滇丹參中丹酚酸B提取及純化工藝研究

石原

摘 要：目的：對(duì)滇丹參中的丹酚酸B進(jìn)行提取，采用絮凝沉降法的方式對(duì)丹酚酸B進(jìn)行純化，以達(dá)到最佳的制備工藝手法。方法：在滇丹參中，主要的成分就是丹酚酸B，以丹酚酸B作為最主要的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，運(yùn)用正交試驗(yàn)的方式作為最佳的條件，以此作為提取工藝，進(jìn)而得到最佳的優(yōu)化條件。結(jié)果：通過(guò)實(shí)驗(yàn)?zāi)軌虻玫阶罴训膬?yōu)化條件為選取8倍的水量，反復(fù)進(jìn)行2次的煎煮，每次煎煮的時(shí)間為1小時(shí)，絮凝沉降劑則選擇ZTCl+1，在絮凝劑的使用過(guò)程中，用量是B：A=4：2，每分鐘進(jìn)行100r的攪拌，在這樣的環(huán)境下能夠獲得最佳的丹酚酸B含量，這一含量也是最高的。結(jié)論：采用絮凝澄清的方式可以更快的獲得精制水提液，并且具有用量少以及污染小的特點(diǎn)，這樣能夠保證丹酚酸B的含量損失減少到最小。

關(guān)鍵詞：滇丹參；丹酚酸B；ZTCl+1型絮凝劑

在治療調(diào)經(jīng)、活血等癥狀的過(guò)程中，經(jīng)常會(huì)使用到滇丹參這種藥物，這種藥材屬于唇形科鼠尾草屬植物，從性質(zhì)上來(lái)看微寒，具有微微的苦感，在治療月經(jīng)不調(diào)、吐血癥以及子宮出血等疾病中具有十分顯著的效果，通過(guò)對(duì)現(xiàn)代藥理作用的研究中可以發(fā)現(xiàn)，滇丹參可以促進(jìn)冠狀動(dòng)脈血流量的進(jìn)一步提升，有效的預(yù)防血栓的出現(xiàn)，還能防止血小板的進(jìn)一步聚集，這樣血黏度也能得到下降，將自由基消除掉，血管的內(nèi)皮功能也可以得到改善。除此之外，滇丹參還能治療冠心病，有效的預(yù)防手術(shù)后出現(xiàn)血管再狹窄的現(xiàn)象，在這一過(guò)程中都能獲得十分重要的作用。在滇丹參的主要構(gòu)成中，主要包含具有水溶性的酚酸類(lèi)成分，還具有脂溶性的丹參酮，在水溶性成分中，丹酚酸B具有較高的含量，并且還具有較強(qiáng)的活性，所以能夠起到抗氧化的作用，同時(shí)也能將自由基清除掉。因此本文重點(diǎn)對(duì)丹酚酸B的主要含量進(jìn)行檢測(cè)，并且對(duì)純化工藝加以進(jìn)一步的優(yōu)化。

1 儀器與試藥

1.1 儀器。Waters e2695型高效液相色譜儀（美國(guó)）；FBl24型電子分析天平（上海舜字恒平科學(xué)儀器有限公司）；SK250HP型超聲提取器（上?？茖W(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥。丹酚酸B對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111562-200302）；滇丹參（購(gòu)于云南綠生藥業(yè)有限公司）；ZTCl+1天然澄清劑（購(gòu)于天津正天成澄清技術(shù)有限公司）；乙腈、甲醇為色譜純；水為去離子水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹酚酸B含量測(cè)定。首先精密的稱(chēng)取一定含量的丹酚酸B對(duì)照品，在其中加入適量的甲醇，甲醇的容量為75%，制得溶液0.192mg，在相應(yīng)的色譜條件下，選取甲醇、乙腈、甲酸以及水作為流動(dòng)相，流動(dòng)相的體積比為26：9：1：64，將色譜柱的溫度調(diào)節(jié)為35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為286mm，每分鐘的流速為0.8mL，從理論上得到丹酚酸B的塔板數(shù)不得低于2000。緊接著對(duì)線性關(guān)系進(jìn)行考察，同樣是精確的稱(chēng)量對(duì)照品溶液，分別稱(chēng)取不同μL的溶液進(jìn)行測(cè)定，縱坐標(biāo)是峰面積積分值，橫坐標(biāo)為對(duì)照品的進(jìn)樣量，這樣能夠得到一個(gè)線性的回歸方程，結(jié)果顯示在進(jìn)樣量為0.768至2.688μg的情況下能夠獲得良好的線性關(guān)系。在對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定的過(guò)程中，先對(duì)對(duì)照品溶液以及供試品的溶液進(jìn)行精密的吸取，每10μL進(jìn)樣，采用外標(biāo)法對(duì)含量進(jìn)行計(jì)算。

2.2 提取工藝研究。在選擇提取溶劑的過(guò)程中，先選取40g的藥材，藥材稱(chēng)量的精確度要十分準(zhǔn)確，達(dá)到0.01g的標(biāo)準(zhǔn)，將其平均分為4份，在4份藥材中分別加入水、30%的乙醇、50%的乙醇以及70%的乙醇，以此作為溶劑，并且加入8倍量的溶劑，經(jīng)過(guò)1.5h以后進(jìn)行過(guò)濾，在過(guò)濾完濾渣以后，選取6倍的量溶劑進(jìn)行提取，在1h以后將濾液合并在一起，對(duì)濾液進(jìn)行濃縮，達(dá)到500mL的定容量，采用0.45μm的微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，進(jìn)行精密的稱(chēng)量，得到10μl的溶液，將其注入到液相色譜儀中，對(duì)丹酚酸B的含量進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果分別是2.18%、2.45%、2.37%以及2.09%。表明30%乙醇提取含饋?zhàn)罡?，但以水為溶劑時(shí)，與30%乙醇提取率相差不大，因考慮實(shí)際生產(chǎn)的需要，故以水為提取溶劑。

2.3 絮凝澄清純化工藝研究。ZTC1+l澄清劑溶液的配制。①A組分溶液的配制稱(chēng)取ZTCl+1Ⅲ澄清劑A組分1g，先用少量蒸餾水?dāng)嚦珊隣?，然后加蒸餾水至100mL，溶脹24h，攪勻，雙層紗布濾過(guò)，即得l%A組分黏膠液；②B組分溶液的配制稱(chēng)取ZTCl+1Ⅲ澄清劑B組分1g，用少量1%醋酸溶液溶解并攪成糊狀，然后加l%醋酸至100mL，溶脹24h，攪勻，雙層紗布濾過(guò)，即得1%B組分黏膠液。

經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)丹酚酸B在60℃時(shí)絮凝效果較好，故以60℃為絮凝溫度，采用正交試驗(yàn)對(duì)絮凝澄清工藝的主要工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。選擇藥液濃度、ZTCl+1絮凝劑加入量、攪拌速度3個(gè)主要影響因素進(jìn)行考察，以丹酚酸B含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用L9（34）正交表安排試驗(yàn)方案，因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

上述最佳提取工藝提取藥材，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)濃縮至不同濃度，分別量取9份濃縮藥液，每份50mL，在60℃時(shí)，加入4mL的1%B組分溶液用相應(yīng)的旋轉(zhuǎn)速度攪拌15min，保溫1h，攪拌3min，然后每隔30min左右攪拌3min；1h后，于60℃溫度恒溫?cái)嚢柘?，分別加入1%A組分黏膠液攪拌3min，保溫15min。離心過(guò)濾，精密量取1mL定容至100mL，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，測(cè)定丹酚酸B含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為表2、表3。

3 討論

丹酚酸B在水提液中具有不穩(wěn)定的特點(diǎn)，如果提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)以及溫度過(guò)高的情況下都會(huì)對(duì)丹酚酸B的含量造成一定的影響，使其含量進(jìn)一步的下降，因此在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中需要對(duì)丹酚酸B進(jìn)行降解處理，這樣才能保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。在實(shí)施純化工藝的過(guò)程中，結(jié)果顯示在藥液濃縮比為1：5時(shí)能夠保證具有最高的保留率，藥液會(huì)隨著時(shí)間的推移而變得越來(lái)越稀，因此丹酚酸B的含量也會(huì)變得越來(lái)越低。在絮凝劑的組分中，A組分的比例會(huì)有所增加，與之相反的結(jié)果是丹酚酸B的含量會(huì)出現(xiàn)降低的趨勢(shì)，因此在B：A=4：2的情況下能夠達(dá)到最佳的效果。采用ZTC1+lⅢ型絮凝澄清劑能夠?qū)⑷芤褐兴械哪z質(zhì)以及蛋白質(zhì)有選擇性的分離開(kāi)來(lái)，并且實(shí)現(xiàn)共沉的效果，這種澄清劑沒(méi)有毒素，具有安全性的特點(diǎn)，在使用過(guò)程中也更加方便，不會(huì)對(duì)有效成分造成損害。與水提醇沉的工藝相比，采用文中提到的方法能夠進(jìn)一步的提高目標(biāo)含量，可以有效的減少生產(chǎn)周期與成本，并且在制備的過(guò)程中具有吸濕性較低的特點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1]李兵，劉麗，周大錚，李德坤，楊?lèi)偽?，鞠?ài)春.丹參鮮藥材中丹酚酸B含量測(cè)定[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2016（10）.

[2]侯俊，張立國(guó)，倪力軍，賀靜.雙氫丹酚酸B及丹酚酸B在小鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及組織分布的比較研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2010（04）.

[3]黃超，余馳，陳科力.滇丹參與丹參中丹酚酸B的含量對(duì)比[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009（11）.