張星和+符翠麗
(保山學(xué)院 云南 保山 678000)
摘 要:探討了利用酶解法從黑木耳中提取多糖的不同因素的影響,通過(guò)正交試驗(yàn)確立了酶法提取多糖的最佳條件為:酶解時(shí)間60min,溫度50 ℃,pH為5.0,料液比1::80,反復(fù)提取三次,多糖提取率達(dá)到15.64%。
關(guān)鍵詞:酶法;黑木耳;正交設(shè)計(jì)
黑木耳是我國(guó)著名的藥用和食用的膠質(zhì)真菌,是木耳系真菌類擔(dān)子菌綱。經(jīng)常食用木耳, 可益氣養(yǎng)神、滋陰潤(rùn)燥,增強(qiáng)抵抗力。多糖是一類具有廣泛活性的生物大分子,又叫多聚糖。多糖不僅僅是人體生命必需的成分,也存在于一切細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)中,參與多種生命活動(dòng)。木耳多糖是黑木耳的活性成分之一,其生物活性越來(lái)越受到重視[1]。多糖的提取方法有很多種。水浸提法操作簡(jiǎn)單,可是耗能多,耗時(shí)長(zhǎng),提取效率較低[2]。本文通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)黑木耳多糖酶法提取的條件進(jìn)行了優(yōu)化。
1.材料與方法
1.1 材料與設(shè)備
黑木耳購(gòu)于保山金方超市;纖維素酶(BR,30U/mg,上海博奧生物科技有限公司);其他試劑均為分析純。
HH-S26s數(shù)顯恒溫水浴鍋;GUO HUA 800低數(shù)離心機(jī); JH-14-07 A-14-07-161型可見(jiàn)分光光度計(jì);DFT-200型手提式高速萬(wàn)能粉碎機(jī);DHG-9075A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱等。
1.2 多糖含量的測(cè)定
目前,多糖的測(cè)定方法主要有蒽酮硫酸法和苯酚-硫酸法[3-4],本實(shí)驗(yàn)采用第二種方法,以干燥至恒重的葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品。
1.3 木耳多糖的制備
準(zhǔn)確稱取過(guò)60目篩的木耳粉末若干于圓底燒瓶中,加少量蒸餾水浸泡24h,加入一定量的酶溶液并調(diào)pH值,放入恒溫水浴鍋中酶解一段時(shí)間后取出,離心得上清液。再將剩余沉淀重復(fù)酶解兩次,合并上清液。放入90℃的水浴鍋中滅活10min,冷卻。用80%乙醇沉淀,離心得粗多糖,待顯色后于490nm出測(cè)定吸光度A。
1.4 粗多糖提取率計(jì)算
多糖得率(%)=(多糖含量/原料重量)×100%
1.5 酶法提取的正交實(shí)驗(yàn)
影響多糖提取率的因素很多,如酶的添加量,反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)溫度及其pH值。針對(duì)這些因素,采用四因素三水平的正交實(shí)驗(yàn)確定木耳多糖酶解法提取的最佳條件,具體參數(shù)見(jiàn)表1。
2. 結(jié)果與討論
2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線
由實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)(x),吸光度(y)為縱坐標(biāo)繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.5021x+0.0163,R2=0.994,線性關(guān)系良好。
2.2 酶法提取條件的優(yōu)化
取樣品每份0.200g,按照L9(34)分9組實(shí)驗(yàn),得到的數(shù)據(jù)如表2所示。
由直觀分析可知,RB>RC>RD>RA,四個(gè)影響多糖提取率的因素主次順序,分別是B>C>D>A,即酶的添加量>酶解溫度>pH>酶解時(shí)間,最佳參數(shù)為A1B3C3D3,即以料液比1:80,在pH為5.0的緩沖溶液中,回流提取60min,提取溫度定為50℃,反復(fù)提取三次,多糖提取率最高。按照最佳反應(yīng)條件進(jìn)行三次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),結(jié)果木耳多糖的提取率為15.64%,較最高3號(hào)樣14.51%高。
3. 結(jié)論
本文采用纖維素酶解新方法提取木耳多糖,該工藝通過(guò)酶水解破壞植物細(xì)胞壁的作用,可以使細(xì)胞內(nèi)的多糖物質(zhì)充分溶出,從而顯著提高了橘皮多糖提取率。
為進(jìn)一步優(yōu)化酶解法提取多糖實(shí)驗(yàn)條件,本實(shí)驗(yàn)用L9(34)正交表考察了酶添加量(液料比)、酶解溫度、酶解時(shí)間以及pH4個(gè)因素對(duì)提取率的影響。在最佳條件下,纖維素酶法提取木耳多糖的提取率為15.64%。
參考文獻(xiàn)
[1]張立娟,于國(guó)萍. 黑木耳多糖酶法提取條件的優(yōu)化及脫蛋白工藝的研究[J]. 食品工業(yè)科技,2005,26(5):109-111.
[2]趙宇, 彭曉霞. 多糖類化合物提取工藝研究[J]. 醫(yī)藥衛(wèi)生,2006,35(2):223-224.
[3]劉曉涵. 蒽酮硫酸法與苯酚硫酸法測(cè)定枸杞子中多糖含量的比較[J]. 食品科技,2009,34(9):270-272.
[4]楊賢慶, 劉名求, 戚勃等. 龍須菜中含量測(cè)定方法的比較研究[J]. 食品工業(yè)科技,2013(22):54-57.