乙肝前S1抗原在乙肝診療中的臨床價值以及與HBV-DNA相關(guān)性研究

陳華宏，陳 謀，洪潔華，林玉葉

(揭陽市人民醫(yī)院檢驗科，廣東揭陽522000)

乙肝前S1抗原在乙肝診療中的臨床價值以及與HBV-DNA相關(guān)性研究

陳華宏，陳 謀，洪潔華，林玉葉

(揭陽市人民醫(yī)院檢驗科，廣東揭陽522000)

目的研究慢性乙肝患者血清中乙肝前S1抗原（PreS1－Ag）、HBeAg、HBV－DNA之間相關(guān)性，探討其在慢性乙型肝炎病情監(jiān)測上的臨床價值。方法⑴分析不同載量HBV－DNA慢性乙型肝炎患者中PreS1－Ag、HBeAg陽性率的差異；⑵根據(jù)HBeAg的檢測結(jié)果，把1219個病例分為陽性組和陰性組，探討兩組中PreS1－Ag、HBV－DNA之間陽性率的差別。結(jié)果⑴PreS1－Ag和HBe－Ag陽性率都隨著HBV－DNA載量的增加而增加，且PreS1－Ag陽性率比HBe－Ag陽性率高；⑵在HBe－Ag陽性的病例中，PreS1－Ag和HBV－DNA的陽性率分別為89.42%、87.76%，兩者之間無統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=1.55，P＞0.05），而在HBe－Ag陰性的病例中，PreS1－Ag和HBV－DNA的陽性率分別為60.4%、52.4%，兩者之間有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=247.6，P＜0.01）。結(jié)論HBV－PreS1抗原在對乙肝病毒復(fù)制及傳染性的提示作用中與HBV－DNA有較高的相關(guān)性，有效補充了目前乙肝診療以HBV－DNA和HBeAg為主要的檢測手段，聯(lián)合檢測能更全面判斷體內(nèi)乙肝病毒的活躍程度及變異狀況，在慢性乙肝診療中有著較高的臨床價值，值得臨床推廣。

慢性乙型肝炎；PreS1－Ag；HBV－DNA；HBe－Ag

慢性乙型肝炎（CHB）是指乙肝病毒檢測為陽性，病程超過半年或發(fā)病日期不明確而臨床有慢性肝炎表現(xiàn)者。其病理機制錯綜復(fù)雜，易形成慢性狀態(tài)，與肝硬化，肝癌關(guān)系密切，是一種發(fā)病率高，難治愈，易反復(fù)的常見病，監(jiān)測并清除乙肝病毒是慢性乙型肝炎（CHB）治療的關(guān)鍵。長期以來臨床主要通過檢測HBV－DNA和HBeAg來監(jiān)測體內(nèi)乙肝病毒的復(fù)制狀況和抗病毒治療療效。但是從近期的研究中顯示，即使以上兩個指標(biāo)結(jié)果均為陰性，也不能完全排除乙肝病毒在體內(nèi)已停止復(fù)制的可能。另外由于檢測HBV－DNA所依賴的基因擴增技術(shù)（PCR），其實驗條件高，設(shè)備和試劑昂貴，目前能夠開展的醫(yī)療單位非常少[1]，且基因擴增技術(shù)（PCR）技術(shù)受病毒滴度、實驗室污染等因素影響易產(chǎn)生假陰性或假陽性結(jié)果，因此迫切需要尋找更加簡單快捷，同時特異性和敏感性好的檢測指標(biāo)來協(xié)助慢性乙肝的診斷和治療。PreS1－Ag作為乙肝dane顆粒的一種衣殼蛋白，含有肝細(xì)胞膜受體，具有很強的免疫原性，在乙肝病毒感染肝細(xì)胞和機體免疫應(yīng)答中起著重要的作用[2，3]。研究表明，PreS1－Ag是反映乙肝病毒感染、裝配、復(fù)制的重要指標(biāo)[4]，再加上其檢測方法簡單，結(jié)果穩(wěn)定，無需大型儀器等優(yōu)點，正受到臨床越來越多的關(guān)注[5]。

1 材料與方法

1.1 一般資料選擇自2015年6月到2016年9月在廣東省揭陽市人民醫(yī)院進(jìn)行慢性乙肝治療的患者1219例，其中男性患者646例，女性患者573例，年齡在15～68歲之間，平均年齡是39.1歲。乙型肝炎診斷依據(jù)為中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會和中華醫(yī)學(xué)會感染病分會聯(lián)合發(fā)布的2010版《中國乙型肝炎防治指南》的標(biāo)準(zhǔn)。所有參與研究的患者均屬自愿。

1.2 方法所有標(biāo)本均在清晨空腹抽血3ml送檢，于37度水浴10min，離心后吸取血清上機檢測PreS1－Ag、HBV－DNA和“乙肝二對半”三個（組）項目。其中，PreS1－Ag和“乙肝二對半”二個項目均采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)進(jìn)行檢測，使用上?？迫A生物技術(shù)有限公司試劑，儀器為Tecan前處理及FAME全自動酶聯(lián)免疫分析儀，所有實驗均上機操作，實行標(biāo)準(zhǔn)化管理，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性；HBVDNA采用基因擴增技術(shù)（PCR）進(jìn)行定量檢測，使用中山大學(xué)達(dá)安基因股份公司DA7600實時熒光定量PCR擴增儀，試劑為中山大學(xué)達(dá)安基因股份公司生產(chǎn)的HBV－DNA PCR試劑盒，所有實驗嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析將HBV－DNA陽性的病例根據(jù)拷貝數(shù)從低到高分成四組，分別統(tǒng)計出各組中PreS1－Ag和HBe－Ag兩者各自的陽性率；再將所有乙型肝炎研究對象分為HBe－Ag陽性和陰性兩組，統(tǒng)計出兩組中PreS1－Ag和HBV－DNA各自的陽性例數(shù)；最后采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理相關(guān)的數(shù)據(jù)，用四格表卡方檢驗計數(shù)資料，應(yīng)用χ2檢驗組間差異，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同HBV－DNA載量中PreS1－Ag、HBe－Ag的陽性率比較在819例HBV－DNA陽性患者中，PreS1－Ag的陽性率高達(dá)89.0%，而HBe－Ag的陽性率僅為55.2%，可見相對于HBe－Ag，PreS1－Ag和HBV－DNA在陽性率方面有著更高的吻合率；另外在500～＜103、104～105、106～107、≥108從低到高的四組HBV－DNA載量中，PreS1－Ag對應(yīng)的陽性率分別為76.2%、83.8%、91.2%、100%，而HBe－Ag對應(yīng)的陽性率是27.6%、32.1%、57.2%、98.0%，這顯示隨著HBV－DNA載量的不斷增加，PreS1－Ag和HBe－Ag的陽性比例都逐漸增大[6]，表明兩者與HBV－DNA均有明顯的相關(guān)性；同時在每個載量組中，PreS1－Ag的陽性率都明顯高于HBe－Ag的陽性率，這也進(jìn)一步說明HBV－PreS1抗原和HBVDNA的吻合度明顯優(yōu)于HBe－Ag。見表1，圖1。

表1 不同HBV-DNA載量中PreS1-Ag、HBe-Ag的陽性率比較[n(%)]

圖1 不同HBV-DNA載量PreS1-Ag和HBe-Ag陽性率對比

2.2 HBe－Ag陰、陽性與PreS1－Ag、HBV－DNA的檢出率比較表2可見在所統(tǒng)計的總共1219例慢性乙肝患者中，PreS1－Ag和HBV－DNA的陽性率分別為72.68%、67.19%，在482例HBe－Ag陽性的病例中，PreS1－Ag和HBV－DNA的陽性率分別為89.42%、87.76%，兩者之間無統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=1.55，P＞0.05），見表3；而在737例HBe－Ag陰性的病例中，PreS1－Ag和HBV－DNA的陽性率分別為60.4%、52.4%，兩者之間有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=247.6，P＜0.01），見表4。

表2 HBe-Ag陰、陽性與PreS1-Ag、HBV-DNA的檢出率比較

表3 HBe-Ag陽性組PreS1-Ag和HBV-DNA的陽性率關(guān)系

表4 HBe-Ag陰性組PreS1-Ag和HBV-DNA的陽性率關(guān)系

3 討論

乙型肝炎病毒（HBV）的感染是一個在全球范圍內(nèi)都得到高度關(guān)注的健康話題，它也是導(dǎo)致患者慢性肝臟問題的最常見病因。據(jù)統(tǒng)計，在我國大概有10%的HBV攜帶患者，其中約有25%的的患者最終會發(fā)展成為慢性乙肝、原發(fā)性的肝癌以及肝硬變。目前，臨床上對HBV病毒的主要檢查方法是進(jìn)行“乙肝二對半”的檢測，同時再通過檢測HBV－DNA來監(jiān)測患者體內(nèi)的乙肝病毒復(fù)制狀況。但因檢測HBV－DNA所依賴的基因擴增技術(shù)（PCR），其實驗條件要求高，同時所使用的儀器設(shè)備及實驗試劑都比較昂貴，導(dǎo)致其在基層單位的普及度不廣泛，從而在一定程度上影響了乙肝防治工作的開展進(jìn)行。近年來我院開展了HBVPreS1抗原的檢測，在協(xié)助慢性乙肝的診斷治療中取得了良好的效果。

本文的研究結(jié)果顯示，在表1和圖1所統(tǒng)計的從低到高的四組HBV－DNA載量中，PreS1－Ag和HBe－Ag兩者對應(yīng)的陽性率分別為76.2%、27.6%；83.8%、32.1%；91.2%、57.2%；100%、98.0%，即隨著HBV－DNA拷貝數(shù)的不斷增加，PreS1－Ag和HBe－Ag的陽性比例都逐漸增大[6]，提示兩者均與HBV－DNA存在正相關(guān)[7]，這也說明PreS1－Ag、HBe－Ag和HBV－DNA三者在監(jiān)測乙肝病毒復(fù)制方面有一致性；同時我們也觀察到，在全部819例HBV－DNA陽性患者中，PreS1－Ag和HBe－Ag的陽性率分別為89.0%、55.2%，可見無論在總的HBVDNA陽性患者中，還是細(xì)分到各個不同HBVDNA載量組中，PreS1－Ag的陽性率都要明顯高于HBe－Ag的陽性率，這也說明PreS1－Ag與HBVDNA的相關(guān)性優(yōu)于HBe－Ag，其在反映病毒復(fù)制和傳染性上比HBe－Ag更有價值，可彌補因乙肝病毒C區(qū)缺失而致HBe－Ag不表達(dá)所造成的診斷和治療困難。

表2和表3結(jié)果顯示，在所統(tǒng)計的總1219例慢性乙肝患者中，PreS1－Ag和HBV－DNA的陽性率分別為72.68%、67.19%，兩者的陽性率接近，尤其是在HBe－Ag陽性的標(biāo)本中，PreS1－Ag和HBVDNA的陽性率分別高達(dá)為89.42%、87.76%（χ2= 1.55，P＞0.05），兩者之間無統(tǒng)計學(xué)差異[8]，顯示在HBe－Ag陽性患者中，兩者對于監(jiān)測乙肝病毒復(fù)制方面有高度的一致性，即當(dāng)患者HBe－Ag和PreS1－Ag同時呈陽性時，直接提示乙肝病毒在該體內(nèi)復(fù)制活躍，可見，PreS1－Ag作為判斷體內(nèi)乙肝病毒復(fù)制的新標(biāo)志，在監(jiān)測乙肝病毒感染和復(fù)制中有重要價值。

表4結(jié)果則顯示在HBe－Ag陰性的病例中，PreS1－Ag和HBV－DNA的陽性率分別為60.4%、52.4%，兩者之間有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=247.6，P＜0.01），這說明PreS1－Ag雖然對于部分因為乙肝病毒C區(qū)基因變異而導(dǎo)致HBe－Ag檢測呈陰性的乙肝患者的診斷治療有重要意義，但在監(jiān)測病毒復(fù)制方面，PreS1－Ag并不能完全代替HBV－DNA[9]，因為相對于作為最直接的分子生物學(xué)指標(biāo)的HBV－DNA[10]，PreS1－Ag是乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物，其陰陽性轉(zhuǎn)化會滯后于HBV－DNA的載量變化，從而出現(xiàn)HBV－DNA已轉(zhuǎn)陰性而PreS1－Ag暫時呈陽性結(jié)果的現(xiàn)象；另外，當(dāng)乙肝病毒雖存在復(fù)制但前S區(qū)缺失或變異時，則會導(dǎo)致PreS1－Ag呈陰性而HBV－DNA呈陽性結(jié)果[11]；而當(dāng)乙肝病毒在極低拷貝狀態(tài)復(fù)制時也會因PCR方法學(xué)上的極限而導(dǎo)致HBV－DNA未能檢測出，可見PreS1－Ag、HBe－Ag和HBV－DNA雖然都是監(jiān)測病毒復(fù)制的指標(biāo)，但檢測方法學(xué)有所不同，表達(dá)的意義也有所區(qū)別，單項獨立檢測，容易出現(xiàn)漏診或誤判，而三者聯(lián)合檢測，有助于提高HBV檢測的敏感性，能更早期且更全面的對乙肝病毒的活動性進(jìn)行判斷和療效評估，避免誤判病情，貽誤治療[12，13]。

總之，乙肝PreS1－Ag作為判斷體內(nèi)乙肝病毒存在的新標(biāo)志，在監(jiān)測乙肝病毒感染和復(fù)制中與HBe－Ag、HBV－DNA有密切的相關(guān)性，再加上其檢測方法簡單方便，結(jié)果穩(wěn)定，無需大型儀器等優(yōu)點，非常適合在沒有條件進(jìn)行基因擴增技術(shù)（PCR）檢測的基層單位開展[14]；而在有條件開展HBVDNA檢測的單位，開展PreS1－Ag檢測是對目前臨床常用的以HBV－DNA及HBeAg為主要的乙肝病毒監(jiān)測指標(biāo)進(jìn)行了有效的補充，能更全面地監(jiān)測乙肝病毒在體內(nèi)的復(fù)制和變異情況，在慢性乙型肝炎（CHB）的診斷治療、判斷預(yù)后及疾病轉(zhuǎn)歸中有著重要的臨床階值[15]，值得臨床推廣。

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R512.6+3，R446.62

A

1674－1129(2017)01－0102－03

10.3969/j.issn.1674－1129.2017.01.034

2016-10-10；

2016-11-24)