木鱉子中絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯測(cè)定*

鄭 蕾，申旭霽，張 寒，張 彥，汪興軍

(西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院 藥物研究所，陜西 西安 710021)

木鱉子為葫蘆科植物木鱉Momordicacochinchinensis(Lour.)Spreng.的干燥成熟種子，具有散結(jié)消腫、攻毒療瘡之功效[1]。始載于宋《開寶本草》，是蒙醫(yī)的習(xí)用藥材，主要含脂肪酸類[2]、皂苷類[3]、木鱉子素[4]、α-菠菜甾醇、木鱉子酸[5]等。蒙醫(yī)用于治療食欲不振、惡心、偏頭疼等癥見希拉癥[6]，中醫(yī)多外用治療癬[7]、痔瘡[8]等，現(xiàn)代研究顯示其具有抗腫瘤[9-10]、抗炎[11]、抗病毒等作用。木鱉子是一味毒性藥材，多供外用，很少內(nèi)服，內(nèi)服多進(jìn)行相應(yīng)的炮制后再入方劑，主要有兩種炮制方法，制霜[1]和去殼[12]。目前，對(duì)木鱉子炮制方法及原理的研究報(bào)道較少。絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯是木鱉子皂苷降解后的次級(jí)苷[13]，作者期望通過對(duì)木鱉子種殼和種仁中絲石竹皂苷-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯進(jìn)行含量測(cè)定，并以此為基礎(chǔ)為木鱉子藥材炮制方法研究提供支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

木鱉子藥材：購(gòu)買自西安天昦中藥材市場(chǎng)，經(jīng)生藥教研室張寒副教授鑒定為木鱉子；絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯：批號(hào)111956-201301，純度為97.5%，中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇：色譜純，市售；其余試劑均為分析純，市售；實(shí)驗(yàn)所用水為超純水。

電子分析天平：QVINTIX-1CN，賽的利斯科學(xué)儀器有限公司；恒溫水浴箱：HSY2-SP，北京市永光明醫(yī)療儀器廠；超純水機(jī)：Micro pure standard，賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司；超聲清洗器：KQ-250B，昆明市超聲儀器有限公司；高效液相色譜儀：Agilent 1220，安捷倫科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流動(dòng)相：甲醇-φ(甲酸)=0.2%水溶液(體積比為78∶22)，流速：1 mL/min；UV檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm，柱溫：室溫，進(jìn)樣量：10 μL。在該色譜條件下，絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯與木鱉子中其它成分得到較好的分離，無(wú)干擾，專屬性強(qiáng)，結(jié)果見圖1。

t/minb圖1 絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯對(duì)照品(a)和木鱉子供試品(b)色譜圖

1.2.2 對(duì)照品溶液配制

精密稱取絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品約10 mg，置于10 mL的容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，制成1 mL含1.03 mg的溶液，即得。

1.2.3 供試品溶液配制

取木鱉子仁粗粉2.0 g，精密稱定于濾紙筒中，置索氏提取器中，加石油醚(60～90 ℃)-氯仿(體積比為1∶1)80 mL，回流提取1 h，濾過，棄去濾液，濾渣揮干溶劑，轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為60%甲醇60 mL超聲提取1 h，超聲溫度40 ℃，濾過，濾液蒸干。殘?jiān)铀?0 mL溶解并轉(zhuǎn)移至具塞試管中，加濃硫酸0.6 mL，搖勻，閉塞。置沸水浴加熱2 h，取出，放冷，濾過。棄去濾液，試管中沉淀加甲醇少許洗至10 mL量瓶中，濾紙上的沉淀加甲醇8 mL，洗至同-10 mL量瓶中，加硫酸一滴，調(diào)pH=2；密塞，60 ℃恒溫水浴4 h，取出，放冷，加甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 方法學(xué)考察

根據(jù)《中國(guó)藥典》2015版(四部)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則，考察樣品的線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、加樣回收及含量測(cè)定等。

2.1.1 線性關(guān)系考察

精密量取上述對(duì)照品貯備液5 mL，定容于10 mL量瓶中，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.515 mg/mL的溶液；再吸取該溶液5 mL，定容于10 mL量瓶中，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.258 mg/mL的溶液，依次稀釋制備成質(zhì)量濃度分別為0.129、0.064 4 mg/mL的系列對(duì)照品溶液。將上述對(duì)照品溶液按1.2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2。得到的線性回歸方程為：Y=2 769.1X+126.48，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7。結(jié)果表明絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯在6.44×10-2～1.03 mg/mL線性關(guān)系良好。

ρ/(mg·mL-1)圖2 絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.1.2 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取質(zhì)量濃度為0.129 mg/mL的絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD為1.97%。

2.1.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取相同批次的木鱉子仁粗粉6份，按1.2.3方法平行制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)分別為0.301%，0.305%，0.297%，0.305%，0.303%，0.299%，RSD為1.06%(n=6)。

2.1.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

按1.2.3方法制備供試品溶液，將供試品溶液分別貯存在室溫與冰箱冷藏室(4 ℃)中，在0、1、2、3、5、7 d分別平行測(cè)定2次w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)。絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯各時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均未超過0 d質(zhì)量分?jǐn)?shù)值±5.0%，表明供試品溶液在7 d內(nèi)穩(wěn)定性良好，穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.5 加樣回收實(shí)驗(yàn)

分別精密稱取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.305%的樣品6份，每份約1 g，分別精密加入絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯對(duì)照品溶液(1.53 mg/mL)1 mL，即1.53 mg，按1.2.3方法制備溶液，測(cè)定其峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.30%，RSD為1.02%(n=6)。表明該方法的回收率良好，詳見表2。

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2 絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯測(cè)定

按擬定的含量測(cè)定方法測(cè)定3批木鱉子種仁及種殼中w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)，結(jié)果見表3。

表3 木鱉子中w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)測(cè)定結(jié)果

3 結(jié) 論

研究發(fā)現(xiàn)絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯在木鱉子仁中含量較小，木鱉子殼中未檢測(cè)到。通過前處理工藝的水解及甲醇解后木鱉子仁中w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)≈0.3%，而木鱉子殼中仍無(wú)法檢測(cè)到。

采用本研究建立的方法，測(cè)定3批木鱉子仁、木鱉子殼中w(絲石竹皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯)，結(jié)果顯示此方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)便，可作為木鱉子炮制工藝研究中質(zhì)量控制的方法。

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