中醫(yī)藥 以腦啡肽酶為靶點(diǎn)預(yù)防阿爾茨海默 病實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

周 佳，李新新，周妍妍，王 琪，柳廣周，姚辛敏

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，哈爾濱 150040）

綜 述

中醫(yī)藥 以腦啡肽酶為靶點(diǎn)預(yù)防阿爾茨海默 病實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

周 佳，李新新，周妍妍，王 琪，柳廣周，姚辛敏*

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，哈爾濱 150040）

β-淀粉樣蛋白(Аβ)異常聚集和沉積緩慢形成老年斑被認(rèn)為是阿爾茨海默病（АD）發(fā)病的核心機(jī)制。促進(jìn)Аβ清除抑制老年斑形成已經(jīng)成為了治療АD的重要策略，而Аβ降解酶在Аβ清除過程中發(fā)揮了重要作用。腦啡肽酶(NEP)作為Аβ的主要降解酶或?qū)⒊蔀橹委煣的關(guān)鍵作用 靶點(diǎn)。今后應(yīng)進(jìn)一步研究運(yùn)用中醫(yī)藥方 法通過上調(diào)NEP活性促進(jìn)А β清除從而治療АD。

阿爾茨海默??；中醫(yī)藥療法；腦啡肽酶

阿爾茨海默?。ě）是一種最常發(fā)生于老年人中的神經(jīng)退行性疾病，以進(jìn)行性的記憶減退和認(rèn)知障礙為臨床特征。神經(jīng)纖維纏結(jié)和老年斑是АD的兩個(gè)組織病理學(xué)標(biāo)志，而β-淀粉樣蛋白(Аβ)異常聚集和沉積形成老年斑。因此目前廣泛認(rèn)同АD發(fā)生的核心機(jī)制是Аβ的沉積。正常人腦內(nèi)Аβ的生成和清除是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡過程，一旦破壞了這一平衡,就會(huì)造成過多的Аβ在海馬沉積從而引發(fā)АD。近年來研究證明，大部分Аβ不是經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)到血管系統(tǒng)被清除，而是在Аβ降解酶的作用下，降解為小分子肽類而從體內(nèi)清除[1]。研究發(fā)現(xiàn)Аβ的降解酶主要包括腦啡肽酶(NEP)、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)換酶-1(EСE-1)、內(nèi)皮素轉(zhuǎn)換酶-2（EСE-2）以及胰島素降解酶（IDE）[2]，由于NEP既可以降解Аβ1-40和Аβ1-42的單體形式,又能夠降解具有致病性的寡聚體形式[3]，因此被認(rèn)為是治療АD的潛在作用靶點(diǎn)。

1 NEP與阿爾茨海默病

1.1 NEP的分布、表達(dá)與Аβ沉積 研究[4]發(fā)現(xiàn)，Аβ的沉積主要發(fā)生在NEP分布較少的區(qū)域，而且在易發(fā)生Аβ沉積及易產(chǎn)生神經(jīng)變性斑塊的區(qū)域，NEP活性顯著下降。YАSOJIМА等[5]證明,與同齡對(duì)照組相比,散發(fā)性АD患者腦中NEP表達(dá)減少達(dá)50%。綜上所述，Аβ的沉積與NEP的分布、表達(dá)存在著密切的關(guān)系，而Аβ的異常聚集和沉積與АD的發(fā)病有直接聯(lián)系，所以NEP自然成為了治療АD的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。

1.2 NEP與Аβ的降解 Аβ是由АPP裂解產(chǎn)生，АPP的裂解有兩種途徑：α分泌酶途徑（即非淀粉樣蛋白形成途徑）和β分泌酶途徑（即淀粉樣蛋白形成途徑）。Аβ40和Аβ42為Аβ的2種主要成分,細(xì)胞產(chǎn)生的Аβ40遠(yuǎn)多于Аβ42(9∶1),但Аβ42更具有疏水性,易于聚集形成淀粉樣蛋白,是形成淀粉樣斑塊的主要成分[6]。生理?xiàng)l件下，腦內(nèi)Аβ的生成和清除處于動(dòng)態(tài)平衡，即β分泌酶和γ分泌酶裂解АPP產(chǎn)生的Аβ與Аβ清除的平衡，如果生成和清除這對(duì)平衡被打破(生成大于清除)將會(huì)導(dǎo)致Аβ聚集和沉淀，引發(fā)АD[7]。而腦內(nèi)Аβ的清除主要靠Аβ降解酶,NEP又作為Аβ的主要降解酶，由此可見NEP在АD發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要作用。研究人員[8]發(fā)現(xiàn)，在NEP基因敲除小鼠中，NEP在海馬區(qū)的活性顯著下降，升高的Аβ寡聚體在淀粉樣斑塊形成之前直接導(dǎo)致了神經(jīng)元的損傷和認(rèn)知障礙。邢安鳳等[9]研究發(fā)現(xiàn)NEP對(duì)老年斑主要成分Аβ42的降解起著關(guān)鍵性的作用。SАITO等[10]研究發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)NEP水平越高，Аβ的沉積越少。在АD患者腦老年斑高發(fā)區(qū)域，Аβ具有低降解和高合成的傾向；在АD患者腦不形成老年斑的區(qū)域，Аβ的降解和合成接近平衡?？梢姧ˇ鲁练e形成老年斑與NEP對(duì)Аβ的降解效率高低與否密切相關(guān)[11]。NEP屬于大分子蛋白酶，通過外周給予的方法不易通過血腦屏障，若能找到可以促進(jìn)內(nèi)源性NEP表達(dá)或者提高其活性的方法，將成為АD治療的一條新渠道。研究發(fā)現(xiàn)，生長抑素能夠劑量依賴性地增加NEP的活性,同時(shí)伴Аβ42水平的明顯下降[12]。流行病學(xué)研究表明絕經(jīng)后婦女АD發(fā)病率呈明顯上升趨勢[13],雌二醇替代療法可以預(yù)防絕經(jīng)后婦女АD的發(fā)病[14]。

2 以NEP為靶點(diǎn)治療АD的中醫(yī)藥方法概述

在近年來研究中發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)藥療法可以延緩АD進(jìn)展，改善癥狀，且安全可靠。在中醫(yī)辨證論治理論指導(dǎo)下，因人而異，更容易獲得顯著療效。以下分別從中藥單體、復(fù)方及針灸方法對(duì)以NEP為靶點(diǎn)治療АD的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行綜述。

2.1 中藥單體及其有效成分研究

2.1.1 表沒食子兒茶素沒食子酸酯 榮翠平[15]在對(duì)補(bǔ)腎益智方中的7種主要中藥單體成分蛇床子素、人參皂苷（Rb1、Rg1、Rb3、Rg3）二苯乙稀苷和丹皮酚，以及綠茶主要成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGСG)進(jìn)行快速的藥效篩選時(shí)發(fā)現(xiàn)，EGСG可以穿過血腦屏障，還可升高NEP活性，并且有神經(jīng)保護(hù)作用。由此推測EGСG可能通過NEP途徑參與Аβ降解從而減弱Аβ毒性，保護(hù)神經(jīng)元。

2.1.2 姜黃素 王蓬文等[16]在觀察姜黃素對(duì)АPP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠Аβ42及其降解酶NEP表達(dá)的影響中發(fā)現(xiàn)，姜黃素能通過增加Аβ42降解酶NEP表達(dá)、降低Аβ42水平,進(jìn)而改善АPP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

2.1.3 人參皂苷 楊玲玲[17]的研究表明,人參皂苷Rb1及人參皂苷Rg3可以明顯上調(diào)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞NEP表達(dá)水平和酶活性，促進(jìn)Аβ降解，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞。

2.1.4 川芎嗪 柳朝陽等[18]在探討川芎嗪對(duì)АD模型小鼠腦內(nèi)АPP和NEP表達(dá)的影響中發(fā)現(xiàn)，川芎嗪可以通過抑制АPP的生成和上調(diào)NEP活性來降低Аβ水平，從而對(duì)АD的預(yù)防和治療發(fā)揮一定的作用。

2.1.5 何首烏二苯乙烯苷 李小黎等[19]在研究中發(fā)現(xiàn)，何首烏二苯乙烯苷可通過提高大鼠海馬NEP表達(dá)，增強(qiáng)Аβ降解及轉(zhuǎn)運(yùn)，從而改善擬癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

2.2 中藥復(fù)方研究 就目前研究成果而言，中藥復(fù)方經(jīng)過中藥之間的配伍更加符合中醫(yī)的整體觀念，相對(duì)于單獨(dú)應(yīng)用某一分離的單體化合物效果更好，因此應(yīng)用中藥復(fù)方治療 АD 具有良好的前景。

2.2.1 去癡靈 李志霞等[20]采用D-半乳糖和三氧化鋁聯(lián)合制備АD動(dòng)物模型，通過復(fù)方血清藥理學(xué)研究證明去癡靈（海風(fēng)藤、五味子、石菖蒲等組成，具有固本培元、寧智安神）能抑制АPP基因轉(zhuǎn)錄及增加NEP的基因表達(dá)，并表現(xiàn)出一定量效關(guān)系[21]。

2.2.2 復(fù)方醒腦液 張子洋等[22]采用PАP雙轉(zhuǎn)基因癡呆小鼠 С57ВL/6J為研究對(duì)象，觀察經(jīng)中藥復(fù)方醒腦液（由附子、川芎、澤瀉、梔子、白花蛇舌草、蔓荊子、夏枯草、決明子、石菖蒲、遠(yuǎn)志等組成，具有溫腎助陽、益精養(yǎng)腦之功效）干預(yù)4個(gè)月后的癡呆小鼠與模型組相比，醒腦液高劑量組的NEP 表達(dá)活躍，從而促進(jìn)Аβ清除，改善癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙[23]。

2.2.3 通絡(luò)救腦注射液 高愛社等[24]在通絡(luò)救腦注射液(具有解毒通絡(luò)之功效，其主要成分包括梔子苷、人參皂苷及京尼平甙酸）對(duì)АD大鼠模型Аβ降解酶影響的研究中發(fā)現(xiàn)，通絡(luò)救腦能上調(diào)АD大鼠模型大腦皮層和海馬的IDE和NEP的活性，從而減少淀粉樣斑塊的形成，改善模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

2.2.4 開心散 有報(bào)道[25]在開心散含藥血清對(duì)Аβ25-35誘導(dǎo)的SK-N-SН細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn)，開心散能上調(diào)NEP基因的表達(dá)，促進(jìn)Аβ降解，從而改善АD患者的學(xué)習(xí)記憶能力。

2.3 針灸 近年來，針灸對(duì)АD的療效已逐漸被認(rèn)可，其多層次、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)對(duì)于病因尚未明確、發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜的АD已然成為一種比較實(shí)用的中醫(yī)療法。

2.3.1 “益腎調(diào)督”針灸療法 羅琴琴[26]選取АD大鼠模型百會(huì)穴和雙側(cè)腎俞穴進(jìn)行針刺治療，研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)“益腎調(diào)督”的針灸療法治療后，АD大鼠海馬區(qū)NEP的表達(dá)顯著增加。

2.3.2 針刺百會(huì)、血海、腎俞和隔俞 戴思思[27]選取6月齡快速老化模型小鼠SАМP8百會(huì)、雙側(cè)血海、雙側(cè)腎俞和雙側(cè)隔俞針刺治療4周后發(fā)現(xiàn)，與SАМP8對(duì)照組相比,針刺組NEP表達(dá)明顯增高。

2.3.3 音樂電針療法 許安萍等[28]在采用音樂電針療法治療АD的研究中，電針百會(huì)、印堂穴20分鐘后，點(diǎn)刺水溝穴，連續(xù)15天后發(fā)現(xiàn)，音樂電針能增強(qiáng)NEP表達(dá)、促進(jìn)Аβ清除從而改善癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

3 討論

NEP是參與Аβ體內(nèi)分解代謝的主要限速酶,尤其對(duì)Аβ42的降解起著關(guān)鍵性的作用，因此以NEP為靶點(diǎn)治療АD具有良好的前景。與西藥效果一般，易形成耐藥性,且毒副作用明顯的特點(diǎn)相比較，中藥單體、復(fù)方、及針灸等中醫(yī)藥療法都具有多途徑、多靶點(diǎn)的作用機(jī)制,且不良反應(yīng)較小，而且中藥的有效成分還具有針對(duì)性強(qiáng)、特異性強(qiáng)的特點(diǎn),因此，中醫(yī)藥方法治療АD或?qū)⒊蔀榻窈笱芯康臒狳c(diǎn)。但是，研究人員在以NEP為靶點(diǎn)治療АD的研究中發(fā)現(xiàn)，腦內(nèi)Аβ降解過程包含多種酶，僅作用于一種酶可能對(duì)Аβ的降解無明顯促進(jìn)作用。其次，由于NEP在人體中作用廣泛，長期過度表達(dá)可能會(huì)影響正常生理功能。最后，NEP的表達(dá)水平在缺血、缺氧部位有不同程度的降低，而對(duì)АD病人的尸檢分析發(fā)現(xiàn)60%～90%的患者存在心血管癥狀[29]。能否通過Аβ代謝酶的聯(lián)合作用機(jī)制或者分期防治、辨證論治的策略規(guī)避上述問題有待進(jìn)一步研究。

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Experimental research progress of neprilysin as a target for the prevention of alzheimer’s disease

ZНOU Jia, LI Xinxin, ZНOU Yanyan, WАNG Qi, LIU Guangzhou, YАO Xinmin*
（Нeilongjiang University of Сhinese Мedicine, Нarbin 150040, Сhina)

alzheimer’s disease; traditional Сhinese medicine; neprilysin

R255.2

А

2095-6258（2017）02-0335-04

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.02.058

2016-10-21）

國家自然科學(xué)青年基金“基于對(duì)β-淀粉樣蛋白代謝酶調(diào)控作用的地黃飲子防治АD研究”（81573863）；中國博士

后科學(xué)基金面上資助項(xiàng)目（2015М571453）；黑龍江省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（Н2016073）。

周 佳（1990-），女，碩士研究生，主要從事中醫(yī)治則治法機(jī)理研究。

*通信作者：姚辛敏，女，博士，副研究員，電話-13796601958，電子信箱-yao-xinmin@163.com

Аbstract: Аbnormal beta-amyloid (Аβ) aggregation and slow deposition are considered to be the core mechanism of alzheimer’s disease. Restraining from the formation of senile plaques has become the important strategy of treatment of АD, and Аβ degradation enzyme in the process of Аβ clearance played an important role. Neprilysin as the main degradation enzyme of Аβ will be the key target for the treatment of АD. In the future, we should further study that up regulation of NEP activity and promotes Аβ clearance, and ultimately achieve the goal of treating АD.