流式細胞技術在醫(yī)學檢驗中的應用研究進展

王建紅

流式細胞技術在醫(yī)學檢驗中的應用研究進展

王建紅

近幾年隨著醫(yī)學技術的不斷發(fā)展，對細胞的研究技術也在不斷的進步，流式細胞術是近幾年適用范圍逐漸加大的一種新技術，主要是對單細胞進行快速定量以及定性分析，這不僅對科學研究有著重要的意義，對于臨床檢驗也有著極大的影響，本文主要是對流式細胞術的應用研究進展進行分析，以期為流式細胞術的發(fā)展和應用提供參考。

流式細胞技術；醫(yī)學檢驗；應用研究；發(fā)展史

作者單位：261000 濰坊，濰坊市中醫(yī)院

流式細胞術是近幾年在臨床醫(yī)學中出現(xiàn)的一種新技術，其結合了多門學科，是一個綜合性的技術，其中包括細胞生物學、物理學技術、激光技術等，尤其是隨著醫(yī)學技術的快速發(fā)展，其使用頻率以及范圍均有提升，流式細胞術主要是使細胞快速流動，在這種情況下對細胞或是細胞中的生物粒子等進行分析和分選的一種技術[1]。目前在遺傳學、腫瘤學、生物細胞學中均有所應用，尤其是在醫(yī)學檢驗中的應用更是頻繁。

1 流式細胞技術

1.1 流式細胞術概述 流式細胞技術屬于綜合性的技術，臨床中也可將其稱為流式細胞分析，流式細胞術主要的應用方式，是通過對流式細胞儀的應用，對懸浮細胞進行測量，并根據(jù)對計算機、流體力學、電子等生物技術學科的應用，對細胞進行具體的分析，包括細胞的功能、特性等[2]。近幾年隨著流式細胞術的發(fā)展和進步，在醫(yī)學檢驗中也逐漸被擴大應用范圍，包括細胞生物檢驗、腫瘤檢驗、血液檢驗等方面。

1.2 流式細胞儀

1.2.1 流式細胞儀的發(fā)展史 在記載中，最早出現(xiàn)細胞計數(shù)的時間是20世紀30年代中期，Guclcer在1947年，通過對層流以及端流的原理研究后，研制出了最初的細胞計數(shù)儀器，煙霧微粒計數(shù)器[3]；而后在1953年，出現(xiàn)可對全血細胞計數(shù)器的描述，這也是后期流式細胞儀的雛形；第一臺光電計數(shù)器1954年；1969年，醫(yī)學界出現(xiàn)第一臺使用熒光檢測進行細胞計數(shù)儀器；而后在1972年，對細胞分選器的研制取得了成功；單克隆抗體技術在1975年被提出，為細胞研究中應用特異性免疫試劑提供了一定的基礎[4-6]。隨著社會的發(fā)展，光電技術也隨之發(fā)展，而流式細胞儀的發(fā)展也有了一定的模塊化。21世紀后，流式細胞儀已逐漸完善，成為細胞分析學以及醫(yī)學檢驗的重要輔助工具。

1.2.2 流式細胞儀的工作原理 流式細胞儀的主要構成，分別為：①液體的流動系統(tǒng)；②激光系統(tǒng)以及光學系統(tǒng)；③光學系統(tǒng)；④信號處理系統(tǒng)以及信號分析系統(tǒng)；⑤細胞進行分類以及篩選的系統(tǒng)。

流式細胞儀的基本工作原理：主要是通過激光對鞘流中的染色細胞標志物進行測量，記錄其中的熒光強度以及熒光寬度、散射光強度等參數(shù)。且由于進行熒光標記單克隆抗體的種類有所不同，進而對定量檢測結果中的細胞抗原物質進行區(qū)分，也可以對細胞成分進行分析[7]。

1.3 流式細胞技術的分析方法

1.3.1 對流式細胞免疫表型進行分析 分子探針選擇熒光素進行標記的單克隆抗體，使用流式細胞儀對細胞上的特異性抗原分子進行檢測，就被稱為流式細胞免疫的表型分析。流式免疫表型分析，對于細胞種類的分析速度較快，操作較簡單。通過對細胞進行免疫熒光染色、或是多色免疫熒光細胞染色等方法對細胞進行檢驗，可以對單細胞的抗原進行鑒別，且鑒別細胞的時間較短，也逐漸成為醫(yī)學檢驗中使用較為先進的細胞檢驗技術，應用范圍也較廣。

1.3.2 對血液淋巴細胞的免疫表型分析 對血液淋巴細胞進行免疫表型分析，沈繼龍等[8,9]的研究中，主要的方法包括以下兩種：①使用雙色熒光對血液淋巴細胞進行免疫表型分析，通過對兩種單克隆抗體使用兩種熒光色素進行標記，并與全血中淋巴細胞膜的特異性抗原進行結合，對紅細胞進行溶解后，將紅細胞碎片以及未結合的抗體進行洗滌，對細胞進行固定，對淋巴細胞亞群的百分率進行計數(shù)；②使用多色熒光對血液淋巴細胞進行免疫表型分析，對單克隆體使用3種熒光素進行標記，使用CD45對血液中的淋巴細胞進行免疫表型分析，可以更為準確地對淋巴細胞亞群進行鑒別。

1.3.3 流式細胞內或細胞核內抗原分析 對流式細胞內或是細胞核內的抗原進行分析的主要使用方法是對細胞進行多色流式細胞免疫表型分析，臨床上多應用在白血病、微量殘留的白血病以及淋巴瘤分級檢測等，一般多數(shù)是將白血病細胞內核抗原以及細胞膜的表面抗原進行同時檢測，檢測結束后對細胞進行多參數(shù)的分析[10]。而細胞內的抗原以及細胞膜表面的抗原進行檢測的過程中，穿透處理是細胞膜和核膜的檢測區(qū)別，在不破壞細胞結果的情況下，又可以使細胞膜和核膜上出現(xiàn)單克隆體自由通過的微孔，且靶抗原抗原性不變以及細胞光散均保持不變。

2 臨床醫(yī)學檢驗中的應用

2.1 細胞免疫功能監(jiān)測 流式細胞術在臨床上，其實質就是為臨床醫(yī)學檢驗的提供了一種對細胞亞群進行檢測的便捷方法。崔曉鳴等[11,12]研究中提到，主要的操作過程為對淋巴細胞膜表面使用熒光抗原以及抗體檢測技術進行抗原、各亞群等進行檢測分析，并對淋巴細胞的各亞群百分比進行計算，進而評估人體細胞的免疫情況。尤其是對一些由于病毒性感染的疾病的預防、治療和預后有著極重要的意義。

2.2 白血病免疫分型 多數(shù)正常的血細胞是由干細胞進行分化、發(fā)育以及成熟變?yōu)楣δ芗毎囊粋€過程中出現(xiàn)細胞膜或是胞核抗原，其變化主要與血細胞的分化發(fā)育的各階段有著極密切的關系，且與細胞系列的分化程度有著明顯的相關特異性。也正是因此，這些血細胞的鑒別和分類的基礎主要為抗原的表達。

3 總結

流式細胞術近幾年被越來越擴大應用范圍，尤其是在醫(yī)學檢驗中的應用頻率逐漸增加，例如通過對DNA含量的檢測對腫瘤進行診斷等，包括對白血病免疫分型分析，且流式細胞術的檢測方法具有分辨率較高、檢測結果準確性高以及速度快等優(yōu)點，逐漸成為推動醫(yī)學快速發(fā)展的新興技術之一。

1 陳鑫,王延偉.流式細胞技術在醫(yī)學檢驗中的應用研究進展.醫(yī)學綜述,2012,22(12): 3822-3824.

2 張洋,蘇玉虹,巴彩鳳,等.流式細胞微球芯片捕獲技術在醫(yī)學領域中的應用價值.中國臨床康復,2006,37(14): 129-131.

3 魏軍,王立斌.流式細胞技術在臨床醫(yī)學檢驗中的應用.寧夏醫(yī)學院學報,2003,2(5): 147-149.

4 沙薇,沙莉,夏一平,等.論臨床醫(yī)學檢驗中的流式細胞技術.中外醫(yī)療,2011,12(10): 186.

5 劉春梅,魏曉鋒,高誠.液相芯片技術及其在蛋白質和核酸檢測中的應用.實驗動物與比較醫(yī)學,2015,35(1): 76-81.

6 梅金平,周欣,姬文婕,等.流式細胞術與光學比濁法檢測血小板聚集率的比較.臨床檢驗雜志,2015,33(2): 81-84.

7 康志紅.流式細胞技術在臨床檢驗中的應用.求醫(yī)問藥: 學術版,2012,10(11): 861-862.

8 沈繼龍,蔣秉坤.流式細胞術及其在醫(yī)學檢驗中的應用.蚌埠醫(yī)學院學報,1994,3(21): 216-218.

9 王斐,徐淑琴,崔巍,等.流式細胞術檢測骨髓增生異常綜合征免疫表型分析及臨床應用前景.中華檢驗醫(yī)學雜志,2016,39(5): 332-335.

10 鄭小江,黃其文,李春曉.免疫組織化學法與流式細胞術在非小細胞肺癌骨髓微轉移檢測中的效果.檢驗醫(yī)學與臨床,2016,13(z2): 142-145.

11 崔曉鳴.流式細胞術應用于醫(yī)學檢驗的研究進展.齊齊哈爾醫(yī)學院學報,2016,18(18): 2336-2337.

12 胡曉蕾,周靈玲,趙志鋼.單平臺與雙平臺流式細胞術T細胞亞群絕對計數(shù)的比較.檢驗醫(yī)學,2016,31(7): 593-598.

Advances in the application of flow cytometry in medical examination

Jianhong WANG
Traditional Chinese Medicine Hospital of Weifang,Weifang 261000,China

In recent years,with the development of medical technology,the research technology of cell has been progressing continuously.Flow cytometry is a new technology which has been gradually applied in recent years,mainly for the rapid quantitative and qualitative analysis of single-cell,which not only has important significance for scientific research,but also has a great influence on clinical examination.This article is the research progress of the application of the convection cell operation,in order to provide reference for the development and application of flow cytometry.

Flow cytometry; Medical examination; Applied research; Development history