柴胡屬植物的生藥學(xué)研究進(jìn)展

張東佳 彭云霞 +藺海明 張海靜

【摘要】通過(guò)對(duì)柴胡屬植物傳統(tǒng)的生藥學(xué)特征研究（如飲片特征、顯微特征）及現(xiàn)代生藥學(xué)研究（如色譜、光譜特征、指紋圖譜及分子生物學(xué)）等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，總結(jié)出常用柴胡屬植物的主要特征和鑒別方法，以期為柴胡的質(zhì)量評(píng)價(jià)、質(zhì)量控制及柴胡屬植物的資源保護(hù)、合理利用等相關(guān)工作提供參考。

【關(guān)鍵詞】柴胡屬；生藥學(xué)；研究進(jìn)展

【中圖分類號(hào)】R93【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）02-0070-05

The Research Progress on Pharmacognosy of Genus Bupleurum Plants

ZHANG Dongjia1，2PENG Yunxia1，2LIN Haiming1*ZHANG Haijing3

1.Institute of Chinese Medicines， Gansu Academy of Agricultural Sciences， Lanzhou 730070， China；

2.Laboratory of Germplasm Improvement and Quality Control Engineering of Chinese Herbal Medicine， Gansu Province， Lanzhou 730070， China；

3.Gansu Jiahe Chinese Medicine Science & technology co.， LTD， Lanzhou 730070， China

Abstract：The research progress on traditional characteristics （appearanceand microscopic characteristics） and modern pharmacognosy studies （chromatographic spectrum， Fingerprint and molecular biology）of genus Bupleurum plants were reviewed， the methods of the main characteristics and identify of genus Bupleurum plantswere summed up， so as to provide reference for quality control and evaluation of radix Bupleuri and resources protection， rational utilization and related works of genus Bupleurum plants.

Keywords：Bupleurum；Pharmacognosy；Research Progress

柴胡始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為常用的大宗中藥材，有解表退熱；疏肝解郁，升舉陽(yáng)氣之功效，用于外感發(fā)熱、寒熱往來(lái)、瘧疾、肝郁脅痛、乳脹、頭痛頭眩、月經(jīng)不調(diào)、氣虛下陷之脫肛、子宮脫垂、胃下垂等癥[1]?！吨袊?guó)藥典》（2015年版）規(guī)定中藥“柴胡”的來(lái)源為柴胡屬植物柴胡（Bupleurum chinense DC.）和狹葉柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.）的干燥根[2]，但市場(chǎng)流通和臨床常用柴胡除藥典所載種以外，還有多種柴胡屬植物在不同的地方供藥用。

國(guó)內(nèi)各地區(qū)入藥的柴胡植物不完全一致，各地區(qū)仍按歷史習(xí)慣自產(chǎn)自銷或民間入藥，形成區(qū)域藥用柴胡，由于在品種、藥用部位、資源多寡及臨床用藥等方面存在差異，造成藥用柴胡使用品種混亂，化學(xué)成分復(fù)雜，有效成分相差懸殊，造成柴胡及其制劑質(zhì)量不穩(wěn)定。為充分挖掘柴胡屬植物的資源優(yōu)勢(shì)及潛力，保證制劑質(zhì)量和臨床用藥的療效及用藥安全，特將柴胡屬植物的生藥學(xué)研究資料進(jìn)行收集整理總結(jié)，以期為相關(guān)研究工作提供參考。

1各地習(xí)用柴胡屬植物資源

柴胡為常用中藥，我國(guó)自古以來(lái)就廣為使用。柴胡屬植物種類較多，在我國(guó)除海南以外各地均有分布，作為柴胡使用的有二十余種，多自采自用，本地區(qū)流通，來(lái)源及用法不盡相同?，F(xiàn)將除藥典收載種以外的地方習(xí)用柴胡屬植物資源進(jìn)行整理[3]，詳見(jiàn)表1。

2柴胡屬植物生藥性狀特征

性狀鑒定是用看、摸、聞、嘗等十分簡(jiǎn)便的鑒定方法，來(lái)鑒別藥材的外觀性狀，這些方法在我國(guó)的傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)中積累了豐富的傳統(tǒng)鑒別經(jīng)驗(yàn)，具有簡(jiǎn)單、易行、迅速的特點(diǎn)。柴胡屬藥用植物的根多呈圓柱形或圓錐形，有或無(wú)分枝，長(zhǎng)一般為3～15cm，直徑02～12cm；表面顏色從淡黃色到黑色不等；根質(zhì)地松脆者易折斷，堅(jiān)硬者不易折斷，斷面多較平坦，皮部顏色一般較木部深；多具油腥氣，氣微香，味微苦[4-5]。常用柴胡屬植物生藥性狀特征見(jiàn)表2。

3柴胡屬植物生藥顯微特征

柴胡屬植物生藥顯微特征的區(qū)別主要在木栓層木栓細(xì)胞列數(shù)的多少，皮層油室的個(gè)數(shù)，韌皮部油室多少、排列方式及大小，木質(zhì)部導(dǎo)管的排列方式及木纖維群的多少及排列方式等[4-6]，常用柴胡屬植物生藥顯微特征見(jiàn)表3。

4理化鑒定

利用物理、化學(xué)或儀器分析方法，鑒定中藥的真實(shí)性、純度和品質(zhì)優(yōu)劣程度，統(tǒng)稱為理化鑒定，是中藥鑒定分析的重要方法[7]。柴胡屬植物主要含有皂苷、木質(zhì)素、黃酮類、香豆素、揮發(fā)油、多糖及多炔類等成分。由于柴胡種類繁多，各種間可能存在次生代謝產(chǎn)物種類和數(shù)量的差異。利用薄層色譜（TLC） 、高效液相色譜（HPLC） 、氣相色譜（GC） 等分離技術(shù)結(jié)合物質(zhì)鑒定方法對(duì)化學(xué)成分及含量進(jìn)行分析，據(jù)此作為鑒定依據(jù)，近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的中藥指紋圖譜技術(shù)就屬于此類。

張府君等[8]用硅膠G板，以石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，建立了小葉黑柴胡的薄層色譜鑒別方法，該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏、專屬性和重現(xiàn)性好，可作為小葉黑柴胡質(zhì)量控制和鑒定的參考依據(jù)。胡雙豐等[5]對(duì)小葉黑柴胡及北柴胡、狹葉柴胡、錐葉柴胡的薄層色譜特征進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)小葉黑柴胡的斑點(diǎn)與后三者存在明顯差異，可用于鑒別。

Huang等[9]通過(guò)高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法（HPLC-DAD） 對(duì)不同柴胡屬植物多炔含量與質(zhì)量的測(cè)定結(jié)果表明，不同種柴胡所含多炔的種類和含量不盡相同，可以依據(jù)多炔成分的含量與種類差異對(duì)柴胡屬進(jìn)行鑒別。肖蓉等[10]從7批道地產(chǎn)區(qū)柴胡藥材揮發(fā)油GC指紋圖譜中提取19個(gè)共有峰，用質(zhì)譜分析鑒定出其成分，柴胡類藥材揮發(fā)油氣相色譜指紋圖譜中各成分均得到了較好的分離，可作為柴胡藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)及鑒定的專屬性指紋圖譜。王硯等[11]用HPLC法建立了北柴胡標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，確立了14個(gè)色譜峰為共有峰，測(cè)定了13 批不同基源柴胡的指紋圖譜及相似度，并對(duì)包括北柴胡在內(nèi)的23 批柴胡進(jìn)行聚類分析，聚類分析結(jié)果與傳統(tǒng)分類結(jié)果具有一致性，可用于柴胡屬植物的基源鑒定。

5分子鑒定

近年來(lái)，隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展及其在中藥學(xué)領(lǐng)域的滲透，以DNA分子為標(biāo)記的中藥分子鑒定方法得到不斷的發(fā)展與應(yīng)用，中藥DNA分子鑒定經(jīng)歷了以RFLP，RAPD 和 DNA 條碼技術(shù)為代表的三個(gè)階段，形成了基于分子雜交信號(hào)、PCR 擴(kuò)增指紋、核酸序列分析的三大 DNA 鑒定技術(shù)體系。

劉力等[12]研制了基于其內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS1）多態(tài)性的用于柴胡屬植物來(lái)源的柴胡生藥鑒別的DNA芯片，將設(shè)計(jì)的特異性寡核苷酸探針點(diǎn)印于基質(zhì)上制備芯片，從待檢測(cè)樣品中提取基因組DNA， 擴(kuò)增ITS1片段， 并以熒光標(biāo)記后， 與芯片雜交，在與其相應(yīng)的探針位置即可出現(xiàn)信號(hào)，每種不同來(lái)源的柴胡有其特異的雜交譜圖，為柴胡類生藥的鑒定提供可靠便利的方法。馬艷芝等[13]以柴胡干品為材料，提取其基因組DNA，利用ISSR標(biāo)記和ITS序列分析方法，對(duì)11份柴胡種質(zhì)進(jìn)行鑒定和親緣關(guān)系分析，從100條ISSR引物中篩選出21條擴(kuò)增譜帶清晰、多態(tài)性高的引物，利用這些引物從11份柴胡樣品中共獲得185條擴(kuò)增條帶，其中156條條帶呈現(xiàn)多態(tài)性，利用ITS技術(shù)或?qū)⑵渑cISSR標(biāo)記相結(jié)合可以高效準(zhǔn)確地鑒定柴胡類資源。遲瑩等[14]采用改良的CTAB 法提取柴胡及小葉黑柴胡等柴胡屬植物的干根基因組DNA，設(shè)計(jì)特異性引物，利用PCR 擴(kuò)增技術(shù)進(jìn)行DNA 指紋鑒定，各類柴胡DNA 具有特異性指紋特征，可用于柴胡類藥材的鑒別和鑒定。武瑩[15]對(duì)包括小葉黑柴胡在內(nèi)的常用柴胡屬植物ITS 區(qū)進(jìn)行測(cè)序，分析柴胡屬12種植物種間差異和遺傳距離，通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)柴胡屬植物的 ITS 序列差異明顯。嚴(yán)華等[16]對(duì)5種柴胡屬植物的葉進(jìn)行DNA提取，PCR擴(kuò)增后雙向測(cè)序，對(duì)所得的峰圖文件進(jìn)行分析，并與GenBank中的柴胡屬18條基因序列進(jìn)行比對(duì)，并構(gòu)建了NJ系統(tǒng)聚類樹(shù)。利用中藥材DNA 條形碼鑒定系統(tǒng)（ BLAST） 的ITS2 序列比對(duì)結(jié)果表明，ITS2 序列可以準(zhǔn)確區(qū)分柴胡屬北方常見(jiàn)同屬混偽品。袁伯川等[17]以來(lái)自北京、寧夏、山西、甘肅、河北的10個(gè)居群125份北柴胡及銀州柴胡樣品為實(shí)驗(yàn)材料，提取其總DNA，并PCR擴(kuò)增其ITS 序列，對(duì)序列進(jìn)行雙向測(cè)序，進(jìn)行序列分析，計(jì)算種內(nèi)、種間遺傳距離，構(gòu)建鄰接樹(shù)，結(jié)果表明利用ITS 序列可快速準(zhǔn)確地鑒定北柴胡與銀州柴胡。韓曉偉等[18]對(duì)從河北中藥材市場(chǎng)采購(gòu)的28份柴胡藥材的ITS2序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，同時(shí)從Gen Bank下載7個(gè)樣本序列。通過(guò)分析比對(duì)，計(jì)算其種間、種內(nèi)的K2P距離以及各序列的變異位點(diǎn)并進(jìn)行聚類分析，表明 ITS2序列能夠作為柴胡藥材鑒別的有效方法（見(jiàn)圖1，圖2）。

梁之桃等[19]對(duì)北柴胡、狹葉柴胡、大葉柴胡、竹葉柴胡、小葉黑柴胡進(jìn)行了RAPD 分析，用篩選的3個(gè)有效引物共擴(kuò)增54個(gè)DNA片段，平均每個(gè)引物擴(kuò)增18個(gè)DNA片段， 54個(gè)片段中公共片段3個(gè)，顯示多態(tài)性片段51個(gè)，能有效地鑒定這5種柴胡屬植物。

丁銳等[20]采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）對(duì)5種柴胡脂酶同工酶進(jìn)行了研究。結(jié)果表明柴胡不同種之間脂酶同工酶條帶數(shù)不同， 且各自均具有特征譜帶，用PAGE能對(duì)柴胡屬5種植物進(jìn)行區(qū)分。

6小結(jié)

由于柴胡屬藥用植物種類多，分布廣泛，表型特征相似度高，因此存疑類群較多，屬下種間分類不清。前人已從形態(tài)學(xué)、化學(xué)、解剖學(xué)、分子生物學(xué)等方面建立了多種方法，用于柴胡類藥材的鑒別和鑒定。由于柴胡從野生種到栽培種的變化過(guò)程中，通常是農(nóng)戶自種自繁，沒(méi)有明確的種子、種苗來(lái)源，不同地區(qū)的種質(zhì)也是隨意引種種植，留種過(guò)程缺乏去雜除劣措施，這就造成不同種質(zhì)相互混雜。另外，由于柴胡為異花授粉植物，柴胡種質(zhì)常常是遺傳背景混雜的群體，不同個(gè)體間形態(tài)也常表現(xiàn)出一定的差異，給鑒定和資源利用造成了較大困難。

柴胡為常用大宗藥材，各地用藥習(xí)慣不一，地方標(biāo)準(zhǔn)收載情況差別較大，藥材中常有混雜，甚至摻假現(xiàn)象，因此加強(qiáng)柴胡及同屬藥用植物的鑒別及質(zhì)量評(píng)價(jià)、質(zhì)量控制研究，以保證藥品療效和用藥安全。傳統(tǒng)的形態(tài)特征鑒定中藥材具有簡(jiǎn)便、易行、快速、成本低的特點(diǎn)，但需要鑒定人員有豐富的專業(yè)知識(shí)和長(zhǎng)期積累的經(jīng)驗(yàn)，后繼人才乏力?，F(xiàn)代色譜、光譜技術(shù)特別是分子鑒定技術(shù)專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確，鑒定結(jié)果不受外界環(huán)境、植物的生長(zhǎng)發(fā)育階段和樣品的形態(tài)、性狀特征等因素的影響，DNA 分子技術(shù)在鑒定沒(méi)有背景信息的中藥樣品及在方法通用性方面具有優(yōu)勢(shì)，相關(guān)的人員只要掌握樣品處理及儀器操作方法即可勝任該工作。實(shí)踐操作中應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，選擇適宜的方法，發(fā)揮各自的優(yōu)勢(shì)，進(jìn)行生藥鑒定和質(zhì)量評(píng)價(jià)。

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（編輯：梁志慶）