青天葵種質(zhì)資源研究①

翟勇進(jìn) 白隆華 黃 浩 唐美瓊

(廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 廣西南寧530023)

青天葵為蘭科（Orchidaceae） 芋蘭屬（Nervilia）植物，屬多年生宿根小草本［1]。青天葵性涼，味甘，具有潤(rùn)肺止咳、鎮(zhèn)靜止痛、清熱解毒、散瘀止痛作用，是“十大南藥”之一，為藥、食兩用藥材，曾是中國(guó)出口創(chuàng)匯的主要藥材［2]。由于量小，野生資源缺乏，市面上價(jià)格較高。目前文獻(xiàn)多集中在藥理、組培、栽培和化學(xué)成分［3-6]等方面，而青天葵的種質(zhì)資源評(píng)價(jià)方面還沒(méi)有報(bào)道。本文從農(nóng)藝性狀、藥材主成分含量和種質(zhì)遺傳性狀3方面對(duì)青天葵種質(zhì)資源的優(yōu)劣開(kāi)展研究，為青天葵品種選育提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料

2017年8月15日，青天葵采集于廣西藥用植物園科研基地青天葵種子資源圃，這些青天葵野生種群分別來(lái)自水口、響水、下凍、靖西、大新、上林、恭城、南丹、荔波，其中水口、響水、下凍、靖西、大新、上林和荔波為大葉青天葵，恭城和南丹為中、小葉青天葵。品種經(jīng)廣西藥用植物園白隆華研究員鑒定為‘毛唇芋蘭’［Nervilia fordii（Hance）Schltr.]。每個(gè)種質(zhì)分別隨機(jī)采500株，洗凈，晾干。

1.1.2 設(shè)備

離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）UV3010 型；紫外分光光度計(jì)（日本島津），AL-2041/10 萬(wàn)電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；Agilent1260 高效液相色譜儀，Agilent ZORBA×SB-C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）等（美國(guó)安捷倫公司）。

1.2 方法

1.2.1 青天葵葉片測(cè)量

青天葵葉片厚度、寬度、長(zhǎng)度、葉柄直徑和長(zhǎng)度以及球莖的直徑用數(shù)顯示游標(biāo)卡尺測(cè)量；用電子分析天平（精確到萬(wàn)分之一）稱重，數(shù)值取均值；葉干重：將青天葵新鮮葉片放入烘烤箱（±0.1 ℃），溫度設(shè)定50 ℃，連續(xù)烘烤24 h 至恒重；折干率為葉片干重與鮮重之比。

1.2.2 氨基酸含量測(cè)定

按GB/T5009.124-3003 食品中氨基酸的測(cè)定方法測(cè)定。

1.2.3 總黃酮測(cè)定

按徐靈源等［7]方法測(cè)定。

1.2.4 鼠李檸檬素和鼠李秦素測(cè)定

色譜條件：InertsilODS-3C18（250 mm×4. 6 mm，5 μm）（GlScience.Co.Ltd）；流動(dòng)相為甲醇-0. 4%∶磷酸水溶液（63∶37），流量1.0 mL/min，波長(zhǎng)266和254 nm，40℃柱溫，進(jìn)樣10 μL。對(duì)照品制備：精密稱取鼠李檸檬素對(duì)照品0.40 mg 倒入10 mL 量瓶中，用甲醇溶解，再加至刻度，配成40 μg/mL溶液，即得鼠李檸檬素對(duì)照品溶液。精密稱取鼠李秦素對(duì)照品5.60 mg 倒入10 mL 量瓶中，用甲醇溶解再加至所需刻度，配成560 μg/mL 溶液，即得鼠李秦素對(duì)照品溶液。

樣品溶液的制備：精確稱取青天葵藥材粉末1.00 g 置于50 mL 三角瓶中，加入20 mL75%甲醇溶液，稱量質(zhì)量，超聲萃取1 h 后取出，冷卻后恢復(fù)至原質(zhì)量，搖動(dòng)均勻，過(guò)濾，將濾液離心即可。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理和計(jì)算

式中t為性狀重復(fù)力（遺傳力），F(xiàn)為方差分析的檢驗(yàn)值［8]。一般說(shuō)來(lái)，t處于0和1之間，t值愈大，說(shuō)明某性狀的不同記錄值愈相近，調(diào)查該性狀所需測(cè)定的次數(shù)就可以愈少［9]，說(shuō)明此性狀表現(xiàn)出的差異更穩(wěn)定。

用SPSS19.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析、相關(guān)分析和多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 青天葵葉片大小、莖長(zhǎng)、鮮重、干重和折干率

從表1 可以看出，不同產(chǎn)地青天葵葉片大小（長(zhǎng)度和寬度）、葉柄長(zhǎng)、葉柄粗、葉鮮重、干重和折干率不一樣。青天葵葉片長(zhǎng)度＞10 cm 有2 個(gè)，分別為水口和大新青天葵；9～10 cm有上林、下凍和靖西青天葵3 個(gè)；＜8 cm 的有響水、荔波、南丹和恭城青天葵；水口的青天葵葉片最長(zhǎng)，達(dá)到14.54 cm，是恭城青天葵葉片長(zhǎng)度的1 倍以上，其寬度亦為恭城青天葵葉片1倍以上，二者葉片面積差異明顯。各地青天葵種質(zhì)植株葉柄長(zhǎng)度差異較大，長(zhǎng)度＞10 cm 的有水口、下凍、上林和大新青天葵；3～10 cm的有響水、靖西和荔波青天葵；長(zhǎng)度＜3 cm 的有恭城和南丹青天葵。葉片鮮重方面，＞5.00 g 只有水口青天葵，達(dá)6.00 g；3.00～5.00 g有大新青天葵；2.00～3.00 g有下凍、上林和靖西青天葵；＜2.00 g有恭城、南丹、響水、荔波青天葵；葉片鮮重最重為水口青天葵，達(dá)6.00 g，最輕為恭城青天葵（1.05 g）；植株葉片鮮重最重是最輕的5.71 倍，二者差異顯著。葉片干重方面，水口青天葵達(dá)0.49 g，恭城青天葵只有0.06 g，最高干重（水口青天葵）是最輕干重（恭城青天葵）的8.17倍。靖西青天葵折干率達(dá)9.80%，水口青天葵為8.08%，而恭城青天葵只有5.86%，差異顯著。

表1 青天葵葉片相關(guān)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

2.2 青天葵主成分測(cè)量

各地的青天葵種質(zhì)主成分含量不一樣。由表2可知，3個(gè)地點(diǎn)青天葵總黃酮含量超過(guò)1%，分別為恭城（1.04%）、南丹（1.14%）和水口（1.27%），其它6個(gè)青天葵種質(zhì)樣品總黃酮含量均不足1%；其中，水口青天葵總黃酮含量最高，達(dá)到1.27%，大新含量最低，只有0.81%；荔波青天葵總黃酮含量倒數(shù)第二，水口青天葵總黃酮含量與其它地方青天葵相互間差異顯著。下凍青天葵總氨基酸含量（23.76 g/100 g）最高；水口和恭城青天葵總氨基酸含量相同（12.50 g/hg），且為最低，不同青天葵種質(zhì)氨基酸高低含量經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異顯著。南丹青天葵鼠李檸檬素含量最高（0.26%），其次為恭城青天葵（0.17%），恭城、南丹與其它地方的青天葵鼠李檸檬素相互間差異顯著。鼠李秦素以水口青天葵含量最高（0.23%），下凍青天葵次之，其它地方含量較少，恭城、南丹和上林青天葵種質(zhì)可能含量太低，在樣品中未檢測(cè)出。

2.3 青天葵種間變異

9 個(gè)種源的青天葵葉片形態(tài)特征分析結(jié)果見(jiàn)表3。從表3 可以看出，不同種源家系的葉片長(zhǎng)度和寬度的變幅差異較大，均達(dá)到顯著水平，表明同一種源不同家系的葉片長(zhǎng)度和寬度變異較大。葉長(zhǎng)變異系數(shù)以荔波最大，為7.73%，南丹最?。?.9%）；葉寬變異系數(shù)以上林最大，為14.80%，水口最小（1.98%）。從表4也可以看出，不同種源家系的葉柄長(zhǎng)和葉柄直徑的變幅較大，差異顯著，同一種源不同家系的葉柄長(zhǎng)度和直徑變異較大。荔波葉柄長(zhǎng)變異系數(shù)最大（22.22%），南丹最?。?.34%）；上林葉柄直徑變異系數(shù)最大（17.80%），靖西最?。?.07%）。變異系數(shù)大，說(shuō)明該家系種源受環(huán)境的影響大；變異系數(shù)小，則受環(huán)境影響小。葉片長(zhǎng)寬比遺傳力除荔波外，均大于0.9，說(shuō)明這2個(gè)性狀在同一種源不同家系中較穩(wěn)定；葉柄長(zhǎng)與直徑比遺傳力除恭城、水口和荔波外，均大于0.9，說(shuō)明青天葵這2 個(gè)性狀在同一種源不同家系中相對(duì)較穩(wěn)定。

表2 不同產(chǎn)地青天葵品種主成分含量

表3 青天葵葉片長(zhǎng)與葉片寬形態(tài)特征分析

表4 青天葵葉柄長(zhǎng)與葉柄寬形態(tài)特征分析

3 討論與結(jié)論

藥用植物優(yōu)良品種表現(xiàn)為有效成分含量高、產(chǎn)量高和抗劣性強(qiáng)等特性［10]，應(yīng)用混合選擇的方法，對(duì)遺傳混雜種質(zhì)資源群體進(jìn)行純化，可選育出優(yōu)良品種［11]。青天葵主成分含量是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵［12]。黃酮是青天葵的主要有效成分，黃酮類化合物具有抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳平喘的作用，將純化的總黃酮與總氨基酸按一定比例混合，對(duì)治療急性肺損傷療效顯著［11]?？傸S酮以水口和南丹青天葵含量較高，其它地方青天葵總黃酮在0.83%～1.04%，其中，恭城、南丹和水口青天葵種質(zhì)品質(zhì)較好，以水口青天葵種質(zhì)品質(zhì)最好。從氨基酸的角度進(jìn)行判斷可知，下凍和響水青天葵種質(zhì)好。作為青天葵質(zhì)量控制的重要指標(biāo)［13]，鼠李檸檬素有治療慢性氣管炎的作用和抗氧化活性，鼠李秦素具有抗氧化活性，其含量的多少對(duì)判斷青天葵品質(zhì)好壞具有重要的參考價(jià)值［14]。鼠李檸檬素含量以南丹（0.26%）和恭城（0.17%）含量較高，鼠李秦素則以水口和下凍青天葵種質(zhì)含量高。

從農(nóng)藝性狀葉片的鮮重和干重來(lái)比較，則水口青天葵種質(zhì)好，其次為大新、上林、靖西和下凍青天葵，響水、荔波、恭城和南丹4個(gè)地方的青天葵種質(zhì)葉片重量最低。遺傳方面，青天葵的葉長(zhǎng)和葉寬變幅差異較大；從變異系數(shù)看，同種源家系變異受環(huán)境影響較小，說(shuō)明青天葵的葉片長(zhǎng)和葉片寬以及葉柄長(zhǎng)和葉柄直徑是相對(duì)穩(wěn)定的。

綜合青天葵藥材主成分含量、農(nóng)藝性狀和種質(zhì)遺傳性狀3方面評(píng)價(jià)青天葵藥材的種質(zhì)，根據(jù)采集9個(gè)地方的青天葵種質(zhì)資源葉片大小、鮮重、干重和折干率可知，種質(zhì)資源最好的是水口青天葵，其次為下凍和響水青天葵，排名最后的種質(zhì)是荔波和大新青天葵。

9 種青天葵不同種質(zhì)資源中，按主成分含量、農(nóng)藝性狀和遺傳性狀選育出的青天葵優(yōu)良品種“水口青天葵”，比一般青天葵藥材具有主成分含量高、生物量大的特點(diǎn)；其在治療疾病方面是否也具有比一般青天葵藥材藥用功效高、治病明顯的特點(diǎn)，還需進(jìn)一步研究。