護胃散對急進高原大鼠胃黏膜血管內(nèi)皮生長因子、堿性成纖維生長因子水平的影響及其機制探討*

鄒小云，李軍茹，賈守寧，楊翠蘭，曹生海，馬春花

1.青海大學研究生院(西寧 810000)，2.青海省中醫(yī)院(西寧 810000)

·實驗研究·

護胃散對急進高原大鼠胃黏膜血管內(nèi)皮生長因子、堿性成纖維生長因子水平的影響及其機制探討*

鄒小云1，2，李軍茹2△，賈守寧2，楊翠蘭2，曹生海2，馬春花2

1.青海大學研究生院(西寧 810000)，2.青海省中醫(yī)院(西寧 810000)

目的：探討護胃散對急進高原大鼠胃黏膜血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維生長因子(bFGF)的水平影響及作用機制。方法：選用Wistar大鼠，隨機分為北京組、急進高原組(西寧組、瑪多組)，其中，瑪多組設空白對照組、陽性藥組、護胃散組。北京組、西寧組、瑪多空白對照組給予生理鹽水，陽性藥組給予荊花胃康膠丸及護胃散組(高、中、低劑量)，各組分別于第1天、2天、3天、5天、7天取大鼠胃黏膜，并用ELISA法測定VEGF、bFGF水平。結果：研究表明，隨著海拔的升高、時間的延長，大鼠胃黏膜中VEGF、bFGF的水平不斷增加；與北京組比較，護胃散能有效提高急進高原大鼠胃黏膜VEGF、bFGF的水平(P<0.05或P<0.01)。結論：護胃散能有效提高急進高原大鼠胃黏膜VEGF、bFGF的含量，在急性胃黏膜損傷修復方面發(fā)揮著重要作用。

高原環(huán)境具有低氧、低大氣壓、干燥、寒冷、強紫外線輻射等特點[1]，其獨特的氣候與多種急慢性高原病的發(fā)病有關。中醫(yī)學認為高原地區(qū)清氣不足、宗氣匱乏，難以助肺以司呼吸、調(diào)血運，加上高原環(huán)境干燥、寒冷的氣候特點，從而易導致機體營血出現(xiàn)“濃、稠、粘、聚”等病理生理特征[2]。研究表明，應激狀態(tài)下可致機體出現(xiàn)急性胃黏膜病變[3]，而VEGF、bFGF在此損傷、修復過程中起著重要作用。本研究根據(jù)多年臨床用藥經(jīng)驗并結合中醫(yī)辨證論治理論，組成中藏藥組方護胃散，探討其對急進高原大鼠胃黏膜VEGF、bFGF水平變化的影響及作用機制。

材料與方法

1 實驗動物 Wistar大鼠，雌雄各半，體重(200±10g)，由北京金牧陽實驗動物養(yǎng)殖有限責任公司供給，于實驗當日購進動物。

2 實驗用藥 護胃散方藥：大花紅景天等(方中藥物組成、相關制備工藝正申請有關專利，尚不宜公開)。規(guī)格：制成1g/mL，由青海省中醫(yī)院制劑室制備。陽性對照藥：荊花胃康膠丸(國藥準字號：Z10970067)。

3 實驗試劑 VEGF及bFGF檢測試劑盒，由上海源葉生物科技有限公司、南京建成生物工程研究所提供。

4 分組及給藥 將350只大鼠隨機分組，雌雄各半，分為北京組、急進高原組(西寧組(海拔2260 m)、瑪多組(海拔4270 m))。其中，北京組、西寧組各50只；瑪多組250只，并設空白對照組、陽性藥組(2.4 g/kg)、護胃散(2.6 g/kg、5.2 g/kg、10.4 g/kg)組，每組50只；北京組、西寧組及瑪多空白對照組予生理鹽水；以上各組均以灌胃的方式給藥，體積均為2 ml。將北京組大鼠運至中國中醫(yī)科學院動物實驗室，急進高原組中西寧組送至青海省中醫(yī)藥研究院動物實驗室，同時將瑪多組大鼠乘汽車轉(zhuǎn)運至青海省果洛州瑪多縣。各組均于實驗當天開始給藥，1次/d，共7 d。

5 取 材 分別于灌藥后第1 d、2 d、3 d、5 d、7 d取材，北京組、西寧組、瑪多各用藥組和空白對照組每天均殺10只，雌雄各半，剪取胃黏膜組織(組織標本送于蘭州大學醫(yī)學院進行本研究的指標檢測)。

6 觀察和測定指標 ①大體表征觀察 ：觀察7 d內(nèi)北京組、西寧組及瑪多組大鼠的活動情況，毛色、舌質(zhì)變化以及攝食攝水量、糞質(zhì)的變化等。② VEGF、bFGF含量的測定：北京組、西寧組、瑪多組分別于第1 d、2 d、3 d、5 d、7 d取大鼠胃黏膜組織，用ELISA法測定VEGF、bFGF的含量。

結 果

1 大體表征觀察 北京組：大鼠整體情況活躍，被毛色澤光亮，飲食及攝水量正常，糞便成形、質(zhì)軟，舌質(zhì)淡紅；西寧組大鼠以上表征變化不甚明顯；與北京組比較，瑪多組大鼠的活動量減少，被毛蓬松、色澤枯燥黯淡，攝食及攝水量均減少，糞便稀溏或不成形，舌質(zhì)暗紅或紫暗，但用藥組，尤其是護胃散中、高劑量組以上幾種情況均得到了明顯改善。

2 護胃散對大鼠胃黏膜VEGF、bFGF含量的影響 見表1、表2。由表1、表2知，急進高原組胃黏膜VEGF、bFGF的含量總體高于北京組(P<0.05或P<0.01)；急進高原組中，瑪多組總體高于西寧組(P<0.05)；隨著海拔的升高，時間的延長，VEGF、bFGF總體含量越高，尤其是在急進損傷第3天開始，二者升高比例較大；同時，瑪多各用藥組總體高于空白對照組(P<0.05或P<0.01)。

表1 護胃散對各組大鼠胃黏膜VEGF含量的影響 (pg/ml)

注：西寧組、瑪多空白對照組與北京組比較，△P<0.05，▲P<0.01；西寧組與瑪多空白對照組比較，◇P<0.05；瑪多各給藥組與空白對照組比較，□P<0.05

表2 護胃散對各組大鼠胃黏膜bFGF含量的影響(pg/ml)

注：西寧組、瑪多空白對照組與北京組比較，△P<0.05，▲P<0.01；西寧組與瑪多空白對照組比較，◇P<0.05；瑪多各給藥組與空白對照組比較，□P<0.05，■P<0.01

討 論

當機體受到缺氧、寒冷等應激原刺激后，可致胃黏膜局部交感神經(jīng)、迷走神經(jīng)興奮性升高，造成神經(jīng)遞質(zhì)及炎癥細胞因子等的釋放，血管收縮引起胃黏膜缺血、缺氧。研究發(fā)現(xiàn)，低氧、酸中毒均能致急性胃黏膜損傷，最終導致黏膜屏障及黏膜微循環(huán)損傷而引起應激性胃黏膜損傷[4]，VEGF、bFGF在此損傷及修復過程中發(fā)揮著重要作用。

VEGF可促進內(nèi)皮細胞增殖，bFGF可促進細胞活化分裂[5]。急進高原引起的應激性胃黏膜損傷屬于中醫(yī)“胃痞”、“胃脘痛”范疇，本研究團隊從事中醫(yī)藥防治急慢性高原病多年，認識到高原急性胃黏膜病變的發(fā)生與高原低氧明確相關，其病機為大氣不足，宗氣虛弱，飲食不節(jié)，脾胃虛弱，氣虛血瘀，絡脈失養(yǎng)等，故自擬護胃健脾，益氣活血，化瘀通絡[6]之中藏藥復方護胃散。紅景天性平，味甘、苦澀，歸肺、心經(jīng)，功效益氣活血、清肺、散瘀消腫?，F(xiàn)代藥理學研究表明，其具有抗缺氧、抗疲勞等作用。本研究通過大鼠急進高原并在護胃散的作用下，測定各組大鼠胃黏膜中VEGF、bFGF的含量。本研究示，隨海拔的升高、時間的延長，急進高原組(西寧組、瑪多組)大鼠胃黏膜VEGF、bFGF含量亦升高；由表1、表2示，護胃散能有效提高急進高原大鼠胃黏膜VEGF、bFGF含量，但瑪多組與西寧及北京組比較：隨海拔的升高及用藥劑量的變化，部分VEGF、bFGF含量于實驗第1～3 d并未上升，反而降低，卻于第3天開始呈較明顯的升高，此現(xiàn)象可能與兩者表達受環(huán)境因素影響、大鼠個體適應性及藥物作用時間等有關。

綜上可知，護胃散在胃黏膜損傷修復方面發(fā)揮著重要作用，是一種值得推廣使用的有效藥物。同時，隨著社會對高原醫(yī)學事業(yè)的不斷深入和拓展，通過此研究，針對將來傳統(tǒng)中醫(yī)藥在胃黏膜保護、修復方面的調(diào)控作用及臨床實踐應用方面進行不同層次的探索、研究，有望開辟出廣闊的前景。

[1] 張娟玲,李向陽.高原低氧影響藥物代謝的研究進展[J].藥學學報,2015,50(9):1073-1079.

[2] 李軍茹,陳衛(wèi)國,賈守寧,等.藏藥復方對高原氣虛血瘀證動物微循環(huán)影響的研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2015,26(1):56-58.

[3] 劉 壽,格日力.應激性胃黏膜病變相關因子的研究進展[J].國際消化病雜志, 2010,30(1):14-17.

[4] 熊元治.重視慢性高原病胃黏膜病變的臨床研究[J].中國消化內(nèi)鏡,2008,2 (12):20-22.

[5] 薛曉輝.VEGF和bFGF在增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變患者玻璃體中的表達及意義[J].陜西醫(yī)學雜志,2016,45(6):707-709.

[6] 寇 媛,楊 波.補脾通絡方治療慢性萎縮性胃炎脾虛血瘀證的臨床研究[J].陜西中醫(yī),2015,36(1):19-21.

(收稿：2016-10-09)

The experimental study of Huweipowder onvascular endothelial growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) level changes in gastric mucosa of rats in acute plateau

Zou Xiaoyun，Li Junru，Jia Shouning， et al.

Graduate College of Qinghai University(Xining 810000)

Objective:To study the effect of Huwei powder on the levels of VEGF and bFGF ingastric mucosa of radical plateau rats and its mechanism.Methods:Choose Wistar rats,randomly divided intoBeijing group,radical plateau groups(Xining group,Maduo group),of which,Maduo group sets up blank control group,positive control group,Huwei powdergroups.Beijing group,Xining group,blank control group of Maduo give the physiological saline,positive control group gives Jinghua Weikang capsules and Huwei powder groups(high,medium and lowdoses),and each group respectively obtains rats’ gastric mucosain1 d,2 d,3 d,5 d,7 d,and the levels of VEGF and bFGF were detected by ELISA method.Results:The study shows that with the increase of altitude and the extension of time,the rats’ gastric mucosa levels of VEGF and bFGF increased.Compared with Beijing group,Huwei powder could effectively increase the levels of VEGF and bFGF ingastric mucosa of acute rats(P<0.05 orP<0.01).Conclusion: Huwei powder can effectively improve the levels of VEGF and bFGF ingastric mucosa of radical plateaurats,and plays an important role in repair of acute gastric mucosal injury.

@Radical plateau @Huwei powder Rats Gastric mucosa VEGF bFGF

*青海省科學技術廳應用基礎研究項目(2014-ZJ-918)

@急進高原 @ 護胃散 大鼠 胃黏膜 VEGF bFGF

R573

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.02.057

△通訊作者