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    Photoshop軟件在瘢痕病理切片膠原纖維含量定量分析中的應(yīng)用

    2017-03-23 13:34曾倩陳志勇李棟梁
    中國美容醫(yī)學(xué) 2017年1期
    關(guān)鍵詞:定量分析瘢痕

    曾倩 陳志勇 李棟梁

    [摘要]目的:介紹一種瘢痕病理切片膠原纖維含量的定量分析方法。方法:應(yīng)用Photoshop軟件窗口菜單中的測量記錄工具,首先測量出病理圖像的全部面積值,再用魔術(shù)棒工具選中病理圖像中膠原纖維的區(qū)域,測量出膠原纖維所占面積值,用病理圖像膠原纖維所占面積值與全部圖像面積值之比,測量出膠原纖維的含量。結(jié)果:通過該方法能準(zhǔn)確定量測量出瘢痕病理切片中膠原纖維的含量。結(jié)論:該方法簡單、方便、直觀,值得臨床推廣應(yīng)用。

    [關(guān)鍵詞]Photoshop;瘢痕;病理切片;膠原纖維;定量分析

    [中圖分類號]R619.6

    [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

    [文章編號]1008-6455(2017)01-0093-03

    瘢痕是皮膚損傷到一定程度后組織修復(fù)的必然結(jié)果。其發(fā)生的機(jī)制主要為成纖維細(xì)胞的過度增生和膠原纖維的大量沉積,準(zhǔn)確分析瘢痕病理切片中膠原纖維的含量對瘢痕的轉(zhuǎn)歸、治療效果的評價(jià)及瘢痕的進(jìn)一步研究都起著非常重要的作用。自2013年以來,筆者采用Photoshop軟件對兔耳增生性瘢痕模型病理切片中膠原纖維含量進(jìn)行定量分析,取得了滿意的效果,現(xiàn)介紹如下。

    1.材料和方法

    1.1材料:數(shù)碼相機(jī)(型號:Canon450D:產(chǎn)地:日本);Photoshop軟件(版本號:Adobe PhotoshopCS4);Masson染色兔耳瘢痕模型膠原纖維后的病理切片。

    1.2方法:將Masson染色兔耳瘢痕模型膠原纖維后的病理切片統(tǒng)一用Canon450D數(shù)碼相機(jī)在同一條件下(快門速度:1/25s:曝光時(shí)間:1/30s;ISOl00;光圈:白平衡)采集圖片,將圖片導(dǎo)入計(jì)算機(jī)Adobe PhotoshopCS4軟件中,打開工具欄窗口菜單中的測量記錄工具,將導(dǎo)入軟件中的照片進(jìn)行全選,點(diǎn)擊測量記錄,這時(shí)在照片下方就會顯示出整張照片的面積測量值(如圖1),然后取消全選,恢復(fù)照片,用工具欄中的魔術(shù)棒工具選中每一個(gè)膠原纖維顯色的區(qū)域(Masson染色后兔耳瘢痕模型病理圖像中膠原纖維呈藍(lán)色),當(dāng)全部選擇完后再次點(diǎn)擊測量記錄,照片下方就會分別顯示出膠原纖維的面積測量值(如圖2),將膠原纖維的面積測量值之和/整張圖片的全部面積測量值×100%,即可得到膠原纖維的百分含量。

    1.3注意事項(xiàng):①在使用工具欄中的魔術(shù)棒工具選擇膠原纖維區(qū)域時(shí),通常把容差設(shè)置到30左右,這樣魔術(shù)棒工具選擇膠原纖維的區(qū)域更加精確,減少測量誤差;②在選擇膠原纖維區(qū)域時(shí),可多次用魔術(shù)棒工具選擇,直到膠原纖維的區(qū)域被全部選擇完,取多次測量面積值的總和即為膠原纖維所占的面積值;③瘢痕病理切片圖像采集時(shí),數(shù)碼照相用固定的距離且與圖片保持垂直。

    2.典型應(yīng)用

    本方法應(yīng)用于《點(diǎn)陣鉺激光治療兔耳增生性瘢痕的機(jī)理研究》課題中,按李希軍等報(bào)道的方法,建立兔耳增生性瘢痕模型。選擇80個(gè)兔耳增生性瘢痕隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對照組,每組各40例,實(shí)驗(yàn)組分別于上皮化后0、1、2、3月進(jìn)行點(diǎn)陣鉺激光治療(治療參數(shù):波長2 940nm,能量50J/cm2,脈寬300um,延時(shí)2s,穿透組織深度為213um,正方形光斑,每個(gè)瘢痕重復(fù)3次),對照組不做任何處理。每次治療前兩組分別隨機(jī)切取10個(gè)瘢痕用4%多聚甲醛固定后進(jìn)行Masson染色。按本文上述方法分別對病理切片進(jìn)行照相,將照片導(dǎo)f1.AdobePhotoshopCS4進(jìn)行測量,測量結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,組間進(jìn)行t檢驗(yàn),P<0.05為組間有顯著性差異,見表1。

    上皮化后兔耳瘢痕膠原纖維含量隨時(shí)間逐漸升高,在2個(gè)月時(shí)達(dá)高峰,后逐漸降低,實(shí)驗(yàn)組和對照組相比,P<0.0l,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3.討論

    瘢痕的發(fā)生過程復(fù)雜而有序,主要表現(xiàn)為成纖維細(xì)胞及其合成的細(xì)胞外基質(zhì)代謝機(jī)能失去了正常的調(diào)控,使成纖維細(xì)胞的增殖能力加強(qiáng),凋亡減慢,引起膠原纖維過度增生,降解能力降低,導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)增加,最終導(dǎo)致瘢痕形成。膠原纖維過度增生是瘢痕形成的主要物質(zhì)成分,那么,準(zhǔn)確評價(jià)膠原纖維含量的變化,將為瘢痕的療效評價(jià)、轉(zhuǎn)歸、抗瘢痕藥物的開發(fā)研制及瘢痕的進(jìn)一步研究都有著非常直觀的判斷。在以往瘢痕病理切片膠原纖維的分析方法中,大多采用光鏡下對病理切片膠原纖維排列及含量的直觀描述、網(wǎng)格計(jì)數(shù)法的測量及一些圖像分析系統(tǒng)平臺的間接分析,但這些方法都存在著主觀性較強(qiáng)、誤差較大等缺點(diǎn),不能客觀定量地表達(dá)出膠原纖維的含量。而在Photoshop軟件處理系統(tǒng)中,窗口菜單欄中的測量記錄工具可直接顯示測量圖像的面積值,圖像經(jīng)過膠原纖維區(qū)域測量面積數(shù)據(jù)值與整個(gè)圖像測量面積數(shù)據(jù)值的比值,能客觀地用數(shù)據(jù)來量化瘢痕病理切片中膠原纖維的含量。根據(jù)數(shù)碼相機(jī)成像原理,每個(gè)電荷耦合元件感光后生成一個(gè)像素,眾多像素組成一幅照片,實(shí)際物體的成像大小與像素成正比,在不變焦的情況下與距離成反比。因此,病理切片圖像采集時(shí),數(shù)碼照相必須用固定的距離且與圖片保持垂直。這樣分析對比的各組圖像才能保持一致性。用魔術(shù)棒工具選擇膠原纖維區(qū)域時(shí),設(shè)置容差為30左右,容差太大或太小,魔術(shù)棒工具都不容易分辨膠原纖維區(qū)域,導(dǎo)致誤差較大。

    綜上,筆者采用Photoshop軟件對兔耳瘢痕病理切片圖像中的膠原纖維進(jìn)行分析,用客觀的數(shù)據(jù)定量分析出膠原纖維在病理切片圖像中的含量。該方法簡單、準(zhǔn)確、直觀,值得推廣應(yīng)用。

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