不同產(chǎn)地松香藥材中松香酸的含量測定*

王曉萍，崔小敏，李富賢，石會麗△，劉軍鋒

1.陜西省中醫(yī)醫(yī)院 ( 西安 710003), 2. 陜西省中醫(yī)藥研究院 (西安 710003)

·方藥縱橫·

不同產(chǎn)地松香藥材中松香酸的含量測定*

王曉萍1，崔小敏2，李富賢2，石會麗2△，劉軍鋒1

1.陜西省中醫(yī)醫(yī)院 ( 西安 710003), 2. 陜西省中醫(yī)藥研究院 (西安 710003)

目的：建立高效液相色譜法(HPLC)測定不同產(chǎn)地松香藥材中的松香酸含量，為松香藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法：采用高效液相色譜法(HPLC)，色譜柱為Akasil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-乙腈-0.5%冰乙酸溶液(72∶15∶13)；檢測波長為241 nm；流速為1.0 ml/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量為10 μl。結(jié)果：建立了松香中松香酸的提取方法和HPLC含量測定方法。10批松香中松香酸含量范圍1.12%～81.35%。結(jié)論：市售不同產(chǎn)地松香藥材中松香酸量差異較大，提示藥材質(zhì)量參差不齊，亟需質(zhì)量規(guī)范和控制。本研究建立的方法結(jié)果準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好，簡便易行，可用于松香藥材的質(zhì)量控制。

松香，別名松脂、松膏、松膠，為松科植物馬尾松Pinusmassonianalamb.或同屬數(shù)種植物的樹脂除去揮發(fā)油后，所留存的固體樹脂，其味苦、甘，性溫，入肝、脾經(jīng)，能祛風(fēng)燥濕、排膿拔毒、生肌止痛[1]?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》載“主癰疽惡瘡，頭瘍白禿，疥瘙風(fēng)氣，安五臟，除熱”且被列為上品，李時珍謂其強(qiáng)筋骨，利耳目，治崩帶，臨床多用于銀屑病、慢性骨髓炎、皮膚瘡瘍、小兒濕疹等癥[2-4]。自從上世紀(jì)八十年代，本院就開始使用松香治療銀屑病，以松香為主要藥味的銀屑平、愈銀片等院內(nèi)制劑在治療銀屑病的過程中更是表現(xiàn)出卓著的臨床效果[1]。然而對于藥用松香的質(zhì)量目前還沒有統(tǒng)一的控制方法。本文擬建立松香中主要化學(xué)成分松香酸[5]的高效液相色譜方法，并對來自不同產(chǎn)地的十批松香藥材進(jìn)行含量測定，從而為松香藥材的質(zhì)量控制和相關(guān)制劑的生產(chǎn)選材提供方法和科學(xué)依據(jù)。

儀器與試藥

1 儀 器 島津LC-2010A型高效液相色譜儀，UV-VIS紫外-可見檢測器，LC-Solution化學(xué)工作站，超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司，型號：KQ-100型)、電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司，型號：BT25S, d=0.01 mg ；BS210S,d=0.1 mg)。

2 試 藥 松香藥材購自于各地藥材市場，經(jīng)陜西省中醫(yī)藥研究院石會麗研究員鑒定為松科植物馬尾松Pinus massoniana lamb.或同屬植物的干燥樹脂，松香酸對照品(實(shí)驗(yàn)室自制，純度為98.4%)，使用前置干燥器中干燥至恒重。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

方法與結(jié)果

1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱：Akasil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-乙腈-0.5%冰乙酸溶液(72∶15∶13)；檢測波長：241 nm；流速：1.0 ml/min。理論塔板數(shù)按松香酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2 對照品溶液的制備 精密稱取松香酸對照品15.37 mg，置25 ml量瓶中，用無水乙醇稀釋制成含松香酸 0.6050 mg/ml的對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液1 ml，置于10 ml量瓶中，用無水乙醇稀釋制成含綠原酸 0.0605 mg/ml的對照品溶液，即得。

3 供試品溶液的制備 取松香藥材粉末約20 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加無水乙醇振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，按“色譜條件”項(xiàng)下的測定方法進(jìn)行測定。其HPLC圖見圖1。

A.對照品色譜圖；B. 供試品色譜圖；1.松香酸

5 方法學(xué)考察 線性關(guān)系考察: 取0.0605 mg/ml對照品溶液，分別精密吸取2 μl、4 μl、8 μl、16 μl、32 μl、40 μl，注入液相色譜儀，在“1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖，測定峰面積，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=2 567 783.4×- 662.2(r =1.0)。結(jié)果表明，松香酸在0.121～2.42 μg范圍內(nèi)，峰面積值與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn): 精密吸取對照品溶液10 μl，在色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算松香酸峰面積的RSD為0.28%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn): 精密稱取松香藥材 (編號10)適量，按“3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，在“1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣分析，以外標(biāo)法計(jì)算松香酸的平均含量為0.5230 g/g，RSD為0.80%(n=6)。結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn): 取同一供試品溶液，室溫放置，在“1”項(xiàng)色譜條件下分別在0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣分析，計(jì)算峰面積的RSD為0.75%。表明供試品溶液室溫放置24h穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn): 精密稱取已知含量(0.5230 g/g)的松香藥材粉末(編號10)共六份，每份約10 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，按樣品中松香酸含量的100%，分別加入0.6459 mg/ml的松香酸對照品溶液8 ml，按“3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，在“1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 松香酸回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

6 含量測定 取從市場購買的10批松香藥材，按前述方法制備供試品溶液，在“1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣分析，按外標(biāo)法計(jì)算松香藥材中松香酸的百分含量(%)，結(jié)果見表2。

表2 不同產(chǎn)地松香藥材中松香酸含量測定結(jié)果

討 論

松香酸易溶于乙醇和甲醇，不溶于水。本試驗(yàn)中考察了甲醇和乙醇作為提取溶劑對于松香酸提取效果的影響，結(jié)果表明，二者無顯著性差異，因此選擇安全低毒的乙醇作為提取溶劑。

已有的松香酸含量測定文獻(xiàn)報(bào)道中，松香酸的色譜峰存在拖尾等不理想的情況[6]。本實(shí)驗(yàn)分別考察了甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸、甲醇-3%冰醋酸、甲醇-乙腈-0.1%磷酸以及甲醇-乙腈-0.5%冰醋酸等溶劑系統(tǒng)[7-8]，發(fā)現(xiàn)三元溶劑系統(tǒng)下松香酸的分離效果最佳，峰形最好，因此最終選擇流動相為甲醇-乙腈-0.5%冰醋酸。

松香主要產(chǎn)于廣東、廣西、福建、湖南、安徽等地。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地不同來源的松香酸含量差異較大，最低含量1.12%，最高含量達(dá)81.35%。所測定的十批松香藥材中，松香酸含量以廣西、廣東相對最高，安徽、福建次之。含量最小的7號松香藥材購自于西安萬壽路藥材市場，產(chǎn)地不明，但其藥材外觀有一個顯著特點(diǎn)，就是色澤較暗，透光性差，且呈棕褐色。仔細(xì)將藥材色澤與含量測定結(jié)果進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)松香酸含量越高的松香藥材，其顏色越淺，透光性越好，呈透明狀乳白或淺黃色，推測這種外觀與內(nèi)在含量上的差異可能來源于產(chǎn)地，更可能和藥材的炮制處理工藝密切相關(guān)，因?yàn)閳?bào)道有稱“松香治病，古今醫(yī)家皆云必須修治，其白如玉，方可入藥[1]?！币虼?，本研究所建立的松香酸含量測定方法可為松香藥材質(zhì)量的優(yōu)劣提供科學(xué)方法和試驗(yàn)依據(jù)。

[1] 畢躍峰，鄭曉坷，馮衛(wèi)生，等. 松香的化學(xué)研究與臨床應(yīng)用[J].河南中醫(yī)藥學(xué)刊，2001,16(2)：21-22.

[2] 韓世榮，李景霞. 松香臨床應(yīng)用與研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥研究，1988，5：28-29.

[3] 吾 坎，阿尼古麗. 松香臨床應(yīng)用[J].新疆中醫(yī)藥，2003，21(6)：37-39.

[4] 周燦榮，孫均遂. 松香的臨床應(yīng)用舉隅[J].浙江中醫(yī)雜志， 1995，30(5)：230-230.

[5] 宋湛謙，陳振隆，J. P.佩里. 氣相色譜法分析松脂[J].林業(yè)化學(xué)與工業(yè)，1988，8(2)：10-12.

[6] 劉偉華. 松香藥材中松香酸的含量測定方法[J]. 醫(yī)藥論壇雜志，2011，32(24)：46-50.

[7] 李富賢，米彩峰，石會麗. RP-HPLC測定清毒素膠囊中松香酸的含量[J].中國中藥雜志，2008，33(9)：1086-1087.

[8] 王英鋒，魏小燕. HPLC測定楓香脂堿提物中脫氫松香酸和松香酸的含量[J].中國中藥雜志，2013，38(1)：57-59.

(收稿：2016-10-19)

Determination of abietic acid in rosin from different habitats

Wang Xiaoping, Cui Xiaomin, Li Fuxian, et al.

Shaanxi Province Traditional Chinese Medicine Hospital (Xi'an 710003)

Objective: To establish a HPLC method to determine the content of abietic acid in rosin from different habitats. Methods: The HPLC method was applied. The determination was performed on Akasil-C18 (250mm×4.6mm，5μm) column with mobile phase consisted of methanol-acetonitrile-0.5% Glacial acetic acid(72∶15∶13) at 1.0ml/min. The detection wavelength was set at 241nm, the column temperature was 30℃, and the injection volume was 10μl. Results: The HPLC method to determine the abietic acid content of rosin was established. The ranges of abietic acid content among different samples was 1.12%～81.35%. Conclusion: The abietic acid content of the marketed rosin from different habitats differed obviously, which suggested the quality of commercial rosin is not coincident and needs to be controlled urgently. The established methods are accurate, stable and simple with good feasibility, which suitable for the quality control of rosin.

Colophonium/ Analytical chemistry Place of production (TCD) Chromatography, high pressure liquid

*國家中醫(yī)藥管理局中藥特色技術(shù)傳承人才項(xiàng)目 陜西省科技廳社發(fā)攻關(guān)項(xiàng)目(2016SF-358)

松香/中藥分析化學(xué) 中藥產(chǎn)地 色譜法, 高壓液相

R927.2

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.02.056

△通訊作者