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    谷朊粉酶解物對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)、免疫功能及小腸發(fā)育的影響

    2017-03-18 00:40:45王石鄭傳威
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年24期
    關(guān)鍵詞:斷奶仔豬免疫功能小腸

    王石+鄭傳威

    摘要:為研究谷朊粉酶解物對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)、免疫功能及小腸發(fā)育的影響,選取108頭平均體重(8.08±0.36) kg的杜×長(zhǎng)×大三元雜交仔豬,按體重相近原則隨機(jī)分為4個(gè)處理,每處理3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)9頭豬,各處理組分別飼喂基礎(chǔ)日糧(對(duì)照組)﹑添加血漿蛋白粉日糧﹑添加1.5%和3.0%谷朊粉酶解物日糧,飼喂期21 d。結(jié)果表明,(1)添加1.5%谷朊粉酶解物組的血清總蛋白和球蛋白均高于其他3組;(2)斷奶第21天,添加谷朊粉酶解物組血清GSH-Px和SOD的活性明顯高于對(duì)照組和血漿蛋白粉組;(3)斷奶第21天,對(duì)照組和血漿蛋白粉組血清T3的含量均顯著高于3.0%谷朊粉酶解物組,分別高12.4%和12.1%,而血漿蛋白粉組血清IGF-1含量顯著高于其他3組;(4)斷奶第10天,添加1.5%谷朊粉酶解物組血清lgA的含量顯著高于其他3組;(5)斷奶第21天,添加1.5%谷朊粉酶解物組的十二指腸絨毛高度最長(zhǎng),分別比對(duì)照組和血漿蛋白粉組長(zhǎng)29.0%和21.4%,而隱窩深度相反,分別比對(duì)照組和血漿蛋白粉組短21.1%和23.8%。

    關(guān)鍵詞:谷朊粉酶解物;斷奶仔豬;血清指標(biāo);免疫功能;小腸

    中圖分類號(hào):S816.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2016)24-6520-05

    DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.24.049

    谷朊粉酶解物(WGEH)是特定的工藝和生產(chǎn)條件下,把谷朊粉通過(guò)復(fù)合酶水解使其大分子轉(zhuǎn)化為小分子量的多功能型高蛋白產(chǎn)品,富含谷氨酰胺,無(wú)抗原,無(wú)生物隱患,高蛋白,低灰分,且氨基酸組成比較齊全,是營(yíng)養(yǎng)豐富和功能齊全的綠色添加劑。研究表明,谷氨酰胺可以明顯改善由于斷奶仔豬應(yīng)激所造成的損害,可阻止腸絨毛萎縮,維持腸道正常的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。維持免疫細(xì)胞的正常功能,提高抗氧化能力并降低死亡率[1]。國(guó)外用谷朊粉主要作斷奶仔豬代乳料。最新研究表明,利用谷朊粉進(jìn)行酶水解,經(jīng)過(guò)特殊生化處理制得水解蛋白飼料,無(wú)抗?fàn)I養(yǎng)因子,可促進(jìn)仔豬腸道絨毛發(fā)育,提高飼料的轉(zhuǎn)化效率,使仔豬有很高的消化率,可替代昂貴的噴霧干燥血漿蛋白(2.5%~8.0%),同時(shí)可用作犢牛的代乳料,可替代大豆分離蛋白5%~15%[2]。由于近年來(lái)的生物安全隱患,積極尋找新型飼料添加劑代替血漿蛋白粉是大勢(shì)所趨。谷朊粉酶解物是一種極具應(yīng)用前景的綠色營(yíng)養(yǎng)型小肽飼料添加劑。本試驗(yàn)研究了在實(shí)際生產(chǎn)條件下,飼糧中添加不同水平的谷朊粉酶解物對(duì)21日齡斷奶仔豬血液生化指標(biāo)、免疫指標(biāo)及小腸發(fā)育的影響。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

    選取108頭平均體重為(8.08±0.36) kg的杜×長(zhǎng)×大三元雜交健康仔豬,(23±2) d斷奶后,按體重相近原則隨機(jī)分為4個(gè)處理,每處理3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)9頭豬。

    1.2 試驗(yàn)日糧和設(shè)計(jì)

    谷朊粉酶解物由本實(shí)驗(yàn)室按特定的工藝生產(chǎn)。本試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)處理組:(1)對(duì)照組(基礎(chǔ)日糧組);(2)血漿蛋白粉組;(3)谷朊粉酶解物以1.5%替代血漿蛋白粉組中的血漿蛋白粉;(4)谷朊粉酶解物以3.0%替代血漿蛋白粉組中的血漿蛋白粉。試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平參照NRC(1998)豬營(yíng)養(yǎng)飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制(表1)。

    1.3 飼養(yǎng)管理

    試驗(yàn)在廣安集團(tuán)北徐種豬場(chǎng)試驗(yàn)基地完成,共21 d。試驗(yàn)期間豬只封閉飼養(yǎng),溫度控制在(28.0±2.5) ℃,干粉料飼喂,自由采食和飲水,按豬場(chǎng)常規(guī)管理程序進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)和免疫,并由專人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)管理。

    1.4 試驗(yàn)測(cè)定項(xiàng)目和方法

    1.4.1 血清生化指標(biāo)和血清免疫功能的測(cè)定 分別于試驗(yàn)第10天和第21天清晨,禁食狀態(tài),每圈選出2頭健康試驗(yàn)仔豬,從前腔靜脈采血10 mL,置于離心管中,室溫下傾斜靜置30 min后,3 000 r/min離心15 min,取上層血清,測(cè)定尿素氮、總蛋白、清蛋白、球蛋白、堿性磷酸酶(AKP)、甘油三酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、 超氧化物歧化酶(SOD)、豬三碘甲狀腺原氨酸(T3)、豬甲狀腺素(T4)、豬免疫球蛋白A(lgA)、lgG、lgM和豬胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)的含量。采用OlympusAU600型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中尿素氮、總蛋白、清蛋白、球蛋白、堿性磷酸酶(AKP)、甘油三酯的含量;血清SOD、ALT/GPT和GSH-Px 采用化學(xué)比色法測(cè)定,試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。血清T3、T4、lgA、lgG、lgM和IGF-1采用酶聯(lián)免疫分析測(cè)定,試劑盒購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司。

    1.4.2 小腸黏膜結(jié)構(gòu)和免疫器官指標(biāo)測(cè)定 于試驗(yàn)第21天,每圈選1頭健康仔豬屠宰,截取十二指腸,空腸和回腸中段各4 cm腸段,置于含3.8%甲醛的福爾馬林固定液中,經(jīng)脫水、包蠟、切片、HE染色后,顯微鏡拍照,測(cè)量絨毛高度和隱窩深度。

    1.5 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

    采用Spssl0.0統(tǒng)計(jì)軟件的One-way過(guò)程對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用Duncan's法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 血清生化指標(biāo)

    從表2中可以看出,在斷奶第10天,血漿蛋白粉組的堿性磷酸酶活力顯著高于其他3組,而在斷奶第21天,3.0%WGEH組的堿性磷酸酶活力顯著低于其他3組。表明隨著替換血漿蛋白粉比例的提高,堿性磷酸酶活力有降低的趨勢(shì)。血清總蛋白含量,斷奶第10天,3.0%WGEH組明顯低于其他3組;斷奶第21天,對(duì)照組明顯低于其他3組,1.5%WGEH組的總蛋白含量全期最高。斷奶應(yīng)激對(duì)白蛋白水平?jīng)]有顯著影響。球蛋白含量的變化趨勢(shì)與總蛋白相同,以1.5%WGEH組的球蛋白含量最高。斷奶第21天血清尿素氮含量各試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組。斷奶第10天3.0%WGEH組血清中的甘油三酯含量顯著低于對(duì)照組和血漿蛋白粉組,略低于1.5%WGEH組。

    2.2 血清抗氧化指標(biāo)的含量

    從表3中可以看出,斷奶第10天,3.0%WGEH組血清ALT/GPT的活性顯著高于血漿蛋白粉組,提高了33.8%。斷奶第21天時(shí),血漿蛋白粉組血清ALT/GPT的活性顯著低于其他3組。斷奶第21天不同水平WGEH組血清GSH-Px的活性均顯著高于對(duì)照組和血漿蛋白粉組,以3.0%WGEH組血清GSH-Px的活性最高,分別比對(duì)照組和血漿蛋白粉組高39.8%和41.1%。斷奶第21天不同水平WGEH組血清SOD活性均顯著高于對(duì)照組和血漿蛋白粉組,以3.0%WGEH組血清SOD的活性最高,分別比對(duì)照組和血漿蛋白粉組高22.1%和14.7%。斷奶第10天,各組血清GSH-Px和SOD活性無(wú)顯著差異。

    2.3 血清T3、T4和IGF-1的含量

    從表4可以看出,在斷奶第21天,對(duì)照組和血漿蛋白粉組血清T3含量均顯著高于3.0%WGEH組,分別高12.4%和12.1%。在斷奶第10天和第21天,均以1.5%WGEH組血清T4含量最高,但與其他3組間差異不顯著。斷奶第21天血漿蛋白粉組IGF-1的含量顯著高于其他3組,分別比對(duì)照組、1.5%WGEH組、3.0%WGEH組高30.3%、37.5%、37.5%。

    2.4 血清免疫指標(biāo)

    從表5可以看出,斷奶第10天,1.5%WGEH組血清lgA含量顯著高于其他3組,分別比對(duì)照組、血漿蛋白粉組、3.0%WGEH組高22.2%、14.2%、18.9%。斷奶第21天,1.5%WGEH組血清lgA含量高于其他3組,但差異不顯著。斷奶第10天和第21天1.5%WGEH組血清lgG含量均高于其他3組,但差異不顯著。斷奶第10天,1.5%WGEH組血清lgM的含量顯著高于對(duì)照組和血漿蛋白粉組,分別高12.1%和7.7%。斷奶第21天,1.5%WGEH組血清lgM的含量顯著高于對(duì)照組,高20.0%。

    2.5 小腸黏膜結(jié)構(gòu)

    從表6可以看出,斷奶第21天,不同水平WGEH組十二指腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組和血漿蛋白粉組,以1.5%WGEH組絨毛高度最長(zhǎng),分別比對(duì)照組和血漿蛋白組高29.0%和21.4%;而隱窩深度則相反,添加酶解物組明顯比對(duì)照組和血漿蛋白組短,以1.5%WGEH組隱窩深度最短,分別比對(duì)照組和血漿蛋白組短21.1%和23.8%。1.5%WGEH組空腸絨毛高度顯著高于血漿蛋白組和3.0%WGEH組,與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異。1.5%WGEH組回腸隱窩深度比其他3組要短,但差異均不顯著。

    3 討論

    3.1 對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

    堿性磷酸酶(AKP)是一種能催化多種磷脂類化合物水解釋放無(wú)機(jī)磷的酶,在骨骼形成以及脂肪形成的過(guò)程中起著重要作用。錢(qián)利純等[3]研究表明,21日齡哺乳仔豬的堿性磷酸酶活性水平較高,斷奶10 d其活性明顯下降,添加谷氨酰胺對(duì)血清堿性磷酸酶活性無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明,添加谷朊粉酶解物替換血漿蛋白粉后,堿性磷酸酶活性降低,可能是斷奶應(yīng)激降低了堿性磷酸酶的活性,其機(jī)理尚待探討。血清總蛋白水平是反映肝臟合成蛋白能力的指標(biāo),錢(qián)利純等[3]試驗(yàn)結(jié)果顯示斷奶應(yīng)激降低了血清總蛋白水平,可能與斷奶后的營(yíng)養(yǎng)水平降低及氨基酸不平衡相關(guān)。添加谷氨酰胺對(duì)提高血清總蛋白水平有一定作用,但差異并不明顯。本試驗(yàn)結(jié)果表明添加1.5%WGEH組血清總蛋白和球蛋白水平均高于其他各組,說(shuō)明谷朊粉酶解物對(duì)提高血清總蛋白水平有一定作用,這組的氨基酸更加平衡。血清白蛋白是衡量肝臟功能和機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀況的重要指標(biāo)。錢(qián)利純等[3]試驗(yàn)顯示,添加谷氨酰胺對(duì)血清白蛋白水平無(wú)顯著影響,與本試驗(yàn)研究結(jié)果相同。Malmolf[4]、Holecek[5]認(rèn)為血清尿素氮濃度與動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況相關(guān),氨基酸平衡良好時(shí),血清尿素氮濃度下降。本試驗(yàn)結(jié)果顯示斷奶應(yīng)激提高了血清尿素氮的水平,添加1.5%谷朊粉酶解物相對(duì)血漿蛋白粉組和3.0%WGEH組在一定程度上降低了血清尿素氮濃度。谷氨酰胺可以通過(guò)脫氨基和轉(zhuǎn)氨基過(guò)程合成多種氨基酸,促進(jìn)機(jī)體的蛋白合成能力[6],因此添加谷朊粉酶解物可以在一定程度上降低血清尿素氮的水平。

    3.2 對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

    ALT/GPT是氨基酸之間的轉(zhuǎn)氨酶,是蛋白質(zhì)代謝過(guò)程中的重要酶,其催化谷氨酸與丙氨酸之間的氨基轉(zhuǎn)移。丙氨酸和谷氨酰胺是肌蛋白分解所產(chǎn)生氨的主要運(yùn)出形式,而谷氨酸是機(jī)體α-氨基代謝池。據(jù)楊公社等[7]的研究,血液中GPT的活性與長(zhǎng)白豬的日增重、飼料轉(zhuǎn)化率及胴體瘦肉率呈正相關(guān)。陳靜等[8]研究表明,血清中GPT的活性隨著谷氨酰胺添加量的增加而升高。與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致,隨著谷朊粉酶解物替代血漿蛋白粉的增加,血清ALT/GPT的活性也增加。動(dòng)物機(jī)體內(nèi)SOD和GSH-Px在清除自由基、氧化損傷和維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)方面起著重要作用。在應(yīng)激狀態(tài)下,SOD、GSH-Px活性降低,而血液中脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA含量升高[9]。席鵬彬等[10]研究表明,隨飼糧Gln二肽添加水平提高,斷奶后第10天和第21天血清GSH-Px和SOD活性以線性或二次曲線方式升高,說(shuō)明飼糧中Gln二肽可改善仔豬斷奶后抗氧化能力,防止或緩解應(yīng)激造成的過(guò)氧化損傷,有利于仔豬生長(zhǎng)。本試驗(yàn)在斷奶第21天,添加谷朊粉酶解物組血清GSH-Px和SOD活性明顯高于對(duì)照組和血漿蛋白粉組,而在第10天時(shí)無(wú)顯著差異。

    3.3 對(duì)斷奶仔豬血清T3、T4和IGF-1的影響

    甲狀腺激素(T3、T4)可調(diào)節(jié)糖、脂肪、蛋白質(zhì)的代謝,促進(jìn)小腸吸收單糖和使糖原分解,血糖濃度升高;促進(jìn)消化腺和腎上腺皮質(zhì)激素分泌;增強(qiáng)腎上腺素對(duì)糖代謝的作用和促進(jìn)胰島素降解。錢(qián)利純等[3]研究表明,日糧添加谷氨酰胺對(duì)T3、T4水平無(wú)明顯影響,但對(duì)生長(zhǎng)激素水平有一定的提高作用,斷奶第10天和第20天分別比對(duì)照組提高了12.18%(P>0.05)和14.93%(P>0.05),差異不顯著。與本試驗(yàn)斷奶第10天時(shí)的研究結(jié)果相一致,但是斷奶第21天對(duì)照組和血漿蛋白組血清T3的含量明顯比3.0%WGEH組高,分別高12.4%和12.1%。IGF-Ⅰ不僅對(duì)下丘腦和垂體具有反饋?zhàn)饔?,還能直接促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)[11]。方娜等[12]研究表明,添加谷朊粉酶解物對(duì)小鼠的類胰島素生長(zhǎng)因子-I提高顯著,添加水平以750 mg/(kg飼糧·d)作用最明顯。本試驗(yàn)在斷奶仔豬上的研究表明,斷奶第21天血漿蛋白粉組IGF-1的含量明顯比對(duì)照組和添加谷朊粉酶解物組要高。

    3.4 對(duì)斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

    免疫球蛋白的分泌是一個(gè)復(fù)雜的代謝過(guò)程,也是免疫系統(tǒng)抵御外來(lái)抗原的重要過(guò)程之一。Crawford等[13]研究認(rèn)為超過(guò)生理濃度的谷氨酰胺可明顯提高抗體的合成和分泌,而這種作用是其他氨基酸所不能替代的。尹兆正[14]研究表明,在日糧中添加1%谷氨酰胺,斷奶10日齡,試驗(yàn)組血清IgG和IgM水平分別比對(duì)照組高34.67%(P<0.05)和32.58%(P<0.05);斷奶20日齡,試驗(yàn)組血清IgA和IgM水平分別比對(duì)照組高15.22%(P<0.05)和30.66%(P<0.05)。本試驗(yàn)中,添加1.5%WGEH組血清IgA、IgG和IgM水平高于其他各組,表明適當(dāng)添加谷朊粉酶解物可以有效緩解斷奶應(yīng)激對(duì)免疫系統(tǒng)造成的抑制作用,原因可能是因?yàn)楣入梅勖附馕锏奶砑涌梢杂行ЬS持免疫細(xì)胞分泌物質(zhì)的能力,進(jìn)而提高免疫能力。

    3.5 小腸黏膜形態(tài)的影響

    研究表明,在許多物種(包括豬)中,腸道都是利用谷氨酰胺和谷氨酸最多的器官,而Gln和Glu也是腸道主要的能源物質(zhì)[15,16]。斷奶應(yīng)激對(duì)仔豬腸黏膜形態(tài)有很大影響,表現(xiàn)為小腸黏膜絨毛高度下降、 隱窩加深、腸絨毛成熟細(xì)胞數(shù)量減少等[17]。Wu等[1]和劉濤等[18]的試驗(yàn)結(jié)果表明,日糧中的谷氨酰胺對(duì)仔豬小腸細(xì)胞增殖和維持腸道正常形態(tài)具有重要作用。本試驗(yàn)結(jié)果與上述結(jié)果一致,添加谷朊粉酶解物可以提高小腸絨毛高度,降低其隱窩深度。

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