• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    玉米骨干親本及其衍生系中基因的序列變異及與株高等性狀的關(guān)聯(lián)分析

    2017-02-15 19:19:29胡雅潘亮徐辰武
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年8期
    關(guān)鍵詞:關(guān)聯(lián)分析株高玉米

    胡雅+潘亮+徐辰武

    摘要:玉米[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因是顯性矮化基因,由于其突變體在DELLA區(qū)的堿基缺失而使其呈組成型表達(dá)抑制GA響應(yīng),從而表現(xiàn)出植株矮小,種子發(fā)芽率低,葉片呈暗綠色等特性。對(duì)玉米[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因在來源廣泛的96份玉米自交系中進(jìn)行了目標(biāo)序列重測序,并與株高和穗位高2個(gè)株型性狀以及穗長、穗粗、軸粗、穗質(zhì)量、行粒數(shù)、穗行數(shù)和粒質(zhì)量7個(gè)穗部性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因在供試玉米自交系中共有66個(gè)變異位點(diǎn),包括18個(gè)SNP和48個(gè)InDel。在編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)24個(gè)變異位點(diǎn),包括6個(gè)SNP和18個(gè)InDel位點(diǎn)。關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn),玉米[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因中1個(gè)非同義突變位點(diǎn)與株高顯著關(guān)聯(lián),另外1個(gè)非同義突變位點(diǎn)與穗長顯著關(guān)聯(lián)。

    關(guān)鍵詞:玉米;骨干親本基因;株高;關(guān)聯(lián)分析

    中圖分類號(hào): S513.03文獻(xiàn)標(biāo)志碼:

    赤霉素是植物重要的生長調(diào)控因子[1],其最主要的功能就是控制莖的伸長生長。大量矮稈基因的研究結(jié)果表明,株高與赤霉素生物合成和赤霉素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān)。

    GA信號(hào)傳導(dǎo)途徑中基因突變時(shí),部分持續(xù)對(duì)GA響應(yīng)的突變體表現(xiàn)為徒長,植株纖細(xì)并且葉片灰綠,這和施加過量GA的植株表型一樣;而無法對(duì)GA響應(yīng)的突變體表現(xiàn)為葉片深綠、植株矮化、育性降低等,這與GA突變體合成受阻的表型相同,并且不可以通過外源施加GA得以恢復(fù)[2-3]。在植物體中,DELLA蛋白質(zhì)是GA響應(yīng)的最主要抑制因子,而GA傳導(dǎo)途徑的開啟主要是通過解除這種抑制作用得以實(shí)現(xiàn)。DELLA蛋白質(zhì)在N端的DELLA結(jié)構(gòu)域中有2個(gè)保守元件:DELLA和VHYNP,這2個(gè)元件的DELLA類蛋白能夠抑制對(duì)赤霉素的響應(yīng)。本研究中的玉米[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因,其3個(gè)突變體[WTBX][STBX]d8-1、d8-2023[WTBZ][STBZ]和[WTBX][STBX]d8-Mp1[WTBZ][STBZ]在DELLA區(qū)、VHYNP區(qū)且2個(gè)區(qū)域同時(shí)缺失氨基酸導(dǎo)致植株呈明顯矮化[4]。這些表明,[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因通過在GA轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制GA響應(yīng),來達(dá)到調(diào)控株高的目的。

    玉米是世界三大糧食作物之一,也是集糧、飼、經(jīng)“三元一體”的優(yōu)勢(shì)作物。2003年我國科學(xué)家率先提出了農(nóng)作物“骨干親本”的概念。此后,很多研究者利用分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)玉米、小麥、大麥等作物的一些骨干親本進(jìn)行了分析,認(rèn)為深入研究并充分利用骨干親本有助于育種效率的顯著提高。在我國的玉米生產(chǎn)中骨干親本主要有黃早四、MO17、掖478、丹340、自330這5個(gè)骨干親本,在育種中發(fā)揮了很重要的作用[5]。此外,作物的株高與抗倒性、產(chǎn)量等性狀緊密相關(guān),是重要農(nóng)藝性狀之一。目前,矮稈作物在生產(chǎn)上已經(jīng)顯示了巨大的增產(chǎn)潛力,矮稈基因的發(fā)掘及遺傳研究利用在育種中越來越受重視。在玉米中,已經(jīng)有大量的矮稈突變體被發(fā)現(xiàn),其中玉米[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]是一種對(duì)外源GA響應(yīng)并發(fā)生改變的矮化突變體。研究表明,玉米[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]突變體是由于[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因的DELLA結(jié)構(gòu)域有堿基的缺失和突變,從而導(dǎo)致了矮稈的突變表型[6]。因此,[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因與株高的關(guān)聯(lián)分析研究十分重要。此前,Thornsberry等首次運(yùn)用了基于候選基因關(guān)聯(lián)分析的方法研究了玉米的[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因,發(fā)現(xiàn)[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因中有9個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)與玉米開花期的變化顯著相關(guān)[4];Camus-Kulandaivelu 等選用不同的玉米自交系也得出相同結(jié)論[7]。Andersen等用另一玉米自交系群體試驗(yàn)證明玉米[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因序列多樣性與開花期和株高有關(guān)[8]。本研究選用來源廣泛的96份玉米自交系(包括5大骨干親本及其衍生系及糯玉米自交系)作為試驗(yàn)對(duì)象,在對(duì)目標(biāo)基因測序的基礎(chǔ)上,結(jié)合株高性狀的測定結(jié)果,利用候選基因的關(guān)聯(lián)分析方法,解析自然變異群體中[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因的序列變異對(duì)株高等性狀的作用及其影響,從而篩選出一些重要的變異位點(diǎn)以及優(yōu)異位點(diǎn)組合,為我國玉米骨干自交系優(yōu)良基因的有效利用和玉米優(yōu)質(zhì)育種提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐[9]。

    1材料與方法

    1.1試驗(yàn)材料

    本研究選取具有廣泛代表性的玉米自交系96份,包括我國溫帶玉米的5個(gè)雜種優(yōu)勢(shì)群的代表性種質(zhì)、熱帶/亞熱帶種質(zhì)、糯玉米自交系和來源于國外的種質(zhì)材料(表1)。供試材料于2014年夏季種植于青島基地,田間試驗(yàn)采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì),重復(fù)2次。每個(gè)材料種植2行,每行10株,常規(guī)水肥田間管理。授粉20天后,每行選取5株,分別測量株高和穗位高。果穗收獲后晾干,考察穗部性狀,包括穗長、穗粗、軸粗、穗質(zhì)量、行粒數(shù)、穗行數(shù)、穗粒數(shù)。

    1.2DNA的提取和基因重測序

    采用改良的CTAB 法[10]完成DNA提取。用分光光度計(jì)檢測DNA濃度,并以B73的[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因(GRMZM2G144744)序列為模板,在供試材料中采用NimbleGen[11]平臺(tái)技術(shù)進(jìn)行目標(biāo)基因區(qū)段序列捕獲并重測序。基因的目標(biāo)序列定點(diǎn)捕獲和重測序委托華大基因有限公司完成。NimbleGen定點(diǎn)序列捕獲主要是利用雜交和DNA微陣列技術(shù)基因分離原理來捕獲目標(biāo)區(qū)域,與目前被廣泛采用的基因組重測序技術(shù)相比,該方法具有高特異性和高覆蓋度、捕獲區(qū)域可按需設(shè)計(jì)和省時(shí)省力等優(yōu)點(diǎn)。

    1.3數(shù)據(jù)分析

    2.3群體結(jié)構(gòu)分析

    為了解關(guān)聯(lián)作圖群體的遺傳結(jié)構(gòu),基于前期3 072個(gè)SNP分析自交系多樣性的數(shù)據(jù),采用STRUCTURE軟件中基于數(shù)學(xué)模型的方法對(duì)96份自交系進(jìn)行群體結(jié)構(gòu)分析,將每個(gè)自交系細(xì)分到相應(yīng)的亞群,通過分析比較發(fā)現(xiàn),當(dāng)K=3時(shí),獲得了穩(wěn)定的α值,基于模型的亞群,大都與自交系的系譜來源和系統(tǒng)聚類結(jié)果一致(圖1)。在自交系不是完全血緣純和的情況下,群體結(jié)構(gòu)分析對(duì)關(guān)聯(lián)分析篩選特定準(zhǔn)確等位變異位點(diǎn)起到了關(guān)鍵性的矯正作用。

    2.4[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因的連鎖不平衡

    連鎖不平衡(LD)是不同基因座位上等位基因的非隨機(jī)組合現(xiàn)象。關(guān)聯(lián)分析是利用等位基因間LD的統(tǒng)計(jì)特性預(yù)測染色體某個(gè)區(qū)段與表型性狀的關(guān)聯(lián)程度。r2則是一種與等位頻率相關(guān)的度量參數(shù),被用來衡量2個(gè)位點(diǎn)間的LD水平(圖2)。在[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因的序列上分散分布著一些較強(qiáng)的LD結(jié)構(gòu)?;騕WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]的多態(tài)性位點(diǎn)221、407和116、117、196、202,246和44、53、55,44和53、55,60和61、62,280和239,2 760 和66,816和813等之間均存在較強(qiáng)的連鎖不平衡結(jié)構(gòu)(r2>0.9);如圖3,對(duì)[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因分析區(qū)LD的衰退程度進(jìn)行檢測,以位點(diǎn)距離和連鎖不平衡參數(shù)r2作散點(diǎn)圖,發(fā)現(xiàn)玉米[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因的連鎖不平衡隨距離的增加而快速衰減,在500 bp左右就衰退至0.1水平。

    2.5[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因與表型的關(guān)聯(lián)分析

    分別對(duì)株高、穗位高、穗長、穗粗、軸粗、穗質(zhì)量、行粒數(shù)、穗行數(shù)和粒質(zhì)量共9個(gè)玉米產(chǎn)量性狀進(jìn)行測定,方差分析結(jié)果表明,這9個(gè)農(nóng)藝性狀均在供試玉米自交系間存在極顯著差異(表4),這說明各性狀在不同自交系中具有較高的遺傳多樣性。利用變異系數(shù)表示每一性狀的絕對(duì)變異度,發(fā)現(xiàn)每一性狀均具有較高的變異度,但不同性狀的變異系數(shù)也存在較大差異。變異系數(shù)最高的為粒質(zhì)量,達(dá)到45.22%,變異系數(shù)最低的為穗粗,僅為12.59%。

    利用TASSEL3.0 軟件中的MLM模塊對(duì)株高性狀與[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因序列多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。在編碼區(qū)內(nèi)共檢測到2個(gè)SNP位點(diǎn)與玉米株高存在顯著關(guān)聯(lián)(表5),這2個(gè)[CM(25]變異位點(diǎn)處于完全連鎖不平衡狀態(tài),對(duì)株高的貢獻(xiàn)率為[CM)]

    4.98%。這2個(gè)SNP中,SNP_2825為非同義突變,能引起蛋白質(zhì)序列的改變,位于編碼區(qū)的 SNP_1525變異位點(diǎn)也為非同義突變,并與穗長有關(guān),貢獻(xiàn)率為10.94%。此外,在啟動(dòng)子區(qū)SNP_286和SNP_301也處于完全連鎖不平衡狀態(tài),并與穗位高顯著關(guān)聯(lián),貢獻(xiàn)率為8.18%。除株高,穗位高和穗長之外,本研究中所鑒定的其他農(nóng)藝性狀不與[WTBX][STBX]Dwarf8基因序列變異存在顯著關(guān)聯(lián)。

    3討論

    豐富的變異是作物遺傳改良的基礎(chǔ)。作物種質(zhì)材料的變異包括表型特征的變異和遺傳基礎(chǔ)的變異。豐富的表型變異和核苷酸多樣性也是通過連鎖和關(guān)聯(lián)分析進(jìn)行遺傳作圖的重要基礎(chǔ)[20]。本研究中的供試群體在表型性狀上存在明顯的差異,估計(jì)這些性狀大部分是由遺傳基礎(chǔ)起到主要作用。對(duì)目的基因進(jìn)行核苷酸多態(tài)性分析,并進(jìn)而通過遺傳轉(zhuǎn)化等途徑,為在分子水平上有目的的進(jìn)行作物遺傳改良創(chuàng)造條件。SNP和InDel是基因核苷酸變異中最常見的,往往能引起表型的變異。這其中SNP是基因組中發(fā)生頻率最高、數(shù)量最多而且密度最大的變異。本研究中,我們對(duì)[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因進(jìn)行了序列變異分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在該基因位點(diǎn)上存在著豐富的變異。與非編區(qū)相比,編碼區(qū)的核苷酸變異頻率較低,主要是受到更多選擇壓力引起的,這種趨勢(shì)在其他許多基因的核苷酸變異研究中得到證實(shí)。Ching等對(duì)36個(gè)玉米自交系的18個(gè)基因進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)每41 bp會(huì)有1個(gè)多態(tài)性位點(diǎn),每47.7 bp處會(huì)有1個(gè)SNP,85 bp處會(huì)有1個(gè)InDel[21]。相比較而言,本研究中的SNP和InDel頻率都偏低,造成上述基因間變異頻率差異的主要原因是人工選擇、自然選擇以及遺傳漂變等。

    玉米產(chǎn)量的形成是一個(gè)復(fù)雜的過程,受多個(gè)基因及基因網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控,也受到各個(gè)性狀的影響。株高作為一個(gè)重要的農(nóng)藝性狀,對(duì)產(chǎn)量的作用有著深遠(yuǎn)的影響[22-23]。育種家將半矮基因?qū)胱魑镆l(fā)了谷物產(chǎn)量飛躍的“綠色革命”。但綠色革命在提高谷物產(chǎn)量的同時(shí),也帶來了許多不利的影響,如肥料濫用使得土壤變得貧瘠,殺蟲劑的大面積推廣造成了空氣、水源和土壤污染,農(nóng)民種植品種過于單一化導(dǎo)致遺傳多樣[JP3]性急劇降低。這些弊端嚴(yán)重影響了谷物的可持續(xù)發(fā)展,也使得運(yùn)用新的品種改良理念和采取行之有效的舉措顯得更加重要。

    矮稈玉米相對(duì)于高稈來說,有著不可比擬的優(yōu)勢(shì),有著更高的干物質(zhì)轉(zhuǎn)化率,適宜密植,能實(shí)現(xiàn)高產(chǎn),生產(chǎn)上具有巨大潛能。但矮源的遺傳多樣性低不利于玉米的產(chǎn)量和品質(zhì)提高,大部分矮稈基因與某些不良性狀基因緊密連鎖,一因多效,使得這些基因的個(gè)體大多畸形,不便于繁殖利用。因此,創(chuàng)造或篩選新的矮源和矮稈基因?qū)τ衩子N和生產(chǎn)都具有重要的意義。本研究中在的目的基因[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]就是一個(gè)顯性矮化基因,由于其突變體在DELLA區(qū)的堿基缺失而使其呈組成型表達(dá)抑制GA響應(yīng),使得突變體植株表現(xiàn)出植株矮小。本研究中在對(duì)其進(jìn)行序列分析的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對(duì)其變異位點(diǎn)與[CM(25][KG*8]株高、穗位高、穗長等9個(gè)產(chǎn)量相關(guān)性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析,[CM)]

    4結(jié)論

    玉米基因的全長序列在96個(gè)常用玉米自交系中共發(fā)現(xiàn)了48個(gè)SNP和18個(gè)InDel。該基因編碼區(qū)含有6個(gè)SNP,可將96個(gè)自交系劃分成20種單倍型,玉米[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因符合中性進(jìn)化模型假設(shè),沒有發(fā)生純化選擇,基于候選基因的關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn),該基因在編碼區(qū)的1個(gè)非同義突變與株高顯著關(guān)聯(lián),另外1個(gè)非同義突變與穗長顯著關(guān)聯(lián)。研究結(jié)果表明,玉米[WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ]基因的變異位點(diǎn)可用于分子標(biāo)記輔助選擇改良現(xiàn)有種質(zhì),對(duì)中國玉米株型改良的分子設(shè)計(jì)育種具有一定的指導(dǎo)意義。

    [HS2*1][HT8.5H]參考文獻(xiàn):

    [1]Phinney B O. The history of gibberellins[J]. The Biochemistry and Physiology of Gibberellins,1983,1:19-52.

    [2]Silverstone A L,Ciampaglio C N,Sun T. The Arabidopsis RGA gene encodes a transcriptional regulator repressing the gibberellin signal transduction pathway[J]. The Plant Cell,1998,10(2):155-169.

    [3]Raven J A,Allen J F. Genomics and chloroplast evolution:what did cyanobacteria do for plants?[J]. Genome Biology,2003,4(3):209-213.

    [4]Thornsberry J M,Goodman M M,Doebley J,et al. [WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ] polymorphisms associate with variation in flowering time[J]. Nature Genetics,2001,28(3):286-289.

    [5]黎欲,王天宇. 我國玉米育種種質(zhì)基礎(chǔ)與骨干親本的形成[J]. 玉米科學(xué),2010,18(5):1-8.

    [6]Peng J,Richards D E,Hartley N M,et al. ‘Green revolutiongenes encode mutant gibberellin response modulators[J]. Nature,1999,400(6741):256-261.

    [7]Camus-Kulandaivelu L,Veyrieras J B,Madur D,et al. Maize adaptation to temperate climate:relationship between population structure and polymorphism in the [WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ] gene[J]. Genetics,2006,172(4):2449-2463.

    [8]Andersen J R,Schrag T,Melchinger A E,et al. Validation of [WTBX][STBX]Dwarf8[WTBZ][STBZ] polymorphisms associated with flowering time in elite European inbred lines of maize (Zea mays L.)[J]. Theoretical and Applied Genetics,2005,111(2):206-217.

    [9]戴景瑞,鄂立柱. 我國玉米育種科技創(chuàng)新問題的幾點(diǎn)思考[J]. 玉米科學(xué),2010,18(1):1-5.[ZK)]

    [10]Fulton T M,Chunwongse J,Tanksley S D. Microprep protocol for extraction of DNA from tomato and other herbaceous plants[J]. Plant Molecular Biology Reporter,1995,13:207-209.

    [11]Nuwaysir E F,Huang W,Albert T J,et al. Gene expression analysis using oligonucleotide arrays produced by maskless photolithography[J]. Genome Research,2002,12(11):1749-1755.

    [12]Larkin M A,Blackshields G,Brown N P,et al. Clustal W and Clustal X version 2.0[J]. Bioinformatics,2007,23(21):2947-2948.

    [13]Rozas J. DNA sequence polymorphism analysis using DnaSP[J]. Bioinformatics for DNA Sequence Analysis,2009,537:337-350.

    [14]Librado P,Rozas J. DnaSP v5:a software for comprehensive analysis of DNA polymorphism data[J]. Bioinformatics,2009,25(11):1451-1452.

    [15]Tajima F. Statistical method for testing the neutral mutation hypothesis by DNA polymorphism[J]. Genetics,1989,123(3):585-595.

    [16]Fu Y X,Li W H. Statistical tests of neutrality of mutations[J]. Genetics,1993,133(3):693-709.

    [17]Hudson R R,Kaplan N L. Statistical properties of the number of recombination events in the history of a sample of DNA sequences[J]. Genetics,1985,111(1):147-164.

    [18]Ganal M W,Durstewitz G,Polley A,et al. A large maize (Zea mays L.) SNP genotyping array:development and germplasm genotyping,and genetic mapping to compare with the B73 reference genome[J]. PloS One,2011,6(12):e28334.

    [19]Bradbury P J,Zhang Z,Kroon D E,et al. TASSEL:software for association mapping of complex traits in diverse samples[J]. Bioinformatics,2007,23(19):2633-2635.

    [20]Xu S,Yang Z,Zhang E,et al. Nucleotide diversity of maize [WTBX][STBX]ZmBT1[WTBZ][STBZ] gene and association with starch physicochemical properties[J]. PloS One,2014,9(8):e103627.

    [21]Ching A D A,Caldwell K S,Jung M,et al. SNP frequency,haplotype structure and linkage disequilibrium in elite maize inbred lines[J]. BMC Genetics,2002,3:1-9.

    [22]黃忠陽,陳舜權(quán),胡俏強(qiáng),等. 種植密度對(duì)超甜玉晶甜18主要農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(12):106-107.

    [23]張麗妍,霍劍鋒,孟繁盛,等. 不同肥料、施肥水平及施用方法對(duì)玉米產(chǎn)量、性狀及效益的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(11):119-122.

    猜你喜歡
    關(guān)聯(lián)分析株高玉米
    玉米保護(hù)性耕作技術(shù)在遼陽地區(qū)的應(yīng)用效果研究
    收玉米啦!
    我的玉米送給你
    介紹四個(gè)優(yōu)良小麥品種
    玉米
    大灰狼(2018年6期)2018-07-23 16:52:44
    不同栽培密度對(duì)柴胡生長的影響
    玉米骨干親本及其衍生系中基因的序列變異及與株高等性狀的關(guān)聯(lián)分析
    基于隨機(jī)函數(shù)Petri網(wǎng)的系統(tǒng)動(dòng)力學(xué)關(guān)聯(lián)分析模型
    關(guān)聯(lián)分析技術(shù)在學(xué)生成績分析中的應(yīng)用
    基于關(guān)聯(lián)分析的學(xué)生活動(dòng)參與度與高校社團(tuán)管理實(shí)證研究
    科技視界(2016年15期)2016-06-30 12:43:00
    老司机福利观看| 成人欧美大片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久久香蕉激情| 国产视频一区二区在线看| 午夜老司机福利片| 国产三级在线视频| 久久青草综合色| 大陆偷拍与自拍| 久久精品91蜜桃| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| tocl精华| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 桃红色精品国产亚洲av| 免费看a级黄色片| 91大片在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲免费av在线视频| 波多野结衣一区麻豆| 桃红色精品国产亚洲av| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产97色在线日韩免费| 欧美在线一区亚洲| 久久亚洲精品不卡| 女性被躁到高潮视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 可以在线观看的亚洲视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲七黄色美女视频| 18禁国产床啪视频网站| 好男人电影高清在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 91大片在线观看| 日韩有码中文字幕| 日本免费a在线| 黄片小视频在线播放| 色哟哟哟哟哟哟| 久久久久久久久中文| 人人妻人人澡人人看| av视频在线观看入口| 国产视频一区二区在线看| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲欧美日韩无卡精品| 成人亚洲精品av一区二区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| aaaaa片日本免费| 涩涩av久久男人的天堂| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美黑人精品巨大| 中文字幕最新亚洲高清| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 两个人视频免费观看高清| 精品国内亚洲2022精品成人| 成在线人永久免费视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 两个人视频免费观看高清| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 两个人免费观看高清视频| 国产精品国产高清国产av| 日本在线视频免费播放| a在线观看视频网站| 久久久久久大精品| 在线观看一区二区三区| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产成人免费无遮挡视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 在线观看免费日韩欧美大片| 黑丝袜美女国产一区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产乱人伦免费视频| 亚洲在线自拍视频| 中文字幕色久视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 狠狠狠狠99中文字幕| 精品人妻在线不人妻| 欧美精品亚洲一区二区| 久久 成人 亚洲| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 中国美女看黄片| 啦啦啦 在线观看视频| 国产成人系列免费观看| 久久香蕉精品热| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产成人av激情在线播放| 午夜成年电影在线免费观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 制服丝袜大香蕉在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产成+人综合+亚洲专区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产高清视频在线播放一区| 少妇 在线观看| 热re99久久国产66热| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 午夜福利在线观看吧| 亚洲人成77777在线视频| 欧美午夜高清在线| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 69av精品久久久久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 黄色片一级片一级黄色片| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 久久久久精品国产欧美久久久| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 精品欧美国产一区二区三| 十八禁人妻一区二区| 久久中文字幕人妻熟女| 一二三四社区在线视频社区8| 好男人电影高清在线观看| 一本大道久久a久久精品| 91大片在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 长腿黑丝高跟| 日韩成人在线观看一区二区三区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 成人18禁在线播放| 国产成人av教育| 在线观看午夜福利视频| 午夜亚洲福利在线播放| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 老司机深夜福利视频在线观看| 成人18禁在线播放| 久久这里只有精品19| 国产欧美日韩综合在线一区二区| www.www免费av| 久久中文字幕一级| 成人免费观看视频高清| 天天添夜夜摸| 99国产精品一区二区蜜桃av| 99国产综合亚洲精品| 成人免费观看视频高清| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美日本亚洲视频在线播放| 午夜视频精品福利| 男人舔女人的私密视频| 亚洲 国产 在线| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 搡老熟女国产l中国老女人| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 乱人伦中国视频| 午夜福利,免费看| 国产成人精品在线电影| 老汉色av国产亚洲站长工具| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲中文av在线| 99在线人妻在线中文字幕| 日韩欧美三级三区| 一进一出好大好爽视频| 国产又色又爽无遮挡免费看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 757午夜福利合集在线观看| 国产精品野战在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 十分钟在线观看高清视频www| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲黑人精品在线| 大陆偷拍与自拍| 国产av精品麻豆| 黄色视频,在线免费观看| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲av成人av| 在线永久观看黄色视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美中文日本在线观看视频| 国产成人av教育| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 久久精品国产亚洲av高清一级| 淫秽高清视频在线观看| 91精品三级在线观看| 91字幕亚洲| 男人舔女人的私密视频| 午夜视频精品福利| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美亚洲日本最大视频资源| 少妇熟女aⅴ在线视频| 成人18禁在线播放| 午夜久久久在线观看| 一区在线观看完整版| 国产亚洲av嫩草精品影院| 好男人在线观看高清免费视频 | 免费av毛片视频| av在线播放免费不卡| 国产xxxxx性猛交| 美女午夜性视频免费| 成人三级黄色视频| 无遮挡黄片免费观看| 国产成人系列免费观看| 久久狼人影院| 久久亚洲精品不卡| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 精品乱码久久久久久99久播| 久久精品影院6| 久久久国产精品麻豆| 男女之事视频高清在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 日本 欧美在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| e午夜精品久久久久久久| 精品久久蜜臀av无| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 最新在线观看一区二区三区| 一级片免费观看大全| 国产亚洲欧美在线一区二区| 波多野结衣av一区二区av| 精品福利观看| 丁香六月欧美| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 成年版毛片免费区| 国产精品国产高清国产av| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 精品免费久久久久久久清纯| www.999成人在线观看| 精品久久久久久,| 又紧又爽又黄一区二区| 国产99久久九九免费精品| 性欧美人与动物交配| 丝袜在线中文字幕| 久久久久久人人人人人| 欧美av亚洲av综合av国产av| 一区福利在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲成人国产一区在线观看| 脱女人内裤的视频| 男女下面进入的视频免费午夜 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 中文字幕av电影在线播放| 精品久久久久久久久久免费视频| 一级毛片高清免费大全| 99国产精品一区二区三区| 一区二区三区激情视频| 免费看a级黄色片| 国产精品久久久人人做人人爽| 18禁国产床啪视频网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 免费看美女性在线毛片视频| 色播亚洲综合网| 久久性视频一级片| 很黄的视频免费| 桃色一区二区三区在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 人人澡人人妻人| 国产伦一二天堂av在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 男人舔女人的私密视频| 亚洲国产精品999在线| 在线观看一区二区三区| 亚洲第一青青草原| 免费看美女性在线毛片视频| 高清毛片免费观看视频网站| av片东京热男人的天堂| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久欧美精品欧美久久欧美| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产精品久久视频播放| 操出白浆在线播放| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 人人澡人人妻人| www日本在线高清视频| 国产成人欧美| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲人成77777在线视频| 日韩高清综合在线| 男人操女人黄网站| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 色尼玛亚洲综合影院| 丁香六月欧美| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久亚洲精品不卡| 亚洲av电影在线进入| 在线观看午夜福利视频| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产激情欧美一区二区| 欧美乱色亚洲激情| 久久婷婷成人综合色麻豆| 99re在线观看精品视频| 国产精品日韩av在线免费观看 | 欧美一级a爱片免费观看看 | 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 给我免费播放毛片高清在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 成人精品一区二区免费| 激情视频va一区二区三区| avwww免费| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产国语露脸激情在线看| av天堂久久9| 一级毛片女人18水好多| 一级黄色大片毛片| 丁香欧美五月| 久久久久久大精品| 一本久久中文字幕| 精品午夜福利视频在线观看一区| 丁香六月欧美| 日本黄色视频三级网站网址| 波多野结衣av一区二区av| 久久香蕉国产精品| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲免费av在线视频| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 亚洲九九香蕉| av福利片在线| 午夜免费鲁丝| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 村上凉子中文字幕在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美在线一区亚洲| av片东京热男人的天堂| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 黄色成人免费大全| 久热这里只有精品99| 男女之事视频高清在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 久久热在线av| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久亚洲精品不卡| 搡老妇女老女人老熟妇| 狂野欧美激情性xxxx| 精品高清国产在线一区| 色哟哟哟哟哟哟| 国产av一区二区精品久久| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产国语露脸激情在线看| 9色porny在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 无遮挡黄片免费观看| 视频区欧美日本亚洲| 男人操女人黄网站| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美乱码精品一区二区三区| av免费在线观看网站| 757午夜福利合集在线观看| 曰老女人黄片| 亚洲专区国产一区二区| 999久久久精品免费观看国产| 午夜激情av网站| 日韩大码丰满熟妇| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 丰满的人妻完整版| 亚洲久久久国产精品| 啦啦啦 在线观看视频| 日韩视频一区二区在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 精品国内亚洲2022精品成人| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久久久久久精品吃奶| 69精品国产乱码久久久| 成人三级做爰电影| 黑人操中国人逼视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 日韩欧美免费精品| 国产极品粉嫩免费观看在线| av天堂久久9| 欧美日韩精品网址| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美黑人欧美精品刺激| 大陆偷拍与自拍| 欧美乱妇无乱码| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久精品91蜜桃| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久久久久国产a免费观看| 大型av网站在线播放| 久久这里只有精品19| 一本综合久久免费| 啦啦啦免费观看视频1| 久久久久久久精品吃奶| 国产精品一区二区在线不卡| 黄网站色视频无遮挡免费观看| videosex国产| 首页视频小说图片口味搜索| 日韩国内少妇激情av| 亚洲国产看品久久| 亚洲精华国产精华精| 国产人伦9x9x在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 黄片小视频在线播放| 久久这里只有精品19| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 18美女黄网站色大片免费观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 一区二区三区高清视频在线| 免费高清在线观看日韩| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 在线播放国产精品三级| www.精华液| netflix在线观看网站| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 嫁个100分男人电影在线观看| 久久久国产成人免费| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 黄片播放在线免费| 国产免费男女视频| 麻豆成人av在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 午夜a级毛片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 欧美黑人精品巨大| 色精品久久人妻99蜜桃| 黑人欧美特级aaaaaa片| 91字幕亚洲| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲情色 制服丝袜| 中文亚洲av片在线观看爽| 天堂√8在线中文| 两人在一起打扑克的视频| 国语自产精品视频在线第100页| 宅男免费午夜| 麻豆国产av国片精品| 国产99久久九九免费精品| 久久人人精品亚洲av| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产av一区在线观看免费| 日韩国内少妇激情av| 日本欧美视频一区| 电影成人av| 中文字幕av电影在线播放| 精品久久久久久,| 日日干狠狠操夜夜爽| 制服人妻中文乱码| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产成人啪精品午夜网站| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲性夜色夜夜综合| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲激情在线av| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产免费男女视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 丝袜人妻中文字幕| 丁香六月欧美| 欧美在线黄色| 在线观看免费日韩欧美大片| 91精品国产国语对白视频| 亚洲少妇的诱惑av| 久久亚洲真实| 91精品国产国语对白视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 精品欧美国产一区二区三| 国产免费男女视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久久久久久午夜电影| 亚洲国产中文字幕在线视频| 少妇粗大呻吟视频| 国产成人精品无人区| 看免费av毛片| 一区福利在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产99白浆流出| 日本a在线网址| 亚洲色图综合在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 69精品国产乱码久久久| 超碰成人久久| 国产精品九九99| 中文字幕最新亚洲高清| 国产男靠女视频免费网站| 丝袜人妻中文字幕| 无限看片的www在线观看| 国产一区二区激情短视频| 十分钟在线观看高清视频www| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲无线在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲一区二区三区色噜噜| 99国产精品一区二区蜜桃av| 黑人操中国人逼视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 无人区码免费观看不卡| 热re99久久国产66热| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 色精品久久人妻99蜜桃| tocl精华| av天堂久久9| 欧美成人午夜精品| 一进一出好大好爽视频| 亚洲五月天丁香| 91老司机精品| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 欧美日韩乱码在线| 老司机午夜福利在线观看视频| 黄色成人免费大全| 亚洲成人国产一区在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 香蕉久久夜色| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产高清videossex| 亚洲成人久久性| 国产成人影院久久av| 亚洲一区中文字幕在线| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲国产欧美网| 久久香蕉国产精品| 一级毛片女人18水好多| 18禁国产床啪视频网站| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲第一av免费看| 十分钟在线观看高清视频www| 97碰自拍视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 一区二区三区激情视频| 亚洲精华国产精华精| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产片内射在线| 国产在线观看jvid| x7x7x7水蜜桃| 韩国精品一区二区三区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 91精品三级在线观看| 国产高清videossex| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 9191精品国产免费久久| 最好的美女福利视频网| 午夜老司机福利片| 妹子高潮喷水视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 日本在线视频免费播放| www.自偷自拍.com| 成年人黄色毛片网站| 999久久久精品免费观看国产| 老鸭窝网址在线观看| 9热在线视频观看99| 两个人视频免费观看高清| 又黄又粗又硬又大视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 精品高清国产在线一区| 亚洲无线在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产一区二区在线av高清观看| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久久久久久久免费视频了| 午夜福利,免费看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产高清有码在线观看视频 | 午夜福利18| 首页视频小说图片口味搜索| 无遮挡黄片免费观看| 婷婷丁香在线五月| 午夜福利欧美成人| 日本三级黄在线观看| 午夜免费观看网址| 最新美女视频免费是黄的| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲国产欧美网| 免费观看人在逋| 欧美不卡视频在线免费观看 | 国产精品乱码一区二三区的特点 | 久久精品国产综合久久久| 国产三级黄色录像| 久久久久久久久免费视频了| 长腿黑丝高跟| 日日爽夜夜爽网站|