阿哌沙班片的含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定分析

高媛

哈藥集團(tuán)制藥總廠 150000

阿哌沙班片的含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定分析

高媛

哈藥集團(tuán)制藥總廠 150000

目的：通過科學(xué)的方式建立阿哌沙班片這種藥物之中含量以及相關(guān)物質(zhì)的對(duì)應(yīng)檢測(cè)方法。方法：在研究的過程之中通過對(duì)反相類型的高效液相色譜這一技術(shù)的使用，來對(duì)藥品進(jìn)行相應(yīng)的含量檢測(cè)。在檢測(cè)過程之中設(shè)定流動(dòng)相為零點(diǎn)零五摩爾每升的乙腈溶液，以及磷酸二氫鉀溶液，并將試驗(yàn)過程之中的液相流動(dòng)速度設(shè)定為每分鐘一毫升的流動(dòng)速度，在試驗(yàn)之中相應(yīng)檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為293nm波長(zhǎng)，整個(gè)試驗(yàn)過程之中的柱溫都要保持在二十五攝氏度。結(jié)果：通過讓阿哌沙班片這一藥物在設(shè)定色譜條件之下運(yùn)行，能夠使得本次試驗(yàn)所用藥品之中的主要成分和雜質(zhì)達(dá)到良好的分離效果。在本次試驗(yàn)之中阿哌沙班片這一藥品的質(zhì)量在四點(diǎn)三微克每升到四十五微克每升之間的時(shí)候，其和相應(yīng)的數(shù)據(jù)峰面積能夠呈線性關(guān)系；并且在后續(xù)的研究過程之中，精密度數(shù)值、穩(wěn)定性數(shù)值、重復(fù)性試驗(yàn)數(shù)值相應(yīng)的RSD均小于1.1%；阿哌沙班片這一藥品在進(jìn)行加樣過程之中的回收率能夠達(dá)到99.93%，RSD數(shù)據(jù)為0.3%。結(jié)論：經(jīng)過科學(xué)的分析以及嚴(yán)謹(jǐn)?shù)谋容^，最終確定通過這種試驗(yàn)方式進(jìn)行測(cè)定，不但能夠具有良好的質(zhì)量測(cè)定效果，還能夠具有良好的靈敏度，從而也就能夠進(jìn)一步的促進(jìn)阿哌沙班片這一藥品在質(zhì)量控制方面的測(cè)定效果。

制藥；藥物含量；測(cè)定；阿哌沙班片

現(xiàn)階段人們?cè)谙鄳?yīng)的生活水平方面、飲食條件等方面都有了跳躍式的發(fā)展，使得人們生活之中的各個(gè)方面都有較為良好的保證，但與此同時(shí)，人們也要能夠充分的認(rèn)識(shí)到，在現(xiàn)階段仍存在著眾多的疾病，影響著人們的生活。在對(duì)這些疾病進(jìn)行治療的過程之中，為了能達(dá)到良好的治療效果，醫(yī)藥領(lǐng)域的研究人員成功的開發(fā)出了阿哌沙班，商品名為艾樂通，屬于口服選擇性活化Xa因子抑制劑，為全球第三代口服抗凝藥。該藥由輝瑞公司與百時(shí)美施貴寶公司聯(lián)合開發(fā)研制，2012年通過美國(guó)食品與藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)上市用于降低非瓣膜性房顫患者的卒中和系統(tǒng)性栓塞發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，現(xiàn)有2.5mg和5mg兩種片劑規(guī)格。相關(guān)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，血栓栓塞性疾病具有高風(fēng)險(xiǎn)、高死亡率的特點(diǎn)。在該藥批準(zhǔn)上市前，已有華法林、達(dá)比加群、利伐沙班等治療相關(guān)疾病的藥物。該藥具有高選擇性、高安全性等特點(diǎn)，預(yù)計(jì)2017年銷售額能達(dá)到42億美元，具有極高的市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)價(jià)值。目前，國(guó)內(nèi)未見關(guān)于該藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)報(bào)道，因此，本試驗(yàn)建立了反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測(cè)定該藥的含量及有關(guān)物質(zhì)，為建立阿哌沙班片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1.試驗(yàn)方式以及試驗(yàn)結(jié)果

1.1 色譜條件的設(shè)定，色譜柱：WatersXBridgeShieldRP18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（用50%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至3.0）（20∶80，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：293nm；流速：1.0ml/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μl。

1.2 試驗(yàn)所用溶液的制備，對(duì)照作用溶液的制備：在制備的過程之中，首先需要實(shí)驗(yàn)人員能夠精確的稱量出阿哌沙班片這一藥品 5毫克，在此基礎(chǔ)上技術(shù)人員可以通過使用超聲波促進(jìn)這一物質(zhì)的溶解，并最終制成含量為零點(diǎn)零二毫克每毫升的藥物溶液。

供試品作用溶液的制備：在進(jìn)行制備的時(shí)候，拿取兩片本次試驗(yàn)所用的阿哌沙班片藥品，并將這些藥品通過研缽?fù)耆姆鬯?，?jīng)過反復(fù)研磨之后從研缽之中稱量出大約五毫克的藥品，之后將這些藥品放置到一百毫升大小的容量瓶之中，并通過超聲波對(duì)這溶液進(jìn)行震蕩處理，保證藥品能夠在溶液之中混合均勻，之后還需要技術(shù)人員能夠通過過濾膜對(duì)這一溶液進(jìn)行過濾。

空白組溶液：在制備空白對(duì)照組溶液的過程之中，需要技術(shù)人員能夠按照試驗(yàn)需求將空白輔料放置到容量為一百毫升的容量瓶之中。再加入流動(dòng)相稀釋至刻度，超聲溶解，濾過（0.50μm濾膜），取續(xù)濾液，即得。

1.3 專屬性試驗(yàn)

分別取對(duì)照品、供試品和空白樣品溶液適量，各精密量取10μl，按色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。色譜基線平穩(wěn)，各色譜峰分離度＞1.5，理論板數(shù)以阿哌沙班計(jì)＞3500，且空白輔料對(duì)阿哌沙班測(cè)定無干擾。

1.4 線性關(guān)系考察

取約5mg阿哌沙班對(duì)照品，精密稱定，置于100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，超聲（功率：200W，頻率：40kHz）使完全溶解，分別精密量取0.2、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5ml置于10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成梯度濃度溶液，按照色譜條件依次進(jìn)樣，記錄色譜圖。以阿哌沙班峰面積（y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為y＝2.735×104x－1.127 ×10（3r＝0.9994）。結(jié)果表明，阿哌沙班的質(zhì)量濃度在 4.30～45.00 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

1.5 精密度試驗(yàn)

取阿哌沙班對(duì)照品溶液適量，按色譜條件連續(xù)測(cè)定峰面積6次。結(jié)果，阿哌沙班峰面積和其保留時(shí)間的RSD分別為0.038%和0.024 %（n＝6），表明儀器的精密度良好。

1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，于25℃下放置0、2、4、6、8h時(shí)進(jìn)樣分析，測(cè)定阿哌沙班的峰面積。結(jié)果，阿哌沙班峰面積和保留時(shí)間的RSD分別為1.07%和1.10%（n＝5），表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

1.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取阿哌沙班片樣品（批號(hào)：20140202）細(xì)粉適量，共5份，分別按“1.2”項(xiàng)下條件制備供試品溶液，按色譜條件進(jìn)樣分析，平行操作5次，測(cè)定含量。結(jié)果，阿哌沙班含量的RSD為0.41%（n＝5），表明本方法的重復(fù)性良好。

1.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取9份已知含量的阿哌沙班樣品細(xì)粉，置于100ml量瓶中，每3份分別加入4、5、6mg阿哌沙班對(duì)照品，再添加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，得 3組不同濃度的供試品溶液，按色譜條件注入HPLC儀測(cè)定，計(jì)算回收率。回收率為99.93%，RSD為0.3%，回收率符合要求。

1.9 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

每批阿哌沙班片分別取 5片置于研缽中研細(xì)、混勻，取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿哌沙班5mg），置于10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，超聲溶解后制成每1ml中含0.5mg阿哌沙班的溶液，濾過，收集續(xù)濾液，即為供試品溶液。按色譜條件注入高效液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果符合規(guī)定。

2.討論

阿哌沙班作為第三個(gè)上市的新一代口服抗凝藥，能有效地預(yù)防血栓，用于接受過髖部或膝部置換手術(shù)患者的血栓預(yù)防，其安全性和有效性均超出同類藥物，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品審評(píng)中心查詢，當(dāng)前已有數(shù)十家醫(yī)藥企業(yè)對(duì)其進(jìn)行原料藥以及制劑的仿制申報(bào)。所以建立該藥物完善的質(zhì)量控制方法具有很好的現(xiàn)實(shí)意義。

色譜檢測(cè)過程選擇 200～400nm波長(zhǎng)進(jìn)行光譜掃描，發(fā)現(xiàn)在293nm檢測(cè)波長(zhǎng)附近阿哌沙班和相關(guān)成分均有最大吸收，因此確定本試驗(yàn)檢測(cè)波長(zhǎng)為293nm。

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，柱溫25℃時(shí)拖尾因子為0.89，柱溫30℃時(shí)拖尾因子則為1.53。可見柱溫升高會(huì)引起色譜峰的拖尾，對(duì)測(cè)定其有關(guān)物質(zhì)可能會(huì)產(chǎn)生不同程度的影響。為確保整個(gè)試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，測(cè)定過程中應(yīng)嚴(yán)格控制柱溫參數(shù)，防止出現(xiàn)拖尾影響。

綜上所述，本試驗(yàn)建立的方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高，適用于阿哌沙班片的含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定，對(duì)建立阿哌沙班片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)有一定的參考價(jià)值。

[1]李姝雅，杜萬良，王擁軍.新型抗凝藥物在心腦血管疾病中的臨床評(píng)價(jià)[J].中國(guó)新藥雜志，2012，21（11）：1191.

[2]張先龍.新型口服抗凝藥物阿哌沙班[J].中華關(guān)節(jié)外科雜志，2014，8（4）：543.

[3]周建光，周穎奇.新型口服抗凝藥的特點(diǎn)和臨床研究[J].臨床藥物治療雜志，2013，11（5）：8

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1672-5018（2017）02-010-1