天葵有效部位中氰苷類成分的含量測定及分析

龍正標，沈易華，徐冉，湯磊*

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天葵有效部位中氰苷類成分的含量測定及分析

龍正標1，沈易華1，徐冉2，湯磊*2

（1. 銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院， 貴州 銅仁 554300； 2. 貴州醫(yī)科大學(xué)， 貴州 貴陽 550000）

實驗對天葵植物中的有效部位氰苷類成分進行了分析（檢測）及含量測定。通過UV法測定氰苷類的成分和含量，用HPLC（高效液相色譜法）分析其主要成分。結(jié)果表明測得的天葵樣品中氰苷類含量為6.70%，并對氰苷類成分在HPLC譜圖上進行歸屬。首次對天葵有效部位中氰苷類成分進行含量測定及HPLC譜圖歸屬，該方法操作簡便、準確、重復(fù)性好。

天葵； 氰苷； 含量測定； HPLC

天葵屬毛茛科天葵植物，其根入藥稱為天葵子，是一種中藥材，收錄在《中國藥典》中，有清熱解毒、消腫止痛、利尿等作用，治乳腺炎、扁桃體炎、癰腫、瘰疬、小便不利等功效；全草又作土農(nóng)藥，多用于瘰癘、熱淋、癰腫疔瘡、蛇蟲咬傷；產(chǎn)于中國西南、華東、東北等地；天葵子作為傳統(tǒng)中藥，在貴州民間有人用于治療動物白內(nèi)障疾病，但未見文獻報道。筆者早期通過對天葵提取物治療白內(nèi)障作用的相關(guān)藥學(xué)實驗研究，結(jié)果表明天葵提取物的抗氧化作用顯著。目前已知天葵中主要成分為氰苷類成分，因此為全面考察天葵的有效部位成分，本研究首次對天葵有效部位中氰苷類成分進行分析及含量測定，為明確天葵抗氧化活性成分及拓展其藥用價值提供一定的理論依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 儀器

RE-3000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海儀天科學(xué)儀器有限公司）；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；BRANSON新一代超聲清洗器（上海恒奇儀器儀表有限公司）；GDX系列高低溫一體機循環(huán)器（上海丙林電子科技有限公司）；za100r3型精密天平（上海贊維衡器有限公司）；ZF-6N型三用紫外分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）。

1.2 試劑與藥材

溶劑：甲醇（廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心）、乙醇（重慶市川東化工有限公司）、乙酸乙酯（南開大學(xué)化學(xué)分析試劑廠）、氯仿（上海四赫維化工有限公司）、正丁醇（南開大學(xué)化學(xué)分析試劑廠）、水為自制蒸餾水。

層析填料：D101型大孔樹脂（天津市光復(fù)精心化工研究所）、柱層層析硅膠（200~300目，煙臺市江友硅膠開發(fā)有限公司）、HSGF245型薄層層析硅膠板（煙臺市芝罘黃務(wù)硅膠開發(fā)試驗廠）。

顯色劑：三氯化鋁乙醇溶液、香草醛—硫酸乙醇溶液、碘化鉍鉀、碘等均按天然藥物化學(xué)實驗教材中的方法配制。

藥材：天葵子在貴州省銅仁市采購，由銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院中藥學(xué)教研室梁玉勇教授鑒定確定為毛茛科天葵屬植物天葵 Semiaquilegia adoxoides( DC.) Makino的干燥塊莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取天葵對照品紫草氰苷 8.4 mg，放置于100 mL的容量瓶中，緩慢加水溶解稀釋到刻度后搖勻，作為對照品貯備液。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取正丁醇層（TK-Z）11.1 mg，放置于100 mL容量瓶中，緩慢加水溶解并稀釋至刻度后搖勻，作為供試品貯備液。

2.3 最大吸收波長的測定

分別精密取對照品紫草氰苷以及待測樣品 TK-Z 10 mL，在200~400 nm波長內(nèi)掃描，掃描結(jié)果顯示樣品溶液均在260 nm處有著最大的吸收。 因此，選此波長作為測定波長。

2.4 標曲的繪制

分別精密量取對照品溶液0.0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL置于10 mL容量瓶中，稀釋到刻度線后搖勻，然后通過第一管空白對照，在260 nm波長的地方測定吸收度，以吸光度（）對濃度（）作標準曲線，得到回歸方程為：= 0.037 6+ 0.029 4，2= 0.999 4。濃度在3.36~16.8μg /mL內(nèi)，與吸收度呈線性關(guān)系。

圖1 標準曲線

2.5 回收率實驗

分別取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的紫草氰苷對照品，按照標準曲線項下操作，結(jié)果回收率為99.96%，RSD=2.18%（=6）。

表1 回收率實驗結(jié)果（n=6）

2.6 穩(wěn)定性實驗

分別精密量取供試品溶液1 mL，按照標準曲線制備項下操作，依法測定吸收度。間隔1、2、3、4 h再分別測定1次，RSD=0.29%（=6），表明樣品在4 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 精密度試驗

分別取對照品溶液1 mL，共6份，按標準曲線制備項下操作，分別測定吸收度，結(jié)果 RSD=2.91%，1.05%（=6）。

2.8 重復(fù)性試驗

精密稱定同一樣品6份，分別按供試品的含量測定項下操作，結(jié)果RSD =0.15%（=6）。表明重現(xiàn)性良好。

2.9 供試品的含量測定

精密稱定同一樣品6份，分別按供試品的含量測定項下操作，結(jié)果RSD =0.15%（=6）。表明重現(xiàn)性良好。

表2 含量測定實驗結(jié)果（n=3）

2.10 HPLC分析[4-6]

天葵有效部位及對照品用適量水和甲醇溶解，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，按照《中國藥典》2010年版一部附錄VID高效液相色譜法測定: 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相A，以0.05%磷酸水為流動相B，按表3中規(guī)定進行梯度洗脫; 流速: 0.6 mL/min; 檢測波長: 260 nm; 柱溫: 30 ℃; 進樣量: 20 μL，色譜圖見圖1。

表3 HPLC洗脫條件

圖2 高效液相色譜圖

1-紫草氰苷；2-冬青氰苷；3-蝙蝠葛氰苷

3 討論

筆者前期對天葵提取物治療白內(nèi)障的作用進行了相關(guān)的藥學(xué)驗證工作，發(fā)現(xiàn)天葵提取物具有明顯的抗氧化作用。其中的正丁醇部位為有效部位，目前已知天葵中主要成分為氰苷類成分，因此為全面考察天葵抗白內(nèi)障有效部位成分，本研究首次對天葵有效部位中氰苷類成分進行分析及含量測定，測得天葵樣品中氰苷類含量為6.70%，并且參考牛峰等人對天葵指紋圖譜的研究，歸屬了天葵有效部位中主要氰苷類成分的HPLC信號峰。為明確天葵抗氧化活性成分及拓展其藥用價值提供一定的理論依據(jù)。

［1］中華人民共和國藥典［M］. 2010年版（一部）.

［2］湯磊. 一種天葵提取物及其制備方法和應(yīng)用[P]. 中國專利：2009 10312563.3, 2010-07-14.

［3］周訓(xùn)蓉, 徐冉, 肖婉, 等. 天葵各部位體外抗氧化活性及成分研究[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志, 2015, 15: 116-119.

［4］牛鋒, 張國恩, 崔征, 等. RP-HPLC 法測定天葵子中東方唐松草苷[J]. 中草藥, 2006，37（4）：610-611.

［5］NIU Feng , XIE Guang-bo, CUI Zheng, et al. Determination of Griffonilide in Roots of Semiaquilegia adoxoides by RP-HPLC[J]. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 2006,15 (3): 168-171.

［6］牛鋒. 天葵子的化學(xué)成分及質(zhì)量標準研究［D］. 沈陽藥科大學(xué), 2006.

Determination and Analysis of Total Cyanogenic Glycosides in Active Part of Semiaquilegia Adoxoides

1,1,2,*2

（1. Tongren Polytechnic College, Guizhou Tongren 554300, China； 2. Guizhou Medical University, Guizhou Guiyang 550000, China）

Total cyanogenic glycosides in active part of Semiaquilegia adoxoides were determined and analyzed. HPLC and UV were used to determine the total cyanogenic glycosides of Semiaquilegia adoxoides. The results showed that the total cyanogenic glycosides content was 6.70%, the cyanogenic glycosides mode of the HPLC characteristic chromatographic profile was identified. The method is simple, accurate and reproducible.

Semiaquilegia adoxoides; cyanogenic glycosides ; content determination; HPLC

O 657

A

1004-0935（2017）10-1036-03

貴州省科學(xué)技術(shù)廳-貴州醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合基金項目（黔科合LH字[2015]7341）；貴州省化學(xué)合成藥物研發(fā)利用工程技術(shù)研究中心（黔科合[2016]平臺人才5402）；貴州省普通高等學(xué)校藥物化學(xué)工程研究中心（黔教合KY字[2014]219號）。

2017-09-22

龍正標（1990-），男，苗族，助教，貴州省錦屏縣人，2013年畢業(yè)于貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)專業(yè)，研究方向:藥物化學(xué)和藥事管理，從事藥物化學(xué)及藥事管理的教學(xué)和研究工作。

湯磊（1974-），男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥物化學(xué)。