滇丹參中丹酚酸B提取及純化工藝研究

石原

摘 要：目的：對滇丹參中的丹酚酸B進行提取，采用絮凝沉降法的方式對丹酚酸B進行純化，以達到最佳的制備工藝手法。方法：在滇丹參中，主要的成分就是丹酚酸B，以丹酚酸B作為最主要的評價指標(biāo)之一，運用正交試驗的方式作為最佳的條件，以此作為提取工藝，進而得到最佳的優(yōu)化條件。結(jié)果：通過實驗?zāi)軌虻玫阶罴训膬?yōu)化條件為選取8倍的水量，反復(fù)進行2次的煎煮，每次煎煮的時間為1小時，絮凝沉降劑則選擇ZTCl+1，在絮凝劑的使用過程中，用量是B：A=4：2，每分鐘進行100r的攪拌，在這樣的環(huán)境下能夠獲得最佳的丹酚酸B含量，這一含量也是最高的。結(jié)論：采用絮凝澄清的方式可以更快的獲得精制水提液，并且具有用量少以及污染小的特點，這樣能夠保證丹酚酸B的含量損失減少到最小。

關(guān)鍵詞：滇丹參；丹酚酸B；ZTCl+1型絮凝劑

在治療調(diào)經(jīng)、活血等癥狀的過程中，經(jīng)常會使用到滇丹參這種藥物，這種藥材屬于唇形科鼠尾草屬植物，從性質(zhì)上來看微寒，具有微微的苦感，在治療月經(jīng)不調(diào)、吐血癥以及子宮出血等疾病中具有十分顯著的效果，通過對現(xiàn)代藥理作用的研究中可以發(fā)現(xiàn)，滇丹參可以促進冠狀動脈血流量的進一步提升，有效的預(yù)防血栓的出現(xiàn)，還能防止血小板的進一步聚集，這樣血黏度也能得到下降，將自由基消除掉，血管的內(nèi)皮功能也可以得到改善。除此之外，滇丹參還能治療冠心病，有效的預(yù)防手術(shù)后出現(xiàn)血管再狹窄的現(xiàn)象，在這一過程中都能獲得十分重要的作用。在滇丹參的主要構(gòu)成中，主要包含具有水溶性的酚酸類成分，還具有脂溶性的丹參酮，在水溶性成分中，丹酚酸B具有較高的含量，并且還具有較強的活性，所以能夠起到抗氧化的作用，同時也能將自由基清除掉。因此本文重點對丹酚酸B的主要含量進行檢測，并且對純化工藝加以進一步的優(yōu)化。

1 儀器與試藥

1.1 儀器。Waters e2695型高效液相色譜儀（美國）；FBl24型電子分析天平（上海舜字恒平科學(xué)儀器有限公司）；SK250HP型超聲提取器（上?？茖W(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥。丹酚酸B對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111562-200302）；滇丹參（購于云南綠生藥業(yè)有限公司）；ZTCl+1天然澄清劑（購于天津正天成澄清技術(shù)有限公司）；乙腈、甲醇為色譜純；水為去離子水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹酚酸B含量測定。首先精密的稱取一定含量的丹酚酸B對照品，在其中加入適量的甲醇，甲醇的容量為75%，制得溶液0.192mg，在相應(yīng)的色譜條件下，選取甲醇、乙腈、甲酸以及水作為流動相，流動相的體積比為26：9：1：64，將色譜柱的溫度調(diào)節(jié)為35℃，檢測波長為286mm，每分鐘的流速為0.8mL，從理論上得到丹酚酸B的塔板數(shù)不得低于2000。緊接著對線性關(guān)系進行考察，同樣是精確的稱量對照品溶液，分別稱取不同μL的溶液進行測定，縱坐標(biāo)是峰面積積分值，橫坐標(biāo)為對照品的進樣量，這樣能夠得到一個線性的回歸方程，結(jié)果顯示在進樣量為0.768至2.688μg的情況下能夠獲得良好的線性關(guān)系。在對樣品進行測定的過程中，先對對照品溶液以及供試品的溶液進行精密的吸取，每10μL進樣，采用外標(biāo)法對含量進行計算。

2.2 提取工藝研究。在選擇提取溶劑的過程中，先選取40g的藥材，藥材稱量的精確度要十分準(zhǔn)確，達到0.01g的標(biāo)準(zhǔn)，將其平均分為4份，在4份藥材中分別加入水、30%的乙醇、50%的乙醇以及70%的乙醇，以此作為溶劑，并且加入8倍量的溶劑，經(jīng)過1.5h以后進行過濾，在過濾完濾渣以后，選取6倍的量溶劑進行提取，在1h以后將濾液合并在一起，對濾液進行濃縮，達到500mL的定容量，采用0.45μm的微孔濾膜進行過濾，進行精密的稱量，得到10μl的溶液，將其注入到液相色譜儀中，對丹酚酸B的含量進行檢測，檢測結(jié)果分別是2.18%、2.45%、2.37%以及2.09%。表明30%乙醇提取含饋最高，但以水為溶劑時，與30%乙醇提取率相差不大，因考慮實際生產(chǎn)的需要，故以水為提取溶劑。

2.3 絮凝澄清純化工藝研究。ZTC1+l澄清劑溶液的配制。①A組分溶液的配制稱取ZTCl+1Ⅲ澄清劑A組分1g，先用少量蒸餾水?dāng)嚦珊隣?，然后加蒸餾水至100mL，溶脹24h，攪勻，雙層紗布濾過，即得l%A組分黏膠液；②B組分溶液的配制稱取ZTCl+1Ⅲ澄清劑B組分1g，用少量1%醋酸溶液溶解并攪成糊狀，然后加l%醋酸至100mL，溶脹24h，攪勻，雙層紗布濾過，即得1%B組分黏膠液。

經(jīng)過預(yù)實驗，發(fā)現(xiàn)丹酚酸B在60℃時絮凝效果較好，故以60℃為絮凝溫度，采用正交試驗對絮凝澄清工藝的主要工藝參數(shù)進行優(yōu)化。選擇藥液濃度、ZTCl+1絮凝劑加入量、攪拌速度3個主要影響因素進行考察，以丹酚酸B含量作為評價指標(biāo)，用L9（34）正交表安排試驗方案，因素水平設(shè)計見表1。

上述最佳提取工藝提取藥材，按正交試驗設(shè)計濃縮至不同濃度，分別量取9份濃縮藥液，每份50mL，在60℃時，加入4mL的1%B組分溶液用相應(yīng)的旋轉(zhuǎn)速度攪拌15min，保溫1h，攪拌3min，然后每隔30min左右攪拌3min；1h后，于60℃溫度恒溫攪拌下，分別加入1%A組分黏膠液攪拌3min，保溫15min。離心過濾，精密量取1mL定容至100mL，用0.45μm的微孔濾膜濾過，測定丹酚酸B含量。實驗結(jié)果為表2、表3。

3 討論

丹酚酸B在水提液中具有不穩(wěn)定的特點，如果提取時間過長以及溫度過高的情況下都會對丹酚酸B的含量造成一定的影響，使其含量進一步的下降，因此在實驗的過程中需要對丹酚酸B進行降解處理，這樣才能保證實驗的順利進行。在實施純化工藝的過程中，結(jié)果顯示在藥液濃縮比為1：5時能夠保證具有最高的保留率，藥液會隨著時間的推移而變得越來越稀，因此丹酚酸B的含量也會變得越來越低。在絮凝劑的組分中，A組分的比例會有所增加，與之相反的結(jié)果是丹酚酸B的含量會出現(xiàn)降低的趨勢，因此在B：A=4：2的情況下能夠達到最佳的效果。采用ZTC1+lⅢ型絮凝澄清劑能夠?qū)⑷芤褐兴械哪z質(zhì)以及蛋白質(zhì)有選擇性的分離開來，并且實現(xiàn)共沉的效果，這種澄清劑沒有毒素，具有安全性的特點，在使用過程中也更加方便，不會對有效成分造成損害。與水提醇沉的工藝相比，采用文中提到的方法能夠進一步的提高目標(biāo)含量，可以有效的減少生產(chǎn)周期與成本，并且在制備的過程中具有吸濕性較低的特點。

參考文獻

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