非小細(xì)胞肺癌組織中程序性死亡受體配體表達(dá)與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞浸潤(rùn)的相關(guān)性

陳麗萍 李 琛

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北 張家口 075000)

非小細(xì)胞肺癌組織中程序性死亡受體配體表達(dá)與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞浸潤(rùn)的相關(guān)性

陳麗萍 李 琛

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北 張家口 075000)

目的 探討非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中程序性死亡受體配體(PD-L)1與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)浸潤(rùn)的相關(guān)性。方法 NSCLC患者79例，檢測(cè)癌組織及癌旁組織中PD-L1水平和Treg浸潤(rùn)情況，分析PD-L1水平和Treg浸潤(rùn)的相關(guān)關(guān)系，并觀察其與臨床病理的關(guān)系。結(jié)果 癌組織中PD-L1高表達(dá)和Treg高浸潤(rùn)顯著高于癌旁組織(P<0.05)；Ⅰ期癌組織中PD-L1高表達(dá)和Treg高浸潤(rùn)顯著高于Ⅱ期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移肺癌組織中PD-L1高表達(dá)和Treg高浸潤(rùn)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)；癌組織中PD-L1高水平與Treg高浸潤(rùn)存在正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。結(jié)論 NSCLC組織中PD-L1高表達(dá)和Treg高浸潤(rùn)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分期有關(guān)，且PD-L1高表達(dá)與Treg高浸潤(rùn)呈正相關(guān)關(guān)系。

程序性死亡受體配體1；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；非小細(xì)胞肺癌

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的發(fā)病與免疫功能異常和基因缺失或突變有關(guān)。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是近年來被發(fā)現(xiàn)的一種T細(xì)胞亞群，對(duì)免疫應(yīng)答和免疫穩(wěn)定方面均具有重要作用，翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子P3(Foxp3)是其標(biāo)志性分子之一。研究顯示〔1〕，Treg水平升高對(duì)肺癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用，且與肺癌預(yù)后具有較大關(guān)系。程序性死亡受體(PD)配體(PD-L)1是B7家族的成員之一，是一種負(fù)性調(diào)節(jié)因子。在丙肝患者細(xì)胞中PD-L1表達(dá)與Treg增殖有關(guān)，因此推測(cè)PD-L1高表達(dá)與NSCLC 有關(guān)。然而目前臨床關(guān)于Treg浸潤(rùn)和PD-L1表達(dá)與NSCLC的關(guān)系研究甚少。本研究擬分析NSCLC組織及癌旁組織中Treg浸潤(rùn)和PD-L1的表達(dá)情況及其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年12月至2015年12月我院收治的79例NSCLC患者的手術(shù)癌組織及癌旁組織，患者均經(jīng)病理及細(xì)胞學(xué)確診。排除術(shù)前經(jīng)放療或化療者、存在自身免疫性疾病者或嚴(yán)重感染者。其中男44例，女35例，年齡48～80〔平均(65.4±4.2)〕歲，根據(jù)TNM分期：Ⅰ期47例，Ⅱ期32例；腫瘤類型：鱗癌34例，腺癌35例，大細(xì)胞肺癌10例。研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法 試劑：兔抗人多克隆抗體PD-L1(生產(chǎn)批次：20131128)和Foxp3(生產(chǎn)批次：20131109)由Abcam公司提供，免疫組化SP試劑(生產(chǎn)批次：20131019)、蘇木精(生產(chǎn)批次：20131025)均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。方法：將手術(shù)標(biāo)本以10%的甲醛固定，石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片，脫蠟，分別將兔抗人多克隆抗體PD-L1和Foxp3(Treg)加入，置于4℃環(huán)境中過夜。然后分別進(jìn)行洗脫、加入二抗，最后進(jìn)行蘇木精染色。然后進(jìn)行計(jì)數(shù)，先于低倍鏡視野下選取陽(yáng)性細(xì)胞密集區(qū)域(5個(gè)細(xì)胞左右)，然后再行高倍鏡觀察，每個(gè)標(biāo)本均記錄5個(gè)視野。PD-L1染色陽(yáng)性：細(xì)胞質(zhì)或(和)胞膜出現(xiàn)棕褐色或棕黃色；Foxp3(Treg)染色陽(yáng)性：腫瘤細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核呈棕褐色。PD-L1染色高表達(dá)：以陽(yáng)性率20%為界限，高于20%表示高表達(dá)；Foxp3(Treg)染色：得到陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)求平均值或者中位數(shù)，超過中位數(shù)或平均數(shù)表示高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2或Fisher確切概率法檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 癌組織和癌旁組織比較 癌組織中PD-L1高表達(dá)42例，癌旁組織中PD-L1高表達(dá)3例；癌組織中Treg高浸潤(rùn)40例，癌旁組織Treg高浸潤(rùn)4例，比較差異顯著(P<0.05)。

2.2 PD-L1表達(dá)、Treg浸潤(rùn)與臨床病理關(guān)系 Ⅱ期癌組織中PD-L1高表達(dá)和Treg高浸潤(rùn)顯著高于Ⅰ期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移肺癌組織中PD-L1高表達(dá)和Treg高浸潤(rùn)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)。見表1。

2.3 相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析顯示：癌組織中PD-L1高水平與Treg高浸潤(rùn)存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.762，P=0.007)。

表1 PD-L1表達(dá)、Treg浸潤(rùn)與臨床病理關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

NSCLC是肺癌的一種，主要包括腺癌、鱗癌、大細(xì)胞癌，與小細(xì)胞肺癌比較，NSCLC擴(kuò)散較慢，轉(zhuǎn)移也相對(duì)較晚。目前，NSCLC發(fā)病原因和發(fā)病機(jī)制尚不確切，主要有以下觀點(diǎn)〔2〕：NSCLC細(xì)胞是屬于異質(zhì)性惡性細(xì)胞，其形成與外源性毒素、環(huán)境等因素有關(guān)，主要包括工業(yè)污染、吸煙，其中吸煙是最重要的危險(xiǎn)因素；NSCLC形成還與特定促癌基因活性增加、抑癌基因活性降低有關(guān)。且研究顯示，NSCLC發(fā)生和發(fā)展還與機(jī)體免疫有關(guān)，且以T細(xì)胞免疫最重要。

Treg對(duì)機(jī)體自身免疫反應(yīng)性T細(xì)胞亞群、對(duì)T細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子產(chǎn)生均具有調(diào)節(jié)作用。研究顯示〔3〕，Treg對(duì)荷瘤小鼠抗腫瘤反應(yīng)具有抑制作用，提示Treg浸潤(rùn)與腫瘤發(fā)生發(fā)展具有較大關(guān)系。腫瘤細(xì)胞逃逸指腫瘤細(xì)胞可以通過免疫系統(tǒng)識(shí)別和攻擊，進(jìn)而在體內(nèi)生產(chǎn)和增殖。Treg增殖在腫瘤細(xì)胞逃逸中發(fā)揮較大作用，對(duì)免疫功能具有抑制作用，并且調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答產(chǎn)生細(xì)胞因子，抑制對(duì)抗腫瘤作用。推測(cè)Treg浸潤(rùn)可能通過抑制免疫功能對(duì)腫瘤的監(jiān)測(cè)和殺滅，進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本研究結(jié)果的具體作用機(jī)制尚不確切，可能與多種因素共同作用有關(guān)，多種因素可以促使腫瘤微環(huán)境發(fā)生改變，進(jìn)而引起腫瘤負(fù)性刺激因子和促進(jìn)因子失調(diào)，進(jìn)而誘導(dǎo)Treg大量產(chǎn)生〔4〕。除此之外，NSCLC患者外周血會(huì)發(fā)生改變，且分期不同及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移變化也不同，進(jìn)而致使外周血促進(jìn)未成熟樹突細(xì)胞誘導(dǎo)Treg生成也存在差異。PD-L1是現(xiàn)階段研究比較成熟的B7家族成員之一，是一種負(fù)性共刺激分子。有研究顯示，PD-L1通路和Treg增殖存在較大關(guān)系〔5〕。且有研究顯示，丙型肝炎患者樹突細(xì)胞對(duì)Treg具有一定刺激作用，在一定程度上可以抑制丙型肝炎病毒特異性的T細(xì)胞，而這種抑制作用與PD-1/PD-L1通路存在較大關(guān)系〔6〕。而惡性腫瘤和轉(zhuǎn)移性腫瘤中會(huì)存在較多Treg浸潤(rùn)，而Treg浸潤(rùn)同樣與PD-1/PD-L1通路有密切關(guān)系。推測(cè)PD-1/PD-L1可以在一定程度上誘導(dǎo)Treg產(chǎn)生，并可以在一定程度上調(diào)節(jié)免疫功能，進(jìn)而對(duì)腫瘤免疫進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)，降低對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺滅作用〔7〕。本研究說明Treg高浸潤(rùn)確實(shí)與NSCLC有關(guān)，且與臨床病理特點(diǎn)有關(guān)，其原因?yàn)椤?〕：Treg高浸潤(rùn)會(huì)對(duì)機(jī)體免疫功能產(chǎn)生影響，進(jìn)而降低機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫作用，致使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生，而對(duì)腫瘤監(jiān)測(cè)作用降低，也會(huì)增加腫瘤轉(zhuǎn)移能力，導(dǎo)致腫瘤分期較高和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。癌組織中PD-L1高水平與Treg高浸潤(rùn)存在正相關(guān)關(guān)系，分析其原因可能為：PD-L1水平較高時(shí)，PD-1/PD-L1通路也在一定程度上表達(dá)活躍，而PD-1/PD-L1通路對(duì)Treg浸潤(rùn)有關(guān)，進(jìn)而導(dǎo)致Treg高浸潤(rùn)。

1 劉衛(wèi)青,代榮欽,郭志松,等.缺氧誘導(dǎo)因子-1α、缺氧誘導(dǎo)因子-2α在非小細(xì)胞肺癌腫瘤組織中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2015,32(11):2854-6.

2 Ikeda S,Okamoto T,Okano S,etal.PD-L1 Is Upregulated by simultaneous amplification of the PD-L1 and JAK2 genes in non-small cell lung cancer〔J〕.J Thorac Oncol,2016；11(1):62-71.

3 李 琳,王 暉,杜 俊,等.雌激素受體α和β在老年非小細(xì)胞肺癌患者的表達(dá)及其與臨床病理關(guān)系〔J〕.中華老年醫(yī)學(xué)雜志,2013；32(3):271-4.

4 Leng C,Li Y,Qin J,etal.Relationship between expression of PD-L1 and PD-L2 on esophageal squamous cell carcinoma and the antitumor effects of CD8+T cells〔J〕.Oncol Rep,2016；35(2):699-708.

5 龍 日,劉映峰,嚴(yán)全能,等.JNK通路介導(dǎo)LPS誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PD-L1表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2013；13(5):546-8,569.

6 張 健,王昕升,王寶英,等.肺結(jié)核患者血中CD95與PD-1,PD-L1的檢測(cè)與分析〔J〕.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013；28(1):103-5.

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8 馬麗莉,李水仙,畢志彬.PD-L1和PD-L2在食管鱗狀細(xì)胞癌表達(dá)增強(qiáng)并與浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有關(guān)〔J〕.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2015；31(8):1112-4.

〔2015-12-09修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

陳麗萍(1984-)，女，碩士，住院醫(yī)師，主要從事呼吸腫瘤方面的研究。

R73

A

1005-9202(2017)04-0903-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.04.053