柳州地區(qū)成人血清和尿中淀粉酶生物參考區(qū)間的建立

靳華+蒙雨明

摘要：目的 以本實驗室血清淀粉酶（AMY）和尿淀粉酶生化項目為例，探討建立適合本實驗室的生物參考區(qū)間的方法。方法 應(yīng)用美國臨床實驗室標準化研究院（CLSI）C28-A2文件推薦方法，結(jié)合IS015189：2003（E）《醫(yī)學(xué)實驗室--質(zhì)量和能力的專用要求》條款要求，同時參考試劑生產(chǎn)廠家的說明書、權(quán)威書籍期刊或轉(zhuǎn)移其他醫(yī)院實驗室的生物參考區(qū)間，進行驗證，驗證不通過的項目。收集本地區(qū)120例健康成人參考個體建立適用于本實驗室的生物參考區(qū)間，定期進行臨床評審。結(jié)果 血清以及尿AMY現(xiàn)用生物參考區(qū)間驗證未通過驗證，須自行建立生物參考區(qū)間。血清AMY自建生物參考區(qū)間為39-152U/L，尿AMY自建參考區(qū)間：男性56～897 U/L，女性34～758 U/L。結(jié)論 采用本研究方法建立實驗室生物參考區(qū)間能確保生物參考區(qū)間符合臨床要求，結(jié)果可靠、準確。方法科學(xué)、實用。

關(guān)鍵詞：血清淀粉酶；尿淀粉酶；成人；參考區(qū)間；建立

Abstract：Objective To explore a suitable method for our laboratory to establish the biological reference interval，taking serum amylase （AMY） and urine amylase as examples. Methods According to the items of ISO15189：2003（E） "the medical laboratory- The quality and the ability of special-purpose"and the methods recommended by （CLSI） C28-A2， a reference reagent manufacturers instructions， or transfer authority books ，other hospital laboratories biological reference interval， then experimental verification，when validation project is not passed， collected 120 healthy adult individuals in the region establish reference applicable to the biological laboratory reference intervals， regular clinical assessment. Results Serum AMY and urinary AMY active biology reference interval validation does not pass， must establish a new biology reference.The new serum AMY interval was 39-152U / L， the urine AMY interval was： male 56-897 U / L， female 34-758 U / L. Conclusion The study established clinical laboratory methods can effectively guarantee the biological reference interval test indicators of biological reference intervals reliable， accurate， scientific， practical， biological reference intervals to ensure compliance with clinical requirements.

Key words：Serum amylase；Urine amylase；Adult；Biology reference interval；Establishement

生物參考區(qū)間是解釋檢驗結(jié)果分析檢驗信息的一個基本尺度和依據(jù)[1]。實驗室給臨床提供檢驗項目可靠的生物參考區(qū)間，才能使臨床對患者或健康體檢者的診斷治療有明確的指引[2]。我國目前所使用的參考區(qū)間大多來自教科書和試劑盒說明書，這些參考區(qū)間大多源自國外二三十年前對白種人的研究。由于不同地區(qū)的人群在遺傳學(xué)、生活環(huán)境和飲食習(xí)慣上都存在差異，所以這些建立在白種人體系上的參考區(qū)間在我國應(yīng)用時可能在某些項目上存在一定的偏差。為此國際臨床化學(xué)和檢驗醫(yī)學(xué)聯(lián)合會（International Federation of Clinical Chemistry，IFCC），建議每個臨床實驗室都能建立符合本地人群特征的參考區(qū)間，或者至少能夠驗證由其他途徑獲得的參考區(qū)間[3]。ISO15189中明確要求，應(yīng)定期評審生物參考區(qū)間[4] 。美國臨床實驗室標準化研究院 （Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）亦指出每個實驗室應(yīng)該建立自己的參考區(qū)間[5]如驗證現(xiàn)有參考區(qū)間不再適用，應(yīng)采取糾正措施。在我科執(zhí)行ISO15189認可的過程中，我們結(jié)合ISO15189條款要求和美國臨床實驗室標準協(xié)會CLSI C28-A2文件[6]推薦方法，建立一個適合本實驗室的生物參考區(qū)間，保證生物參考區(qū)間的可靠、適用，為臨床提供準確的診治依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1驗證樣本 以IFCC推薦方法收集2011年7月～9月360例健康參考個體樣本，均來源于我院體檢中心健康體檢者。所有入選者均排除胰腺炎、腮腺炎等引起淀粉酶異常的相關(guān)疾病，近期無手術(shù)，未服用藥物，采樣前一天受檢者無飲酒及劇烈運動，空腹采樣。其中男性180例，年齡21歲～63歲，平均年齡40歲，女性180例，年齡20～59歲，平均年齡38歲。

1.1.2檢測儀器試劑 羅氏公司P800生化分析儀、羅氏診斷公司配套試劑、校準品、質(zhì)控品。

1.1.3質(zhì)量控制 儀器通過性能驗證，檢測中應(yīng)用羅氏低值與高值質(zhì)控品對樣本分析進行質(zhì)量控制，檢測系統(tǒng)正常。

1.2方法

1.2.1檢測20例樣本，檢測結(jié)果95%在現(xiàn)用的參考區(qū)間之內(nèi)，即20例中有19例在范圍內(nèi)，只有5%，即1例結(jié)果在參考區(qū)間之外，則說明現(xiàn)用參考區(qū)間有效。如果有大于2例檢測數(shù)據(jù)在參考區(qū)間之外，則可進一步進行建立生物參考區(qū)間實驗。

1.2.2繼續(xù)收集至120例健康參考個體，測得結(jié)果后進行離群值的判斷。可通過1/3規(guī)則進行判斷。疑似離群值和其相鄰位置數(shù)值的差值（D）和數(shù)據(jù)全距（R）相除，D與R的比值應(yīng)≤1/3，如>1/3則該點考慮為離群點。如有2個或以上疑似離群值，若比值>1/3，則所有結(jié)果都不應(yīng)保留；如比值<1/3，則可保留所有數(shù)據(jù)。當有離群值去除后，可將其他數(shù)據(jù)補足。

1.2.3繪制直方圖 可直接觀察數(shù)據(jù)的分布特征。此時可運用百分位數(shù)法確定改組數(shù)據(jù)2.5%和97.5%位數(shù)的參考限，從而建立參考區(qū)間。在獲取與分析對象標本前，需要考慮到為對象中亞組建立獨立區(qū)間的可能性。當有足夠的臨床證據(jù)證明以及具備生理學(xué)意義時，才需要為性別或者不同年齡組分別建立獨立的參考區(qū)間。z檢驗公式：

式中n1和n2分別為各自亞組中參考值的數(shù)目，x1和x2是兩個亞組觀測值的均值，s1和s2為兩組的標準差。通過計算z值判斷是否需要分組：如標準差s2為較大s，應(yīng)檢查它是否>1.5倍的s1，即s2/（s2-s1）是否>3。若計算z值超過z*值或較大s2>1.5 s1，則都須考慮分組。

1.2.4 ISO15189中要求臨床實驗室建立參考區(qū)間后應(yīng)聯(lián)系臨床醫(yī)生提供在實際臨床工作中對于此項目的意見，至少一年定期進行評審一次，便于發(fā)現(xiàn)問題，持續(xù)改進。

2結(jié)果

2.1應(yīng)用CLSI C28-A2文件推薦方法，對20例健康參考個體進行驗證，檢測結(jié)果超出現(xiàn)用采用試劑說明書的參考區(qū)間，顯示現(xiàn)用AMY生物參考區(qū)間不適用，見表1。

按CLSI C28-A2文件要求，收集120健康參考個體。結(jié)果見表2，表3，表4。結(jié)合觀察圖1、圖2、圖3，

從圖1、圖2可看出血清AMY、男性尿AMY分布大致呈正態(tài)分布，而圖3女性尿AMY分布呈右偏態(tài)分布，對三組數(shù)據(jù)采用百分位數(shù)法確定2.5%和97.5%位數(shù)的參考限，經(jīng)計算取第3和118位數(shù)值，得出血清AMY參考區(qū)間為：39～152U/L，尿AMY：男56～852 U/L，女 38～716 U/L。

2.2本例3組數(shù)據(jù)經(jīng)觀察計算未發(fā)現(xiàn)離群值。

2.3查詢試劑說明書和文獻資料顯示[7]，同時臨床證據(jù)顯示血清AMY不存在明顯的生物差異。則該項目不無需作z檢驗確定分組。而尿AMY要按性別分組計算參考區(qū)間。本例中每組參考個體數(shù)為120，則臨界值z*=3，將表3、表4數(shù)據(jù)帶入計算z=6.09>z*=3，所以尿AMY需按性別分組分別統(tǒng)計。

3討論

近年來，隨著各種全自動生化分析儀器的普及應(yīng)用，大大提高了檢驗速度與精確性，但對于各項目的參考區(qū)間我們卻還多是沿用試劑廠商提供的或是《全國臨床檢驗操作規(guī)程》及教科書上的，未考慮到民族及地域、性別、年齡等差異，而在柳州地區(qū)，對本地區(qū)的生化項目的參考區(qū)間的研究極少，亟需對本地區(qū)進行多項目的參考區(qū)間調(diào)查。本實驗室對血清AMY和尿AMY現(xiàn)用生物參考區(qū)間進行驗證，驗證不通過，需重新建立區(qū)間。原用參考區(qū)間血清AMY：28～100 U/L，男性尿AMY：16～491 U/L，女性尿AMY：21～447 U/L。其中對于尿AMY通過參閱相關(guān)文獻和臨床效用需按性別分組，進行z-檢驗也支持分組。新建立參考區(qū)間血清：39～152 U/L男性尿AMY：56～897 U/L，女性尿AMY：34～758 U/L，兩者差異明顯。造成結(jié)果差異的因素是多方面的，方法學(xué)的不同，研究人群的地域、民族、生活習(xí)慣等不同可能導(dǎo)致了本研究結(jié)果的不同。血清和尿AMY在臨床常用于胰腺炎和急腹癥的診斷，其值對于胰腺炎的發(fā)病時間和其他急腹癥的鑒別診斷有較大參考價值。這時為臨床提供準確適用的參考區(qū)間則相當重要，如果參考區(qū)間不準確，會給臨床醫(yī)生帶來困惑，導(dǎo)致漏診誤診，延誤治療，甚至造成嚴重后果，由此可見實驗室建立生物參考區(qū)間工作意義重大。對于尿AMY在一定程度上會受到采樣范圍和參考個體尿量的影響，如有必要，應(yīng)建立使用相同檢測系統(tǒng)的多中心參考區(qū)間[8]，以期將干擾因素減少。同時，依據(jù)ISO15189要求我們也定期邀請臨床醫(yī)生進行臨床評審，綜合臨床資料獲取對相關(guān)疾病的最新診治訊息以彌補檢驗科單方建立參考區(qū)間的不足。本研究調(diào)查了柳州地區(qū)健康成年人群血清和尿AMY參考值水平，并建立參考區(qū)間，至今臨床反映良好，該方法實用科學(xué)。當然本地區(qū)的自然環(huán)境和人們生活飲食習(xí)慣也在不斷的變化當中，建立參考區(qū)間將是一項長期工作，還需不斷的加大樣本量，累積數(shù)據(jù)，盡可能排除影響因素，經(jīng)過一系列科學(xué)的評估才能更具地域代表性，更適用于當?shù)厝巳骸?/p>

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