人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基在白血病患兒口腔黏膜炎中的療效觀察

門倩倩 曹秀艷 盧偉 吳南海

(解放軍海軍總醫(yī)院，北京 100048)

人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基在白血病患兒口腔黏膜炎中的療效觀察

門倩倩 曹秀艷 盧偉 吳南海

(解放軍海軍總醫(yī)院，北京 100048)

目的 探討人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基在白血病患兒口腔黏膜炎中的臨床療效。方法 2015年1-12月收治的白血病患兒312例，共發(fā)生口腔黏膜炎124例，隨機(jī)分為兩組，每組62例。對(duì)照組采用生理鹽水漱口后，在潰瘍面涂抹外用重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子凝膠(金扶寧rhGM-CSF)；觀察組采用生理鹽水漱口后，在潰瘍面涂抹人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基(hUCB-MSC-CM)。觀察兩組患兒口腔創(chuàng)面愈合時(shí)間及愈合率。結(jié)果 觀察組口腔創(chuàng)面愈合時(shí)間5～14 d，愈合率91.9%；對(duì)照組口腔創(chuàng)面愈合時(shí)間5～14 d，愈合率67.7%，觀察組明顯優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。 結(jié)論 人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基在白血病患兒口腔黏膜炎中療效顯著。

人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基; 白血病患兒; 口腔黏膜炎; 護(hù)理

Human umbilical cord blood mesenchymal stem cell conditioned medium; Leukemia in children; Oral mucositis; Nursing

白血病是造血干細(xì)胞出現(xiàn)惡性克隆性疾病，骨髓中出現(xiàn)大量的原始細(xì)胞和幼稚細(xì)胞，機(jī)體正常的造血功能受到抑制。化學(xué)藥物治療是惡性腫瘤的重要治療手段[1]，而口腔黏膜炎(Oral mucositis,OM)是白血病患兒化療中的常見并發(fā)癥之一。隨著化療方案的不斷發(fā)展，大劑量化療藥物及聯(lián)合用藥的應(yīng)用，化療患兒并發(fā)口腔炎的發(fā)生率達(dá)66%，更高可達(dá)88%[2-3]。為了使患兒在化療過(guò)程中，免受口腔黏膜炎所帶來(lái)的痛苦，我們選用人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基(hUCB-MSC-CM)預(yù)防和治療白血病患兒口腔黏膜炎，療效顯著?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年1-12月我科使用大劑量化療后發(fā)生口腔黏膜炎的白血病患兒124例，男74例，女50例，年齡6個(gè)月至13歲，中位年齡4.75歲。將患兒隨機(jī)分為對(duì)照組和觀察組，每組62例。對(duì)照組患兒在口腔潰瘍面涂抹外用重組人粒細(xì)胞刺激因子凝膠(rhGM-CSF),觀察組患兒涂抹人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)其(hUCB-MSC-CM)。其中，急性淋巴細(xì)胞白血病53例，急性非淋巴細(xì)胞白血病71例，兩組患兒均處于粒缺期，中性粒細(xì)胞絕對(duì)值0～0.5×109/L，根據(jù)口腔黏膜受損情況，將口腔黏膜炎分0～Ⅳ級(jí)[4]。見表1。兩組患兒性別、年齡及口腔黏膜炎程度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05) ，具有可比性。

表1 124例患兒口腔黏膜炎分級(jí)

1.2 方法

1.2.1 hUCB-MSC-CM獲取 人臍帶血(Human umbilical cord blood,hUCB)間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCS)條件培養(yǎng)基(Conditioned medium,CM)的制備方法：在無(wú)菌條件下收集足月健康新生兒的臍帶血，經(jīng)肝素抗凝、離心后分離、培養(yǎng)、傳代hUCB-MSCS、用倒置顯微鏡觀察不同時(shí)期細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和形態(tài)特征，并用酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)細(xì)胞增殖情況，待細(xì)胞融合達(dá)80%時(shí)更換培養(yǎng)基，在繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收集培養(yǎng)上清液即為人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基(hUCB-MSC-CM)。hUCB-MSC-CM由我們兒科實(shí)驗(yàn)室自行研制，臍帶血從廢棄的臍帶中獲得，并經(jīng)產(chǎn)婦同意，簽署同意書。實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，不涉及倫理問題。

1.2.2 對(duì)照組 每日生理鹽水漱口，不能漱口患兒或較小患兒給予無(wú)菌棉球口腔護(hù)理后，在潰瘍面涂抹外用重組人粒細(xì)胞刺激因子凝膠(rhGM-CSF100 μg/cm2),3次/d。

1.2.3 觀察組 每日生理鹽水漱口，不能漱口患兒或較小患兒給予無(wú)菌棉球口腔護(hù)理后，用無(wú)菌棉球或無(wú)菌棉簽沾取hUCB-MSC-CM，覆蓋潰瘍面,3次/d，方法同對(duì)照組。對(duì)于有融合性潰瘍，能含漱的患兒，采用hUCB-MSC-CM，3～5 mL含漱3～5 min以上的時(shí)間，3次/d。告知患兒不要咽下，30 min內(nèi)不要進(jìn)食，2周為一個(gè)療程。

1.3 評(píng)價(jià)方法 觀察口腔黏膜愈合時(shí)間；2周后觀察口腔黏膜的情況：有效：潰瘍完全愈合或潰瘍面積較前減小，有新鮮肉芽組織增生。無(wú)效：破潰無(wú)明顯變化。

2 結(jié)果

兩組患兒口腔黏膜創(chuàng)面愈合情況比較 見表2和表3。

表2 兩組患兒口腔黏膜創(chuàng)面愈合時(shí)間對(duì)比 例

P<0.05

表3 兩組患兒治療效果比較 例

3 討論

兒童白血病是小兒惡性腫瘤最常見的一種,化療、放療是急性白血病治療的主要措施，但因化療藥物、免疫制劑、激素的應(yīng)用可使粒細(xì)胞持續(xù)而嚴(yán)重缺乏，機(jī)體抵抗力明顯下降，使感染成為白血病患兒死亡的重要原因之一[5]。而口腔感染是白血病患兒化療后最常見的并發(fā)癥[6]，采取有預(yù)見性的護(hù)理，對(duì)提高患兒的生活質(zhì)量有重要意義。

目前，國(guó)內(nèi)臨床上常選用外用重組人粒細(xì)胞刺激因子凝膠(rhGM-CSF)[7]，主要成分為重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子，rhGM-CSF有效啟動(dòng)創(chuàng)面愈合，促進(jìn)創(chuàng)面壞死組織脫落；具有保濕浸潤(rùn)作用，使創(chuàng)面在濕潤(rùn)環(huán)境下有利于上皮細(xì)胞及其修復(fù)細(xì)胞的增生，有效促進(jìn)創(chuàng)面的愈合；具有良好的安全性和有效性。

hUCB-MSC-CM中含有血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、血小板源生長(zhǎng)因子(PDGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)等。這些生長(zhǎng)因子可以參與多種細(xì)胞反應(yīng)。如VEGF可以形成功能性血管，有效促進(jìn)血管再生，促進(jìn)創(chuàng)傷組織的修復(fù)[8]；TGF-β在組織的創(chuàng)傷修復(fù)中，一方面發(fā)揮炎癥的介質(zhì)作用，減少炎癥細(xì)胞的遷移和促進(jìn)炎癥反應(yīng)的消退；另一方面，可促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)如膠原蛋白、纖粘連蛋白的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生、增殖和分化，誘導(dǎo)血管形成。Hirshberg等[9]研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β對(duì)于黏膜損傷早期治療效果更加顯著；FGF可調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝和促進(jìn)血管生成。商振球等[10]認(rèn)為FGF可以為創(chuàng)面的愈合提供蛋白等營(yíng)養(yǎng)，使上皮細(xì)胞加快生長(zhǎng)，加快創(chuàng)面愈合；PDGF可促進(jìn)炎癥反應(yīng)、肉芽組織形成、再上皮化、基質(zhì)形成與重塑，Cheng等[11]實(shí)驗(yàn)表明PDGF可促進(jìn)創(chuàng)面的愈合，明顯提高愈合質(zhì)量，參與血管的生成與重構(gòu)；HGF、VEGF具有抗血管內(nèi)皮、腎小管及肝細(xì)胞凋亡的作用，而HGF除了抗凋亡外，還能促進(jìn)有絲分裂并通過(guò)抑制TGF-β表達(dá)起到抗纖維化作用；hUCB-MSC-CM中存在MSCS合成和分泌包括鈉尿肽、降鈣素基因相關(guān)肽、內(nèi)皮素等在內(nèi)的多種調(diào)節(jié)肽，參與細(xì)胞存活與保護(hù)、心血管調(diào)節(jié)和組織修復(fù)[12]。hUCB-MSC-CM原材料從廢棄的臍帶中獲取，并由產(chǎn)婦同意，簽署同意書，也是臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)中的“副產(chǎn)品”，可以在體外大量的制備，不屬于國(guó)家規(guī)定干細(xì)胞三類技術(shù)范疇內(nèi),國(guó)家衛(wèi)計(jì)委2015年發(fā)布的《干細(xì)胞臨床研究管理辦法》中細(xì)胞培養(yǎng)條件培養(yǎng)基不屬于其范疇，具有可行性，實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，不涉及倫理問題。在大劑量化療導(dǎo)致口腔黏膜炎的患兒中，療效顯著，使用方法簡(jiǎn)單。但機(jī)制有待進(jìn)一步研究，具有較大的臨床應(yīng)用前景。

綜上所述，化療藥物影響了口腔黏膜上皮細(xì)胞的正常代謝和更新，而黏膜的修復(fù)取決于該部位黏膜的血液供應(yīng)及細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的速度, hUCB-MSC-CM可以提供白血病患兒化療后缺乏的各種細(xì)胞因子，為促進(jìn)潰瘍面愈合提供了更好的條件，因此給予hUCB-MSC-CM護(hù)理干預(yù)后，療效較外用重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子凝膠顯著，縮短了口腔黏膜炎愈合的時(shí)間，提高了潰瘍面的愈合率，減輕了患兒的痛苦。

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門倩倩(1986-), 女,山東,本科,主管護(hù)師，護(hù)士長(zhǎng),從事臨床護(hù)理及管理工作

R473.73,R733.7

B

10.16821/j.cnki.hsjx.2017.03.022

2016-10-10)