• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    分子標記輔助選育具抗稻瘟病Pi2基因的水稻新恢復系

    2017-03-09 15:24:51余鍵呂德安郭承亮王世才
    湖北農(nóng)業(yè)科學 2017年1期
    關(guān)鍵詞:遠安恩施株系

    余鍵++呂德安++郭承亮++王世才

    摘要:通過分子標記輔助選擇,將早秈稻材料中的廣譜抗稻瘟病基因Pi2通過雜交轉(zhuǎn)入到中秈稻恢復系中,經(jīng)過多代自交以及田間農(nóng)藝性狀的選擇和自然誘發(fā)稻瘟病抗性鑒定,培育出了30個新的抗稻瘟病恢復系株系。通過對F6代抗性優(yōu)良的株系與優(yōu)良兩系不育系C815S的大量雜交組合測配,選擇出了3個高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的新雜交組合,均比對照品種豐兩優(yōu)香1號增產(chǎn)5%以上,且對稻瘟病的抗性均優(yōu)于對照品種,具有廣闊的應(yīng)用前景。

    關(guān)鍵詞:水稻(Oryza sativa L.);稻瘟病;恢復系;Pi2基因;分子標記輔助選擇

    中圖分類號:S511;S336 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2017)01-0013-05

    DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.01.004

    Developing New Restorer Lines with Pi2 Blast Resistance Gene by Molecular Marker Assistance Breeding in Rice

    YU Jian1,2,L?譈 De-an1,2,GUO Cheng-liang1,2,WANG Shi-cai1,2,GENG Yue-ming1,2

    (1.Hubei Provincial Seed Group Co. Ltd., Wuhan 430206, China;

    2.Key Laboratory of India Rice Breeding and Seed Technology, Ministry of Agriculture, Wuhan 430206, China)

    Abstract: In this research, we used molecular marker assistance breeding (MAS) to translate broad spectrum blast resistance gene Pi2 from early indica rice into restorer lines of medium indica rice. Through inbreeding of many generations,selection of good agronomic characters and identifying of the blast resistance under blast natural incidence,30 new restorer lines with blast resistance were cultivated. 3 new combinations with high yield, good quality were obtained from combinations between good two-line C815S and F6 excellent resistance restorer lines,and yields of these 3 combinations were higher than Fengliangyouxiang No.1 by more 5%,the blast resistance was also superior than control,which had extensive application prospect.

    Key words: rice (Oryza sativa L.); blast; restorer lines; Pi2 Gene; molecular marker assistance breeding

    水稻(Oryza sativa L.)稻瘟病是由子囊菌[Magnaporthe grisea (Hebert) Barrnov.]引起的真菌性病害,在全世界80多個國家和地區(qū)都有發(fā)生[1]。稻瘟病是限制水稻高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的主要因素之一,給中國水稻的產(chǎn)量帶來巨大的影響。20世紀90年代以來,中國稻瘟病的年發(fā)生面積在380萬~400萬hm2,造成稻谷年損失量達數(shù)億千克,嚴重時高達10億kg[2]。稻瘟病的變異性強,一般具有一定抗性的品種大面積推廣3~5年后就會出現(xiàn)抗性下降或喪失,給生產(chǎn)帶來極大的損失。長期的實踐證明,發(fā)掘廣譜、持久和穩(wěn)定的抗稻瘟病新基因和培育新抗病性品種是亟待解決的問題,也是最經(jīng)濟有效的防治措施。

    截至2013年8月,已至少報道了68個抗稻瘟病位點共83個主效基因。這些基因分布在除第3染色體以外的其他11條染色體上(2個隱性,其他顯性)[3],其中第6、11、12號染色體上的抗性基因多且成簇分布[4],是3個最大的稻瘟病抗性基因簇。廣譜抗稻瘟病基因Pi2位于第6染色體短臂近著絲粒附近[5],對從中國收集的792個稻瘟小種中的絕大部分表現(xiàn)抗性[6]。通過分子標記輔助選擇已經(jīng)在很多材料中得到應(yīng)用[7-9]。本研究通過雜交將早秈稻材料Z219中的抗稻瘟病基因Pi2轉(zhuǎn)入湖北省種子集團有限公司選育的7個品質(zhì)優(yōu)、配合力強的恢復系中,然后通過自交、分子標記輔助選擇和田間自然誘發(fā)抗性鑒定,選擇抗性好、農(nóng)藝性狀穩(wěn)定的株系與不育系進行組合測配,擬在選育出含Pi2基因的新的抗稻瘟病優(yōu)質(zhì)恢復系材料。

    1 材料與方法

    1.1 植物材料與選育方法

    供體親本:早秈稻抗稻瘟病材料Z219,含有廣譜抗稻瘟病的Pi2基因。受體親本:優(yōu)質(zhì)中秈稻材料R201、R202、R203、R204、R205、R206和R207,都為湖北省種子集團有限公司自主選育。

    從F2代開始結(jié)合分子標記輔助選擇和表型鑒定,選擇農(nóng)藝性狀優(yōu)良、田間稻瘟病抗性良好的陽性單株,在F5~F6代進行稻瘟病自然誘發(fā)抗性鑒定、組合測配及組合抗性鑒定。

    1.2 分子標記輔助選擇

    DNA的提取采用CTAB法;導入片段鑒定使用Pi2基因SSR標記RM527的序列合成引物。PCR反應(yīng)體系總體積為20 μL,其中模板2 μL,去離子水12 μL,Buffer(10×)2 μL,Mg2+(25 mmol/L)1.8 μL,dNTP(5 mmol/L)1.8 μL,正反引物各0.2 μL,Taq酶0.2 μL。

    擴增程序:95 ℃變性4 min;95 ℃變性30 s, 55 ℃退火30 s,72 ℃延伸45 s,35次循環(huán);72 ℃延伸10 min。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳,銀染檢測。

    1.3 稻瘟病田間抗性鑒定

    稻瘟病田間抗性鑒定設(shè)于湖北省宜昌市遠安縣茍家埡鎮(zhèn)望家鄉(xiāng)以及恩施自治州白果鄉(xiāng)兩河村稻瘟病自然誘發(fā)鑒定圃,采用誘發(fā)品種和偏氮施肥及淹水保持高濕管理等措施輔助誘發(fā)。每份材料插2行,每行10株,單本插,株行距17 cm×17 cm。順序排列,無重復。每組材料設(shè)抗、感品種和生產(chǎn)主栽對照品種各1個,供試材料及鑒定圃周圍種植感病誘發(fā)品種。

    葉瘟病于分蘗盛期對供試材料逐株調(diào)查發(fā)病病級,然后加權(quán)平均為發(fā)病等級;穗頸瘟病于收獲前1周內(nèi)分別調(diào)查發(fā)病率和損失率(統(tǒng)計穗數(shù)不少于100穗),分級標準參照湖北省水稻區(qū)域試驗方法,即國家稻品種試驗與審定規(guī)范《水稻抗主要病蟲鑒定及評價標準試行方案》。

    1.4 選種、組合測配的田間種植及考種

    選種種植:每個小區(qū)種植20苗,雙行區(qū),每行10苗,單本插,密度16.7 cm×20.0 cm。記載生育期和整齊度。成熟時每個區(qū)選擇1個以上的優(yōu)良單株,收獲中選株的全部種子。

    組合測配種植:每個小區(qū)3次重復,30株,單本插,每行10苗,密度16.7 cm×20.0 cm,設(shè)豐兩優(yōu)香1號為中稻對照,成熟時混收每個小區(qū)的種子,測定小區(qū)產(chǎn)量,并取中間縱向的3株進行考種,考察其農(nóng)藝性狀??疾斓霓r(nóng)藝性狀主要包括播始歷期、株高、穗長、有效穗數(shù)、實粒數(shù)、空粒數(shù)、結(jié)實率、千粒重和小區(qū)產(chǎn)量等。

    1.5 稻米品質(zhì)分析

    根據(jù)國家優(yōu)質(zhì)稻谷標準(GB/T 17891-1999)的測定方法,對配制的雜交組合以及2個對照品種進行稻米品質(zhì)分析,包含的指標有糙米率、精米率、整精米率、長寬比、堊白粒率、堊白度、膠稠度和直鏈淀粉含量等8個性狀。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 Pi2基因的分子檢測

    圖1為Pi2基因親本的分子檢測結(jié)果,所用引物為共顯性標記RM527。由圖1可知,供體親本和受體親本之間有顯著的多態(tài)性,可以用于Pi2基因的多態(tài)性檢驗。

    圖2為R201/Z219的自交F2代分子標記檢測結(jié)果,可以看出有明顯的分離現(xiàn)象,而且3種帶型符合1∶2∶1的孟德爾遺傳規(guī)律,說明該引物可以對陽性純合、雜合和陰性純合個體進行準確的篩選。

    2.2 親本及育成株系的稻瘟病抗性

    2.2.1 親本的稻瘟病抗性 2012年和2013年在湖北省宜昌市遠安縣望家鄉(xiāng)、2013年在恩施兩河鄉(xiāng)對8個親本株系進行了2年3點的稻瘟病田間自然誘發(fā)抗性鑒定。由表1可知,供體親本Z219的葉瘟病病級、穗頸瘟發(fā)病率和穗頸瘟損失率在2012年遠安和2013年恩施點的鑒定結(jié)果相同,達到R-MS-MR級別,都與2013年遠安的鑒定結(jié)果MR-HS-HS級別有顯著差異。其他受體親本除葉瘟病級在3點都有差異外,穗頸瘟發(fā)病率和穗頸瘟損失率與供體親本的鑒定結(jié)果有一致的差異性。因此,認為2012年遠安和2013年恩施的鑒定結(jié)果可靠,而且以穗頸瘟發(fā)病率和穗頸瘟損失率作為抗性鑒定的標準。

    2.2.2 育成株系的稻瘟病抗性 通過2012年在遠安縣望家鄉(xiāng)對育成含Pi2基因的自交F5代恢復系株系進行自然誘發(fā)稻瘟病抗性的鑒定,共篩選了19個綜合抗性為1級、44個3級的抗性株系。2013年在遠安縣望家鄉(xiāng)對這63份稻瘟病綜合抗性3級及以上自交F6代恢復系株系進行重復抗性鑒定,同時在恩施兩河鄉(xiāng)進行異點的鑒定。

    由表2穗頸瘟病發(fā)病率的抗病效果可知,2013年遠安和恩施的抗病效果比2012年遠安有明顯下降,其中恩施下降了9.52個百分點,遠安下降了20.63個百分點。2013年恩施出現(xiàn)了感(S)和高感(HS)的株系,占鑒定株系數(shù)的38.10%;2013年遠安出現(xiàn)的感(S)和高感(HS)的株系數(shù)達57.14%。2年3點的穗頸瘟發(fā)病率的抗病效果都低于30%,可能與供體親本的穗頸瘟發(fā)病率平均在感級別(S),受體親本在高感級別(HS)有關(guān),也可能是由于部分株系未完全純合,從而出現(xiàn)分離,導致抗性差異。

    表3為穗頸瘟損失率的抗病效果。由表3可知,2013年遠安和恩施的穗頸瘟損失率的抗病效果都比2012年遠安有明顯的降低,其中遠安下降了14.29個百分點,恩施下降了25.40個百分點。2013年遠安抗穗頸瘟病效果下降和出現(xiàn)感病株系可能與第二次重復鑒定有關(guān),2013年恩施鑒定結(jié)果與2012年遠安的差異可能與兩地自然條件不同有關(guān)。

    通過表4和表5的穗頸瘟發(fā)病率和穗頸瘟損失率之間的相關(guān)關(guān)系可知,2012年遠安和2013年遠安、2013年遠安和2013年恩施的穗頸瘟發(fā)病率之間和穗頸瘟損失率之間存在極顯著的相關(guān)關(guān)系,2012遠安和2013恩施的穗頸瘟發(fā)病率之間和穗頸瘟損失率之間沒有相關(guān)性。這可能與2012年和2013年遠安為同地點,環(huán)境相同,2013年恩施和遠安為同年,氣候相差不大有關(guān);而2013年恩施和2012年遠安環(huán)境和氣候都不相同。

    根據(jù)對2年3點的氣候和抗性結(jié)果分析,認為2012年遠安和2013年恩施的鑒定結(jié)果是比較可靠的。2013年遠安鑒定田,在水稻成熟期出現(xiàn)低溫,可能對鑒定結(jié)果的準確性具有一定的影響。表6是綜合分析2012年遠安和2013年恩施的鑒定結(jié)果,選出的抗性較好的株系。這30個株系的稻瘟病抗性明顯比原來的中稻親本有所提高,在今后雜交組合選育中,可能有較好的應(yīng)用價值。

    2.3 育成株系所配雜交組合的稻瘟病抗性鑒定結(jié)果

    于2013年在遠安縣望家鄉(xiāng)對2012年綜合抗性級別達到1(R)級的19個恢復系株系與C815S所配的雜交組合進行田間自然誘發(fā)稻瘟病抗性鑒定。表7為所配組合抗性鑒定穗頸瘟發(fā)病率和穗頸瘟損失率的級別。由表7可知,各組合的穗頸瘟發(fā)病率絕大部分都達到了高感(HS);各組合的穗頸瘟損失率大部分都為中感(MS),少部分為中抗(MR),都明顯低于親本恢復系株系的抗性。這可能與雜交組合的抗性是由父母本共同的基因型決定有關(guān),由于母本不具有稻瘟病抗性,甚至高感稻瘟病,從而導致了雜交組合的抗性顯著下降。但與不育系C815S所配組合的穗頸瘟損失率級別都優(yōu)于對照豐兩優(yōu)香1號,絕大部分都在中感(MS)及以上,說明這些組合具有一定的穗頸瘟損失率抗性。

    2.4 育成株系所配增產(chǎn)雜交組合的生育期、產(chǎn)量和主要農(nóng)藝性狀表現(xiàn)

    表8為4個高產(chǎn)中稻雜交組合的生育期、產(chǎn)量和主要農(nóng)藝性狀表現(xiàn)。由表8可知,播始歷期4個雜交組合都長于或與對照相當;株高都低于對照;單株有效穗數(shù)都高于對照;平均穗長都短于對照;每穗總粒數(shù)除C815S/Q191-3低于對照外,其他雜交組合都高于對照;結(jié)實率和千粒重所有雜交組合都低于對照。雜交組合C815S/Q221-2-2與對照豐兩優(yōu)香1號產(chǎn)量相當。

    2.5 育成株系所配增產(chǎn)雜交組合稻米品質(zhì)表現(xiàn)

    對由C815S所配的中稻雜交組合進行稻米品質(zhì)分析,結(jié)果(表9)表明,增產(chǎn)的4個中稻雜交組合中,糙米率除C815S/Q213-2為國標2級外,其他3個組合均為國標1級,與對照豐兩優(yōu)香1號相當;整精米率均低于對照,僅C815S/Q191-3達國標3級水平;堊白粒率和堊白度均高于對照;粒型所有雜交組合均與對照相當;直鏈淀粉含量僅C815S/Q213-1達國標3級,其他3個組合均與對照相當;膠稠度均與對照相當,達國標1級水平。

    3 討論

    本研究旨在創(chuàng)建抗稻瘟病的新恢復系,但是并沒有選擇雙親都具有抗性的親本進行雜交,從而聚合抗稻瘟病基因,獲得抗性更好的株系這種途徑,而是通過含有廣譜抗稻瘟病基因Pi2的早秈稻材料Z219與不含抗稻瘟病基因的優(yōu)良恢復系雜交,通過分子標記輔助選擇含有Pi2基因的株系自交,最后獲得穩(wěn)定的新的抗病恢復系。這樣做的目的有兩點:一是為了育種的需要,不需要改良某個特定的恢復系的抗性,而是創(chuàng)建新的恢復系,為育種提供新材料;二是育成的新株系可以直接用于組合測配,加快了抗病雜交育種的進程。

    本研究育成的新株系分為3種類型:第一種是含有Pi2基因,但稻瘟病抗性卻差于供體親本Z219,可能原因是由于基因沒完全純合或基因的表達出現(xiàn)問題;第二種是含有Pi2基因,抗性與供體親本相當,可能是Pi2基因的結(jié)構(gòu)沒有發(fā)生改變;第三種是含有Pi2基因,抗性優(yōu)于供體親本,可能是Pi2基因純合,然后經(jīng)過染色體的交換或重組,獲得新的未知抗稻瘟病基因或QTL位點。具體原因還需進一步驗證。

    王久林等[10]認為雜種的稻瘟病抗性與不育系和恢復系都有關(guān),且偏向于恢復系。鄭軼等[11]認為雜交組合的葉瘟病和穗頸瘟病抗性與母本葉瘟病均呈極顯著正相關(guān)關(guān)系,而與父本的相關(guān)性不顯著,母本的抗性越好,則配制的雜交組合抗性更好。本研究通過對C815S與育成的稻瘟病綜合抗性1級的恢復系配制的雜交組合進行自然誘發(fā)的稻瘟病抗性鑒定,結(jié)果表明雜交組合葉瘟病抗性處于抗-中抗級別,穗頸瘟發(fā)病率為感或高感級別,穗瘟損失率為中抗-中感級別,綜合抗性中抗-中感級別,優(yōu)于對照豐兩優(yōu)香1號(感)。

    水稻葉瘟病與穗頸瘟病之間的關(guān)系一直存有爭論,一種認為它們之間存在著正相關(guān)關(guān)系[12-14],另一種認為互相之間沒有相關(guān)性,甚至是由不同的基因決定。本研究分析了2012年遠安葉瘟發(fā)病率和穗頸瘟發(fā)病率之間的相關(guān)關(guān)系,結(jié)果表明葉瘟發(fā)病率和穗瘟發(fā)病率之間存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系。但是本試驗中大部分葉瘟病鑒定表現(xiàn)為抗病級別的株系,但穗頸瘟發(fā)病率卻表現(xiàn)為感病級別,即李樺[12]所認為的“R,S”型,這是因為新育成的株系抽穗不整齊且呈分離特點導致的。因此,需要對育成的株系進一步選擇、純化,以提高新育成株系整體的稻瘟病抗性水平。

    本研究對兩年同點和同年不同點的鑒定結(jié)果之間進行了相關(guān)性分析,結(jié)果表明,兩年同點的葉瘟病級別之間以及與其他的抗性之間沒有顯著的相關(guān)關(guān)系,同年不同點的結(jié)果與兩年同點的結(jié)果相似,說明葉瘟病在兩年同點和同年不同點之間都不具有重復性;而穗頸瘟發(fā)病率與損失率在同年不同點及兩年同點間都有顯著的相關(guān)關(guān)系,所以在品種和新株系的稻瘟病抗性鑒定時,應(yīng)以穗頸瘟發(fā)病率和損失率作為鑒定的標準,提高鑒定的準確性。

    4 結(jié)論

    本研究通過分子標記輔助選擇將抗稻瘟病Pi2基因轉(zhuǎn)入自育的恢復系中,育成了一批新的抗稻瘟病恢復系,通過2年3點的自然誘發(fā)田間抗性鑒定,獲得了30個稻瘟病抗性明顯優(yōu)于原始受體親本的新抗病恢復系,與不育系C815S測配雜交組合的抗性鑒定表明,雜交組合的稻瘟病抗性提升不明顯,但要優(yōu)于對照品種豐兩優(yōu)香1號,且產(chǎn)量、米質(zhì)方面都比對照有所提高,具有一定的應(yīng)用前景。

    參考文獻:

    [1] 陳德西,李仕貴,馬炳田,等.水稻抗稻瘟病育種研究進展[J].安徽農(nóng)學通報,2008,14(17):206-209.

    [2] 李落葉,井金學.稻瘟病抗性基因的分子定位及克隆[J].中國農(nóng)學通報,2006,22(1):49-53.

    [3] 謝 培,鄧其明,王世全,等.水稻稻瘟病抗性基因研究進展[J].湖南農(nóng)業(yè)科學,2011(5):79-81,82.

    [4] BALLINI E,MOREL J B,DROC G,et al. A genome-wide meta-analysis of rice blast resistance genes and quantitative trait loci provides new insights into partial and complete resistance[J].MPMI,2008,21:859-868.

    [5] ZHOU B,QU S,LIU G,et al. The eight amino-acid differences within three leucine-rich repeats between Pi2 and Piz-t resistance proteins determine the resistance specificity to Magnaporthe grisea[J].MPMI,2006,19:1216-1228.

    [6] CHEN H L,CHEN B T,ZHANG D P,et al.Pathotypes of Pyricularia grisea in rice fields of central and southern China[J].Plant Disease,2001,85:843-850.

    [7] 陳紅旗.分子標記輔助聚合3個稻瘟病抗性基因[D].江蘇揚州:揚州大學,2005.

    [8] 郭艷麗.利用MAS技術(shù)培育寒區(qū)抗稻瘟病水稻品種五優(yōu)稻1號(Pi1/Pi2)[D].哈爾濱:黑龍江圖書館,2009.

    [9] 林 琳.稻瘟病抗性基因的多基因聚合研究[D].成都:四川農(nóng)業(yè)大學,2010.

    [10] 王久林,雷財林,毛世宏,等.雜交稻抗瘟性遺傳表達特征的研究[J].福建稻麥科技,1995,13(2):12-17.

    [11] 鄭 軼,涂詩航,周 鵬,等.雜交水稻稻瘟病抗性鑒定及其與父母本抗性的相關(guān)性[J].雜交水稻,2010,25(4):75-77.

    [12] 李 樺.水稻稻瘟病苗瘟、葉瘟、穗頸瘟相關(guān)關(guān)系的探討[J].植物保護學報,1991,18(4):293-297.

    [13] 李 華.寧夏水稻抗稻瘟病育種存在的問題及鑒定方法的探討[J].寧夏農(nóng)林科技,1997(4):36-38.

    [14] 陳福如,阮宏椿,楊秀娟,等.稻瘟病苗瘟葉瘟和穗頸瘟的相關(guān)性分析[J].中國農(nóng)學通報,2006,22(7):440-443.

    猜你喜歡
    遠安恩施株系
    上海遠安流體設(shè)備科技有限公司
    上海遠安流體設(shè)備科技有限公司
    過表達NtMYB4a基因增強煙草抗旱能力
    上海遠安流體設(shè)備科技有限公司
    恩施石油:黨建為經(jīng)營賦能
    嫦娥5號返回式試驗衛(wèi)星小麥育種材料研究進展情況
    恩施方言中的“倒”和“起”
    湖北遠安花鼓戲當代生存狀態(tài)思考
    音樂傳播(2016年2期)2016-12-01 06:41:08
    衢州椪柑變異株系—黃皮椪柑相關(guān)特性研究
    浙江柑橘(2016年1期)2016-03-11 20:12:31
    恩施年俗——點路燭
    民族大家庭(2015年2期)2015-08-21 07:59:54
    内射极品少妇av片p| 国产精品三级大全| 一级毛片我不卡| 亚洲人与动物交配视频| 久久久色成人| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 高清不卡的av网站| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美日本视频| 这个男人来自地球电影免费观看 | 99久久综合免费| 久久久久网色| 亚洲丝袜综合中文字幕| 身体一侧抽搐| 久久久成人免费电影| 最近中文字幕高清免费大全6| 97精品久久久久久久久久精品| 97精品久久久久久久久久精品| 精品人妻熟女av久视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品久久久久久精品古装| 免费看不卡的av| 成人毛片a级毛片在线播放| 美女国产视频在线观看| 好男人视频免费观看在线| 国产精品蜜桃在线观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 成人一区二区视频在线观看| av在线老鸭窝| av在线老鸭窝| 日韩国内少妇激情av| freevideosex欧美| 天堂8中文在线网| 人妻系列 视频| 久久久精品免费免费高清| 寂寞人妻少妇视频99o| 日本wwww免费看| 国产精品一及| 丰满人妻一区二区三区视频av| 精品久久久久久电影网| 少妇人妻久久综合中文| 在线观看免费高清a一片| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲色图av天堂| 99热国产这里只有精品6| 日本爱情动作片www.在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 下体分泌物呈黄色| 99久国产av精品国产电影| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产免费又黄又爽又色| 久久精品人妻少妇| 一级二级三级毛片免费看| 久久人人爽人人片av| 国产av一区二区精品久久 | 欧美少妇被猛烈插入视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美少妇被猛烈插入视频| 我要看日韩黄色一级片| 黄色视频在线播放观看不卡| 色5月婷婷丁香| 亚洲精品视频女| a级毛片免费高清观看在线播放| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产精品99久久久久久久久| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产乱人视频| 欧美精品一区二区大全| 2022亚洲国产成人精品| 天堂8中文在线网| 国产亚洲一区二区精品| 国产精品人妻久久久久久| 老女人水多毛片| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲av免费高清在线观看| 97热精品久久久久久| 最近手机中文字幕大全| 美女高潮的动态| 男人添女人高潮全过程视频| 岛国毛片在线播放| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 插逼视频在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲av男天堂| xxx大片免费视频| 国产亚洲欧美精品永久| 卡戴珊不雅视频在线播放| 干丝袜人妻中文字幕| 欧美97在线视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 十八禁网站网址无遮挡 | 成人美女网站在线观看视频| 国产在线男女| 国产一区二区三区综合在线观看 | 中文字幕久久专区| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美97在线视频| 男女边摸边吃奶| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久久久久人妻| 亚洲成人av在线免费| 色婷婷av一区二区三区视频| 日本一二三区视频观看| 久久精品夜色国产| 欧美一区二区亚洲| 美女内射精品一级片tv| 国产中年淑女户外野战色| 国产91av在线免费观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 中文资源天堂在线| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产乱人偷精品视频| 久久6这里有精品| 在线观看免费高清a一片| 免费观看的影片在线观看| 99久久综合免费| 久久久久网色| 久久精品国产亚洲网站| av国产久精品久网站免费入址| 丝袜脚勾引网站| 女性被躁到高潮视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 国产69精品久久久久777片| 国产精品国产三级国产专区5o| 51国产日韩欧美| 美女高潮的动态| 久久久a久久爽久久v久久| 熟女av电影| 日本免费在线观看一区| 日本免费在线观看一区| av在线蜜桃| 亚洲精品,欧美精品| 国产伦精品一区二区三区视频9| 激情 狠狠 欧美| 国产亚洲精品久久久com| 熟妇人妻不卡中文字幕| 在线播放无遮挡| 在线看a的网站| 日韩三级伦理在线观看| 久热久热在线精品观看| 黄色配什么色好看| 人体艺术视频欧美日本| 99久久精品一区二区三区| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 久久国产乱子免费精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 少妇人妻精品综合一区二区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲av欧美aⅴ国产| 中国三级夫妇交换| 综合色丁香网| 国产精品熟女久久久久浪| 久久久a久久爽久久v久久| 欧美最新免费一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲,欧美,日韩| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲四区av| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久 成人 亚洲| 国产精品伦人一区二区| 国产精品99久久久久久久久| 久久99精品国语久久久| 亚洲国产欧美人成| 麻豆成人午夜福利视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产欧美亚洲国产| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产亚洲最大av| 精品一区二区三区视频在线| 免费少妇av软件| 成人免费观看视频高清| 日本午夜av视频| 嫩草影院新地址| 亚洲精品国产av蜜桃| 三级经典国产精品| 日韩制服骚丝袜av| 欧美成人一区二区免费高清观看| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲性久久影院| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 色哟哟·www| 日韩亚洲欧美综合| 99久久人妻综合| 亚洲经典国产精华液单| 99久久精品热视频| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久久久国产网址| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲国产色片| 欧美最新免费一区二区三区| 青青草视频在线视频观看| 观看免费一级毛片| 哪个播放器可以免费观看大片| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲性久久影院| 97超视频在线观看视频| 中文字幕亚洲精品专区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 丰满少妇做爰视频| 尾随美女入室| 亚洲内射少妇av| 纯流量卡能插随身wifi吗| 交换朋友夫妻互换小说| 成人无遮挡网站| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日韩一区二区三区影片| 人体艺术视频欧美日本| 久久 成人 亚洲| 久热这里只有精品99| 黄片wwwwww| 精品人妻熟女av久视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日日摸夜夜添夜夜爱| 成人一区二区视频在线观看| 十分钟在线观看高清视频www | 亚洲av免费高清在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 在线观看三级黄色| 18禁动态无遮挡网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 午夜福利视频精品| 十八禁网站网址无遮挡 | 亚洲欧美一区二区三区国产| 天堂中文最新版在线下载| 色视频在线一区二区三区| 国产日韩欧美在线精品| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲精品456在线播放app| 我的老师免费观看完整版| 国产av国产精品国产| 久热这里只有精品99| 日本vs欧美在线观看视频 | 国产毛片在线视频| 国产精品三级大全| 日韩视频在线欧美| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 热re99久久精品国产66热6| 在线看a的网站| 男男h啪啪无遮挡| 人人妻人人看人人澡| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 免费看日本二区| 午夜福利高清视频| 亚洲av日韩在线播放| 久久99热这里只频精品6学生| 精品一区二区三卡| 久久久久视频综合| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲欧美精品专区久久| 韩国av在线不卡| 天堂中文最新版在线下载| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 各种免费的搞黄视频| 国产91av在线免费观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久99热6这里只有精品| 三级国产精品欧美在线观看| 精品久久久久久久末码| 成人免费观看视频高清| 国精品久久久久久国模美| 国产色婷婷99| 丰满人妻一区二区三区视频av| 免费看日本二区| 亚洲精品视频女| 男人和女人高潮做爰伦理| 伦理电影大哥的女人| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产午夜精品一二区理论片| 色吧在线观看| 高清在线视频一区二区三区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 成人二区视频| 在线观看免费日韩欧美大片 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 18+在线观看网站| 国产精品人妻久久久影院| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产片特级美女逼逼视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久韩国三级中文字幕| 五月开心婷婷网| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲精品一区蜜桃| 日韩中字成人| 久久久久久久大尺度免费视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 中文天堂在线官网| 乱系列少妇在线播放| 日本-黄色视频高清免费观看| 好男人视频免费观看在线| 看免费成人av毛片| 91在线精品国自产拍蜜月| 蜜桃在线观看..| 国产精品免费大片| 免费人成在线观看视频色| 日韩大片免费观看网站| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 搡女人真爽免费视频火全软件| 91精品国产九色| 在线观看免费日韩欧美大片 | 亚洲精品日本国产第一区| 九九在线视频观看精品| 成人无遮挡网站| 色综合色国产| 免费观看性生交大片5| 国产精品不卡视频一区二区| 搡老乐熟女国产| 在线观看免费视频网站a站| 久久久久视频综合| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲综合色惰| 久久久a久久爽久久v久久| 精品一区二区免费观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲欧洲国产日韩| 久久久久久久久久久丰满| 最黄视频免费看| 极品教师在线视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 啦啦啦啦在线视频资源| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产乱来视频区| 久久热精品热| 狂野欧美激情性bbbbbb| 男人舔奶头视频| 国产人妻一区二区三区在| 国产精品一区二区性色av| 久久国内精品自在自线图片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 99久久精品国产国产毛片| 插逼视频在线观看| 一本一本综合久久| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 中文天堂在线官网| 亚洲精品第二区| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产片特级美女逼逼视频| 男女免费视频国产| 久久久久精品性色| 亚洲精品视频女| 久久精品夜色国产| 国产精品偷伦视频观看了| 少妇熟女欧美另类| 街头女战士在线观看网站| 国产精品国产三级国产专区5o| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲欧美精品专区久久| 国产精品蜜桃在线观看| 一区二区av电影网| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久久欧美国产精品| 精品一区在线观看国产| 久久av网站| 视频中文字幕在线观看| 伦理电影大哥的女人| av卡一久久| 三级经典国产精品| 插阴视频在线观看视频| av在线蜜桃| 简卡轻食公司| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产亚洲一区二区精品| 最黄视频免费看| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲美女视频黄频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 我的女老师完整版在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 男女国产视频网站| 国产毛片在线视频| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲成色77777| 一级毛片我不卡| 亚洲第一区二区三区不卡| 日韩亚洲欧美综合| 男人舔奶头视频| 性色av一级| 亚洲精品日韩av片在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲av成人精品一二三区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 日韩精品有码人妻一区| 国产精品国产三级国产专区5o| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久精品国产亚洲av涩爱| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 在线观看国产h片| 中文字幕亚洲精品专区| 国产永久视频网站| 午夜福利影视在线免费观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 久久这里有精品视频免费| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品一区www在线观看| 看十八女毛片水多多多| 黑人猛操日本美女一级片| 久久精品国产a三级三级三级| 免费观看av网站的网址| 校园人妻丝袜中文字幕| 日韩在线高清观看一区二区三区| av免费观看日本| 成年人午夜在线观看视频| 99视频精品全部免费 在线| 国产亚洲最大av| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 日韩一区二区三区影片| av网站免费在线观看视频| 99久久综合免费| 久久久久久久久久成人| 青春草亚洲视频在线观看| tube8黄色片| 最黄视频免费看| 成人综合一区亚洲| 免费观看a级毛片全部| 国产人妻一区二区三区在| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品一区二区在线不卡| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲欧美精品专区久久| 在线 av 中文字幕| 免费av不卡在线播放| 天美传媒精品一区二区| 秋霞伦理黄片| 亚洲av福利一区| 国产日韩欧美亚洲二区| 在线观看一区二区三区| 欧美丝袜亚洲另类| 永久网站在线| 免费观看性生交大片5| 欧美成人精品欧美一级黄| 精品人妻视频免费看| a级毛色黄片| 国产永久视频网站| 最后的刺客免费高清国语| 高清视频免费观看一区二区| 久久久国产一区二区| 乱码一卡2卡4卡精品| 777米奇影视久久| 97超碰精品成人国产| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 永久网站在线| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 一区二区三区四区激情视频| 天堂中文最新版在线下载| 少妇熟女欧美另类| 国产精品av视频在线免费观看| 国产乱人偷精品视频| 一区二区av电影网| 免费黄网站久久成人精品| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 在现免费观看毛片| 色网站视频免费| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲av综合色区一区| 亚洲av男天堂| 免费看不卡的av| 国产免费视频播放在线视频| 两个人的视频大全免费| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲av.av天堂| a级一级毛片免费在线观看| av国产精品久久久久影院| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 97超视频在线观看视频| 欧美成人午夜免费资源| 街头女战士在线观看网站| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一区二区三区精品91| 国产在线一区二区三区精| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 伊人久久精品亚洲午夜| 男人和女人高潮做爰伦理| 中文欧美无线码| 精品亚洲成a人片在线观看 | 一个人看的www免费观看视频| 国产淫片久久久久久久久| 国产黄频视频在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日韩强制内射视频| 久久久精品免费免费高清| 国产精品三级大全| 欧美一级a爱片免费观看看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久精品国产自在天天线| 日本欧美视频一区| 青青草视频在线视频观看| 高清午夜精品一区二区三区| 99热这里只有是精品在线观看| 久久99热这里只有精品18| 久热这里只有精品99| 91久久精品国产一区二区成人| 永久免费av网站大全| 晚上一个人看的免费电影| av又黄又爽大尺度在线免费看| 熟女av电影| 精品久久久精品久久久| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲av欧美aⅴ国产| 在线 av 中文字幕| 国产有黄有色有爽视频| 欧美成人a在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久久精品94久久精品| 国产男女超爽视频在线观看| 99热6这里只有精品| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 人妻 亚洲 视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品一区二区性色av| 欧美日韩亚洲高清精品| 麻豆国产97在线/欧美| 91精品一卡2卡3卡4卡| 我要看日韩黄色一级片| 日韩在线高清观看一区二区三区| av一本久久久久| 国产精品国产av在线观看| 一级片'在线观看视频| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲成人av在线免费| 成年免费大片在线观看| 成人国产av品久久久| 又爽又黄a免费视频| 2018国产大陆天天弄谢| 午夜免费观看性视频| 精品一区在线观看国产| 国产在线男女| 男女国产视频网站| 蜜桃在线观看..| 国产av国产精品国产| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美成人午夜免费资源| 在线观看国产h片| 精品熟女少妇av免费看| 香蕉精品网在线| 精品久久久久久久久av| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久人人爽人人片av| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久久久久久久久成人| 久久久久精品性色| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 尾随美女入室| 亚洲精品日本国产第一区| 久久久午夜欧美精品| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 日韩精品有码人妻一区| 99久久人妻综合| 成人国产av品久久久| 一区二区三区乱码不卡18| 国产一区二区三区av在线| 精品视频人人做人人爽| 久久午夜福利片| 国产黄频视频在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产精品久久久久久av不卡| 三级国产精品欧美在线观看| 99热全是精品| 最黄视频免费看| 国产在线一区二区三区精| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 丝袜喷水一区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产人妻一区二区三区在| 国产成人91sexporn| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产成人aa在线观看| 日韩大片免费观看网站| 免费看光身美女| 亚洲人与动物交配视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 免费黄色在线免费观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 三级经典国产精品| 干丝袜人妻中文字幕| 男女边吃奶边做爰视频| 九九在线视频观看精品| 水蜜桃什么品种好| 亚洲熟女精品中文字幕| 成年av动漫网址|