。楊玲等[23]從擴增的262 bp的草魚MHC Ⅰ基因核苷酸序列中,發(fā)現(xiàn)50個多態(tài)位點(19%),低于本研究變異率最小的野生群體(41.73%)。本研究中華鱘3個群體90個個體的800個克隆,共發(fā)現(xiàn)有157種不同的MHC Ⅰ核苷酸序列,表現(xiàn)出了豐富的基因多態(tài)性。中華鱘種群MHC Ⅰ基因多態(tài)性比其他養(yǎng)殖魚類種群較高,一方面原因可能是其他養(yǎng)殖魚類生活史較短,人工選育代數(shù)較多導(dǎo)致遺傳多樣性較低,而中華鱘由于生活史較長,人工選育代數(shù)較少;另一方面原因在于中華鱘自身遺傳多倍性組成所致。

    表2顯示了各單倍型在不同群體中的分布頻率,各單倍型在同一種群出現(xiàn)頻率差別很大,Acsi-UAB*0101在野生種群中出現(xiàn)的頻率最高,占58.1%,其次為Acsi-UAB*0103和Acsi-UAB*0105單倍型,它們出現(xiàn)的頻率分別為10.9%、7.55%。相同的單倍型在不同種群中出現(xiàn)的頻率差別也很大,另外大多數(shù)單倍型只出現(xiàn)一次,Acsi-UAB單倍型的高多態(tài)性和低頻率也反應(yīng)出MHC基因的高度變異性[24]。

    3.2 選擇壓力

    MHC基因型的多樣性,一般認為是由雜種優(yōu)勢、分子進化的中性理論和正向選擇引起的[25]。中性理論認為在分子水平上的進化產(chǎn)生的隨機漂移引起選擇性中性或接近中性的突變,是對MHC基因多態(tài)性的可能解釋。中華鱘3個群體的MHC Ⅰa非同義替代率與同義替代率之比均大于1,一般認為非同義替換高于同義替換是由正向選擇作用產(chǎn)生的, 因此可以認為在中華鱘進化過程中,MHC Ⅰa主要受到正向選擇的影響, 而正向選擇正是MHC基因多態(tài)性的發(fā)生機制, 因此產(chǎn)生了眾多的等位基因。MHC蛋白是脊椎動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵分子,其主要功能是識別和結(jié)合抗原,并將抗原呈遞給T淋巴細胞。MHC蛋白識別和結(jié)合抗原的部位位于蛋白頂端的溝槽上,特別是PBR上的氨基酸殘基,因此,MHC基因或基因型對抗原結(jié)合有特異性[26,27]。

    3.3 中華鱘3個群體MHC Ⅰ基因遺傳變異分析

    本研究所用的中華鱘子一代樣品均為1980年至2000年初的野生中華鱘繁殖的后代,年齡結(jié)構(gòu)在16~29齡甚至更長,野生來源樣品為2009、2010和2011年從葛洲壩采集的苗種。子一代中華鱘群體MHC Ⅰ基因遺傳多樣高于野生中華鱘群體,這表明近年來中華鱘野生種群MHC Ⅰ基因遺傳多樣呈現(xiàn)出下降趨勢,其主要原因可能是中華鱘野生群體數(shù)量逐年下降。黃真理[28]建立了利用捕撈數(shù)據(jù)估算其資源量的理論和方法,對葛洲壩截流后的中華鱘資源量進行了初步估算,發(fā)現(xiàn)中華鱘年際資源增長率從1981年的6.92減少到1984年以后的0.793~0.956,1984年中華鱘資源量達到最大,其后逐年減少。危起偉等[29]研究葛洲壩截流24年來野生中華鱘產(chǎn)卵群體結(jié)構(gòu)的變化發(fā)現(xiàn),中華鱘雌雄性比由1981~1983年的1.10∶1降低到1987~1989年的0.63∶1,而后上升到2003~2004年的5.86∶1,野生中華鱘產(chǎn)卵群體性別結(jié)構(gòu)發(fā)生嚴重失衡。野生種群數(shù)量的減少,再加上性比失衡,加速了參與繁殖親魚數(shù)量的減少及種群遺傳多樣性的快速下降。野生中華鱘群體MHC Ⅰ基因遺傳多樣性小于人工種群的另一種可能是采樣年份參與繁殖的野生中華鱘群體相對較小。近年來中華鱘瀕危程度加劇,繁殖種群逐年下降,從而導(dǎo)致參與產(chǎn)卵親魚的數(shù)量比較少,2009、2010和2011年采集的野生中華鱘苗種可能均為少數(shù)親本個體所產(chǎn)生的后代,使得野生種群樣品代表性不足。子一代中華鱘群體MHC Ⅰ基因遺傳多樣性高于子二代中華鱘群體,則表明子二代在傳遞過程中遺傳多樣性有所丟失的現(xiàn)象。因此,在人工種群遺傳管理上,繁殖親魚配對上盡可能選擇MHC基因型不同的個體進行繁殖配對,而且盡可能兼顧到稀有MHC基因型的傳代問題,最大化減少稀有基因型的丟失。

    MHC基因的遺傳多樣性與魚類對疾病的抵抗力密切相關(guān)。Landis等[30]發(fā)現(xiàn)虹鱒的MHC Ⅰb基因在病毒感染后表達量上升;楊玲等[23]對草魚MHC class Ⅰ基因多態(tài)性及其與魚體抗柱形病能力的關(guān)系進行了研究分析,發(fā)現(xiàn)有6種等位基因只出現(xiàn)在抗病個體中,有7種等位基因只出現(xiàn)在染病個體中,顯示MHC Ⅰ基因可以作為分子遺傳標記進行抗病相關(guān)標記輔助育種;胡丹丹[31]研究虹鱒MHC Ⅰ基因第2外顯子等位基因與抗傳染性造血器官壞死?。↖HN)性狀的相關(guān)性發(fā)現(xiàn),4種等位基因與抗病性狀高度相關(guān),3種等位基因與IHN易感性相關(guān),并找出兩種抗性群體中的優(yōu)勢等位基因。目前,本研究僅停留在群體遺傳多樣性層面,更深入研究將在個體水平上探索抗病性個體及疾病易感個體與某種類型MHC單倍型連鎖關(guān)系,將更有利于中華鱘人工種群管理和繁殖對策制定。

    參考文獻:

    [1] FROESCHKE G,SOMMER S.MHC class II DRB variability and parasite load in the striped mouse (Rhabdomys pumilio) in the Southern Kalahari[J].Mol Biol Evol,2005,22:1254-1259.

    [2] HEDRICK P W,KIM T J,PARKER K M.Parasite resistance and genetic variation in the endangered Gila topminnow[J].Animal Conservation,2001,4:103-109.

    [3] ARKUSH K D,GIESE A R,MENDONCA H L,et al.Resistance to three pathogens in the endangered winter-run Chinook salmon(Oncorhynchus tshawytscha):Effects of inbreeding and major histocompatibility complex genotypes[J].Can J Fish Aquat Sci,2002,59:966-975.

    [4] MEYER-LUCHT Y,SOMMER S. MHC diversity and the association to nematode parasitism in the yellow-necked mouse (Apodemus flavicollis)[J].Molecular Ecology,2005,14:2233-2243.

    [5] SOMMER S.The importance of immune gene variability (MHC)in evolutionary ecology and conservation[J].Frontiers in Zoology,2005,2:1-18.

    [6] EDWARDS S V,HEDRICK P W. Evolution and ecology of MHC molecules:From genomics to sexual selection[J].Trends in Ecology & Evolution,1998.13:305-311.

    [7] POTTS W K,MANNING C J,WAKELAND E K. Mating patterns in seminatural populations of mice influenced by MHC genotype[J].Nature,1991,352:619-621.

    [8] 徐建勇,陳松林,畢金貞.野生抗病牙鲆MHC IIB內(nèi)含子1和外顯子2序列多態(tài)性[J].中國水產(chǎn)科學,2008,12(4):593-599.

    [9] 張玉喜,陳松林.牙鲆MHC IIB基因多態(tài)性及其與魚體抗病力關(guān)系的研究[J].水產(chǎn)學報,2006,30(5):633-639.

    [10] ZHANG Y X,CHEN S L,LIU Y G,et al. Major histocompatibility complex class IIB allele polymorphism and its association with resistance/susceptibility to Vibrio anguillarum in Japanese Flounder(Paralichthys olivaceus)[J].Marine Biotechnology,2006(8):600-610.

    [11] XU T J,CHEN S L,ZHANG Y X. MHC class IIα gene polymorphism and its association with resistance/susceptibility to Vibrio anguillarum in Japanese flounder(Paralichthys olivaceus)[J].Developmental and Comparative Immunology,2010,34:1042-1050.

    [12] JIA Z Y,CHI X F,LI C T,et al. Development of MHC classI and II B primers in common carp and its molecular characterization[J].Biochem Genet,2010,48:690-695.

    [13] 李雪松,劉至治,趙雪錦,等.“全紅”體色甌江彩鯉 MHC-DAB 基因多態(tài)性及其與魚體抗病力關(guān)系的分析[J].水產(chǎn)學報,2011, 9(35):1294-1301.

    [14] 趙雪錦,劉至治,李雪松,等.“粉玉”體色甌江彩鯉MHC class II B基因多態(tài)性及其與魚體抗病力的關(guān)系[J].中國水產(chǎn)科學, 2012,19(3):399-407.

    [15] PALTI Y,NICHOLS K M,WALLER K I,et al. Association between DNA polymorphism tightly linked to MHC class II genes and IHN virus resistance in backcrosses of rainbow and cutthroat trout[J].Aquac,2001,194(3-4):283-289.

    [16] LOHM J,GRAHN M,LANGEFORS A,et al. Experimental evidence for major histocompatibility complex-allele-specific resistance to a bacterial infection[J].Proceedings Royal Society,2002,269:2029-2033.

    [17] GLOVER K A,GRIMHOLT U,BAKKE H G,et al. Major histocompatibility complex(MHC) variation and susceptibility to the sea louse Lepeophtheirus salmonis in Atlantic salmon Salmo salar[J].Dis Aquat Organ,2007,76(1):57-65.

    [18] OZAKI A,SAKAMOTO T,KHOO S K,et al. Quantitative trait loci (QTLs) associated with resistance/susceptibility to infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) in rainbow trout (Oncorkynckus mykiss)[J].Mol Genet Genomics,2001,265:23-31.

    [19] WYNNE J W,COOK M T,NOWAK B F,et al. Major histocompatibility polymorphism associated with resistance towards amoebic gill disease in Atlantic salmon (Salmo salar L.)[J].Fish & Shellfish Immunology,2007,22:707-717.

    [20] KJ?覫GLUM S,LARSEN S,BAKKE H G,et al. How specific MHC class I and II combinations affect disease resistance against salmon anaemia in Atlantic salmon(Salmo salar)[J].Fish & Shellfish Immunology,2006,21:431-441.

    [21] WANG D,ZHONG L,WEI Q,et al. Evolution of MHC class I genes in two ancient fish,paddlefish(Polyodon spathula) and Chinese sturgeon(Acipenser sinensis)[J].FEBS Letters,2010, 584:3331-3339.

    [22] 龐紀彩,高風英,盧邁新,等.廣東養(yǎng)殖尼羅羅非魚3個不同群體MHC ⅡB基因序列多態(tài)性和遺傳分化[J].基因組學與應(yīng)用生物學,2014,33(2):299-306.

    [23] 楊 玲,孟慶磊,張龍崗,等.草魚MHC class I基因多態(tài)性及其與魚體抗柱形病能力關(guān)系分析[J].長江大學學報(自然科學版),2013,10(17):42-47.

    [24] 徐田軍,陳松林.牙鲆MHC-DAA結(jié)構(gòu)及其等位基因多態(tài)性[J].遺傳,2009,31(10):1020-1028

    [25] PARHAM P,OHTA T. Population biology of antigen presentation by MHC class I molecules[J]. Science,1996,272(5258):67-74.

    [26] SILVER M L, GUO H C, STROMINGER J L, et al. Atomic structure of a human MHC molecule Presenting an influenza virus peptide[J]. Nature,1992,360:367-369

    [27] GUO H C,JARDETZKY T S,GARRETT T P J,et al.Different length peptides bind to HLA-Aw68 similarly at their ends but bulge out in the middle[J].Nature,1992,360:364-366.

    [28] 黃真理.利用捕撈數(shù)據(jù)估算長江中華鱘資源量的新方法[J].科技導(dǎo)報,2013,31(13):18-22.

    [29] 危起偉,陳細華,楊德國,等.葛洲壩截流24年來中華鱘產(chǎn)卵群體結(jié)構(gòu)的變化[J].中國水產(chǎn)科學,2005,15(4):452-457.

    [30] LANDIS E D,PURCELL M K,THORGAARD G H,et al. Transcriptional profiling of MHC class I genes in rainbow trout infected with infectious hematopoietic necrosis virus[J]. Molecular Immunology,2008,45:1646-1657.

    [31] 胡丹丹.虹鱒MHC Ⅱ類A基因(DAA)多態(tài)性與抗IHN相關(guān)性分析[D].蘭州:甘肅農(nóng)業(yè)大學,2013.

    猜你喜歡
    中華鱘遺傳多樣性
    探秘:中華鱘的
    中國三峽(2017年4期)2017-06-06 10:44:23
    葛洲壩下:守護中華鱘繁衍的希望
    中國三峽(2017年4期)2017-06-06 10:44:22
    聚焦 2017中華鱘放流
    中國三峽(2017年4期)2017-06-06 10:44:22
    中華鱘的保護之道
    中國三峽(2016年5期)2017-01-15 13:58:47
    放鱘記 關(guān)注第58次長江三峽中華鱘放流
    中國三峽(2016年5期)2017-01-15 13:58:46
    茄子種質(zhì)資源農(nóng)藝性狀遺傳多樣性分析
    淺析田間水稻紋枯病抗性鑒定體系的確立與完善
    西藏野核桃的表型特征及其保育措施
    水稻紋枯病抗性鑒定體系的確立與遺傳多樣性研究
    楊梅種質(zhì)資源遺傳多樣性研究進展
    舔av片在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲成人久久性| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 1024手机看黄色片| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 成人国产综合亚洲| 欧美av亚洲av综合av国产av| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产av一区在线观看免费| 国产亚洲精品av在线| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产黄a三级三级三级人| 日韩欧美精品免费久久 | 亚洲人成网站在线播| 国产熟女xx| 成人国产一区最新在线观看| 国产精品三级大全| 国产麻豆成人av免费视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久香蕉精品热| 久久久成人免费电影| 久久久久久久精品吃奶| 精品久久久久久久久久久久久| 婷婷亚洲欧美| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲国产精品成人综合色| 免费在线观看亚洲国产| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久人人精品亚洲av| 最近视频中文字幕2019在线8| 无人区码免费观看不卡| netflix在线观看网站| 亚洲 国产 在线| 国产成人福利小说| aaaaa片日本免费| 成人精品一区二区免费| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 制服丝袜大香蕉在线| 两人在一起打扑克的视频| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 成年女人毛片免费观看观看9| 看黄色毛片网站| 大型黄色视频在线免费观看| 久久久久久久午夜电影| 国产美女午夜福利| 色综合婷婷激情| 国产爱豆传媒在线观看| 国产三级黄色录像| 亚洲人与动物交配视频| 在线观看舔阴道视频| 国产男靠女视频免费网站| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产美女午夜福利| 搞女人的毛片| 少妇丰满av| 亚洲国产精品成人综合色| 内地一区二区视频在线| 日本黄色视频三级网站网址| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲国产色片| 91九色精品人成在线观看| 国产野战对白在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 精品午夜福利视频在线观看一区| 精品福利观看| 啦啦啦免费观看视频1| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲午夜理论影院| 看黄色毛片网站| 欧美日韩一级在线毛片| 国产中年淑女户外野战色| 欧美3d第一页| 中文字幕久久专区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产精品综合久久久久久久免费| 嫩草影视91久久| 久久人人精品亚洲av| 91麻豆精品激情在线观看国产| 高清日韩中文字幕在线| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 午夜福利欧美成人| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产精品av视频在线免费观看| 一二三四社区在线视频社区8| 舔av片在线| 成年人黄色毛片网站| svipshipincom国产片| 国产激情欧美一区二区| 欧美最新免费一区二区三区 | 欧美一级a爱片免费观看看| 免费观看精品视频网站| 亚洲乱码一区二区免费版| 欧美一区二区亚洲| 国产高清videossex| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲一区高清亚洲精品| 又紧又爽又黄一区二区| 色综合站精品国产| 国产单亲对白刺激| 又紧又爽又黄一区二区| 久久久国产精品麻豆| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 午夜亚洲福利在线播放| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲精品亚洲一区二区| 观看美女的网站| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲无线在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产精品久久电影中文字幕| 日韩欧美 国产精品| 久久久久久久午夜电影| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 免费av不卡在线播放| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲欧美激情综合另类| 久久香蕉精品热| 亚洲内射少妇av| av片东京热男人的天堂| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲av免费在线观看| 在线观看日韩欧美| 中文资源天堂在线| 久久久久久久久大av| av女优亚洲男人天堂| 9191精品国产免费久久| 精品国产美女av久久久久小说| 国产亚洲av嫩草精品影院| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩欧美精品v在线| 亚洲黑人精品在线| 国产激情欧美一区二区| 国产真人三级小视频在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 成人一区二区视频在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲五月天丁香| 久久久精品大字幕| 国产av在哪里看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 悠悠久久av| 超碰av人人做人人爽久久 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲第一电影网av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久亚洲真实| 久久精品国产综合久久久| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产亚洲av嫩草精品影院| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久精品国产自在天天线| 日本一二三区视频观看| 一级毛片高清免费大全| 国产精品久久久人人做人人爽| 99精品久久久久人妻精品| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久99热这里只有精品18| 国产欧美日韩一区二区精品| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 91麻豆av在线| 午夜福利高清视频| 久久亚洲真实| 亚洲成av人片在线播放无| 少妇丰满av| 亚洲欧美日韩高清专用| 成人国产综合亚洲| 中文字幕熟女人妻在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 麻豆久久精品国产亚洲av| 极品教师在线免费播放| 九色国产91popny在线| 久久精品人妻少妇| 久久久久九九精品影院| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 淫秽高清视频在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 日韩人妻高清精品专区| 黄片大片在线免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产一区二区在线av高清观看| 精品日产1卡2卡| 不卡一级毛片| 老鸭窝网址在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 美女大奶头视频| 一本一本综合久久| 国产精品99久久99久久久不卡| АⅤ资源中文在线天堂| 国产精品 欧美亚洲| 在线观看av片永久免费下载| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产探花极品一区二区| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲avbb在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲av美国av| 校园春色视频在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 99在线视频只有这里精品首页| 国产精品野战在线观看| 此物有八面人人有两片| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲最大成人中文| 亚洲乱码一区二区免费版| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲人与动物交配视频| 三级毛片av免费| 欧美性感艳星| 十八禁人妻一区二区| 国产亚洲欧美98| 亚洲无线观看免费| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| av欧美777| 69av精品久久久久久| 狂野欧美激情性xxxx| av专区在线播放| av在线蜜桃| 色综合亚洲欧美另类图片| 18美女黄网站色大片免费观看| 黄色片一级片一级黄色片| 丁香六月欧美| 国产精品1区2区在线观看.| 一级a爱片免费观看的视频| 51午夜福利影视在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产不卡一卡二| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美日韩综合久久久久久 | 又紧又爽又黄一区二区| 欧美激情在线99| 看黄色毛片网站| 国产精品免费一区二区三区在线| 日本在线视频免费播放| eeuss影院久久| 国产麻豆成人av免费视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 久久精品国产亚洲av涩爱 | x7x7x7水蜜桃| 12—13女人毛片做爰片一| 最近最新免费中文字幕在线| 国产熟女xx| 哪里可以看免费的av片| 真实男女啪啪啪动态图| av欧美777| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 午夜两性在线视频| 精品久久久久久久末码| 国产乱人伦免费视频| 国产精品女同一区二区软件 | 国产 一区 欧美 日韩| 五月伊人婷婷丁香| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产高清视频在线播放一区| 免费看十八禁软件| 波野结衣二区三区在线 | 99久久精品一区二区三区| 91麻豆精品激情在线观看国产| 中出人妻视频一区二区| 国产野战对白在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 国产高清视频在线播放一区| 男人的好看免费观看在线视频| 日韩国内少妇激情av| 亚洲无线在线观看| 成人精品一区二区免费| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 免费高清视频大片| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产免费av片在线观看野外av| 久久草成人影院| 国产精品影院久久| 精品无人区乱码1区二区| 一区二区三区激情视频| 最后的刺客免费高清国语| 国产毛片a区久久久久| 嫩草影院精品99| 国产精品电影一区二区三区| 五月玫瑰六月丁香| 国产色爽女视频免费观看| 在线观看一区二区三区| 91麻豆av在线| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产高潮美女av| 美女cb高潮喷水在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 香蕉丝袜av| 在线国产一区二区在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 免费在线观看日本一区| 久久中文看片网| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 色综合欧美亚洲国产小说| 91字幕亚洲| tocl精华| 免费在线观看影片大全网站| tocl精华| 91久久精品电影网| 精品熟女少妇八av免费久了| 少妇高潮的动态图| 99热只有精品国产| 亚洲成av人片免费观看| 99在线人妻在线中文字幕| 国产单亲对白刺激| av天堂中文字幕网| 有码 亚洲区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美不卡视频在线免费观看| 丰满人妻一区二区三区视频av | 久久久国产成人免费| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久久久久久大av| 亚洲成a人片在线一区二区| 动漫黄色视频在线观看| 两个人视频免费观看高清| 欧美最黄视频在线播放免费| 欧美在线黄色| 午夜激情福利司机影院| 日本黄色视频三级网站网址| 69av精品久久久久久| xxx96com| 亚洲乱码一区二区免费版| 一区二区三区免费毛片| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 欧美bdsm另类| 麻豆国产av国片精品| 成人国产综合亚洲| 国产精品日韩av在线免费观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲七黄色美女视频| 国产综合懂色| 亚洲精品在线观看二区| 国产成人影院久久av| 免费看光身美女| 在线观看日韩欧美| 欧美日韩国产亚洲二区| 深夜精品福利| 亚洲不卡免费看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲欧美日韩高清专用| 国语自产精品视频在线第100页| 有码 亚洲区| 国产亚洲欧美98| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久久久大精品| av黄色大香蕉| 国产免费一级a男人的天堂| 欧美日韩乱码在线| 中文在线观看免费www的网站| 成人国产一区最新在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲人与动物交配视频| 99精品在免费线老司机午夜| 日韩欧美国产一区二区入口| 有码 亚洲区| bbb黄色大片| 真人做人爱边吃奶动态| 午夜福利在线在线| 哪里可以看免费的av片| 欧美成人免费av一区二区三区| 网址你懂的国产日韩在线| 香蕉av资源在线| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影 | 国产精品一及| 性色avwww在线观看| 中文资源天堂在线| 久久精品国产清高在天天线| 国产97色在线日韩免费| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 免费av毛片视频| xxxwww97欧美| 白带黄色成豆腐渣| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产成人影院久久av| 香蕉久久夜色| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 丝袜美腿在线中文| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲精品成人久久久久久| 欧美色视频一区免费| 一级毛片高清免费大全| 欧美日本亚洲视频在线播放| 午夜福利视频1000在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| av视频在线观看入口| 国产乱人伦免费视频| 最后的刺客免费高清国语| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 好男人在线观看高清免费视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 可以在线观看的亚洲视频| 午夜福利在线在线| 成人亚洲精品av一区二区| 国产免费av片在线观看野外av| 国产 一区 欧美 日韩| 免费高清视频大片| 欧美日本视频| 欧美一区二区亚洲| 99久久九九国产精品国产免费| 18美女黄网站色大片免费观看| 精品国产亚洲在线| 在线免费观看不下载黄p国产 | 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲人与动物交配视频| 午夜福利18| 老司机福利观看| 国产精品久久久久久精品电影| 国产久久久一区二区三区| 18禁国产床啪视频网站| 国产伦精品一区二区三区四那| 露出奶头的视频| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 美女黄网站色视频| 中文字幕高清在线视频| 69人妻影院| 欧美最新免费一区二区三区 | 午夜精品久久久久久毛片777| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲成a人片在线一区二区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 日韩欧美精品v在线| 欧美中文综合在线视频| 一进一出好大好爽视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产黄色小视频在线观看| 精品福利观看| 成年人黄色毛片网站| 此物有八面人人有两片| 校园春色视频在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 色综合婷婷激情| 亚洲av熟女| 成人特级黄色片久久久久久久| 成人性生交大片免费视频hd| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产在视频线在精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产成人av教育| 日韩欧美精品v在线| www.熟女人妻精品国产| 国产三级黄色录像| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 老汉色∧v一级毛片| 在线免费观看不下载黄p国产 | 亚洲美女黄片视频| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日本 欧美在线| 一区二区三区高清视频在线| 99久国产av精品| 国产欧美日韩一区二区三| 脱女人内裤的视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 动漫黄色视频在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 精品国内亚洲2022精品成人| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲电影在线观看av| 99热6这里只有精品| avwww免费| 一级毛片女人18水好多| 天美传媒精品一区二区| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 一级黄片播放器| 成人av一区二区三区在线看| 高清毛片免费观看视频网站| 国产熟女xx| 亚洲内射少妇av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久人人精品亚洲av| 在线看三级毛片| 欧美+亚洲+日韩+国产| 99在线视频只有这里精品首页| 国内精品美女久久久久久| 亚洲欧美日韩高清专用| 我的老师免费观看完整版| 久久性视频一级片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久精品国产自在天天线| 91麻豆av在线| 久久亚洲精品不卡| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 色尼玛亚洲综合影院| www.色视频.com| 99久久成人亚洲精品观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 午夜精品在线福利| 国产成人系列免费观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 制服丝袜大香蕉在线| 久久精品91蜜桃| 欧美3d第一页| 亚洲18禁久久av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲国产精品sss在线观看| 男女那种视频在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 成人鲁丝片一二三区免费| 日韩欧美三级三区| 欧美+日韩+精品| 黄片大片在线免费观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 深爱激情五月婷婷| 亚洲电影在线观看av| 性欧美人与动物交配| 日本精品一区二区三区蜜桃| 伊人久久精品亚洲午夜| 久久久色成人| 国产一区在线观看成人免费| 窝窝影院91人妻| 久久亚洲真实| 欧美又色又爽又黄视频| 日韩欧美国产在线观看| 超碰av人人做人人爽久久 | 日韩av在线大香蕉| 久久精品人妻少妇| 天堂影院成人在线观看| av在线天堂中文字幕| 欧美区成人在线视频| 美女高潮的动态| 88av欧美| 色老头精品视频在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 日韩欧美在线乱码| 男插女下体视频免费在线播放| 午夜影院日韩av| 天堂网av新在线| 欧美zozozo另类| 嫩草影视91久久| 制服人妻中文乱码| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久伊人香网站| av在线天堂中文字幕| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 特大巨黑吊av在线直播| 国产三级黄色录像| 欧美区成人在线视频| 国产单亲对白刺激| 有码 亚洲区| 小说图片视频综合网站| 国产成人欧美在线观看| 少妇的逼好多水| 欧美最新免费一区二区三区 | 午夜久久久久精精品| 欧美日韩乱码在线| 国产精品综合久久久久久久免费| 日韩欧美在线二视频| 极品教师在线免费播放| 麻豆久久精品国产亚洲av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 最近视频中文字幕2019在线8| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 真实男女啪啪啪动态图| 国产高清有码在线观看视频| 国内精品美女久久久久久| 日韩欧美在线二视频| 国产精品女同一区二区软件 | 国产精品久久久久久久电影 | 老汉色av国产亚洲站长工具| 成人国产综合亚洲| 久久久久性生活片| 长腿黑丝高跟| 麻豆成人av在线观看| 少妇的丰满在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产一区二区在线av高清观看| 99视频精品全部免费 在线| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 成人特级av手机在线观看| 精品国产亚洲在线| 欧美中文综合在线视频| 超碰av人人做人人爽久久 | 国产亚洲av嫩草精品影院| 午夜a级毛片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 丁香欧美五月|