東莞地區(qū)HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試劑的應(yīng)用分析

么俊卿+葉惠芬

[摘要]目的研究乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑（膠體金法）即HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試劑用于獻(xiàn)血者血液初篩的效果。方法選擇2014年9月～2015年12月，在東莞市中心血站獻(xiàn)血的獻(xiàn)血者為研究對(duì)象，其中2014年9月～2015年4月獻(xiàn)血的為對(duì)照組（43952人），初篩血液使用乙肝試紙條檢測(cè)血液，2015年5～12月獻(xiàn)血的為觀察組（45 810人），初篩血液使用HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試劑，比較兩者血液報(bào)廢率。結(jié)果使用HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試劑初篩血液后，血液因乙肝表面抗原陽性而報(bào)廢從0.68%下降至0.56%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；血液因梅毒螺旋體抗體陽性而報(bào)廢的從0.68%下降至0.21%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論使用乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑（膠體金法）進(jìn)行血液初篩，操作簡(jiǎn)單、可靠，能大大降低血液的報(bào)廢率，值得在各大血站推廣。

[關(guān)鍵詞]HBV；TP；HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試劑；血液初篩；實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

當(dāng)前我國(guó)乙肝病毒感染與梅毒疫情流行形勢(shì)日益嚴(yán)重，呈持續(xù)增長(zhǎng)和局部高流行態(tài)勢(shì)，乙肝病毒與梅毒正從高危人群向一般人群擴(kuò)散，在無償獻(xiàn)血人群中乙肝病毒與梅毒感染者檢出率不斷增多。乙型肝炎病毒和梅毒螺旋體病毒也是目前我國(guó)采供血機(jī)構(gòu)對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行血液檢測(cè)的必檢項(xiàng)目，也是血液報(bào)廢的重要原因。當(dāng)前梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法主要有病原學(xué)檢查和血清學(xué)試驗(yàn)，血清學(xué)試驗(yàn)又梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）、熒光梅毒螺旋體抗體吸附試驗(yàn)（rTA-ABS）、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）等；乙肝病毒的檢測(cè)主要為HBsAg、抗-HBV檢測(cè)等，而ELISA法在臨床應(yīng)用的時(shí)間較早，金標(biāo)法是近年建立起來的免疫學(xué)檢測(cè)法。為了提高工作效率，避免不必要的血液報(bào)廢，2015年5月，我站開始使用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑（膠體金法，HBsAg/TP）對(duì)無償獻(xiàn)血者進(jìn)行初篩，取得較好的成效，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年9月～2015年12月，在東莞市中心血站獻(xiàn)血的獻(xiàn)血者為研究對(duì)象，共89762人，其中2014年9月～2015年4月獻(xiàn)血人數(shù)43 952人為對(duì)照組，其中男23 852例，女20000例；年齡19～67歲，平均（45.2±3.1）歲；血液初篩項(xiàng)目：血型、乙型肝炎表面抗原、血紅蛋白、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；2015年5月～2015年12月獻(xiàn)血人數(shù)45 810人為觀察組，其中男24 810例，女21 000例；年齡18～68歲，平均（45.1±4.1）歲；血液初篩項(xiàng)目：應(yīng)用HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試劑檢測(cè)乙型肝炎表面抗原和梅毒抗體，其他檢測(cè)項(xiàng)目與對(duì)照組相同。兩組的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2檢測(cè)儀器和方法

初篩用廈門英科新創(chuàng)公司HBsAg/TP膠體金聯(lián)合檢測(cè)試紙條（批號(hào)7J0615，8F0619），復(fù)檢用北京萬泰生物科技有限公司梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（批號(hào)N20071207，N20090101）、珠海麗珠生物科技有限公司梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（批號(hào)20071107，20081223）、乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（批號(hào)20140921，20151009）和羅氏診斷產(chǎn)品有限公司核酸檢測(cè)試劑盒（批號(hào)L046010，L274420）。所用試劑均為中國(guó)藥品生物制品檢定所批批檢合格，在有效期內(nèi)使用。檢測(cè)儀器包括Thermo Electron移液器，TECANEVO 200/8全自動(dòng)加樣系統(tǒng)，德國(guó)Dade BehringBEPIII全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)，Hamilton STAR全自動(dòng)混樣器COBAS AmpliPrep全自動(dòng)提取儀COBAS Taqman Analyzer全自動(dòng)擴(kuò)增儀，儀器均在校準(zhǔn)期內(nèi)。

初篩為手工加樣，復(fù)檢采用ELISA雙抗原夾心法、ELISA雙抗體夾心法和核酸檢測(cè)法，由有資質(zhì)的檢驗(yàn)人員進(jìn)行檢驗(yàn)。對(duì)89762份標(biāo)本不合格率進(jìn)行分析，檢驗(yàn)結(jié)果判定：兩種試劑均為無反應(yīng)性定義為合格，無論其中一種試劑為反應(yīng)性定義為不合格。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

選擇SPSS14.00軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以%表示，采用x²檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組乙肝檢測(cè)情況比較

使用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑（膠體金法）進(jìn)行血液初篩后，因乙肝陽性而報(bào)廢率的血液從0.68%下降至0.56%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2兩組梅毒檢測(cè)情況比較

經(jīng)過檢測(cè)，梅毒螺旋體抗體陽性報(bào)廢率的血液從原來的0.68%下降至0.21%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3討論

眾所周知，我國(guó)是乙肝大國(guó)，2014年乙型肝炎病例報(bào)告90多萬例，據(jù)估算全國(guó)約有3000萬乙型肝炎患者，全國(guó)各地血站按《獻(xiàn)血者健康檢查要求》，把乙型肝炎表面抗原檢測(cè)作為血液初篩的必檢項(xiàng)目，有效減低血液報(bào)廢率，梅毒近年來也呈流行趨勢(shì)，已不再局限于高危人群，不同人群均有抗-TP陽性者，而且以性傳播為主的梅毒，其感染者還有可能成為艾滋病毒的潛在傳播者。導(dǎo)致梅毒抗體陽性和獻(xiàn)血者乙肝表面抗原已成為導(dǎo)致血液報(bào)廢的重要原因，僅次于ALT不合格。而為防止血液傳染疾病，對(duì)獻(xiàn)血者的血液梅毒與乙肝病毒初篩檢測(cè)非常必要。

在早期為了方便獻(xiàn)血者，血站大多采用金標(biāo)HBsAg試紙條對(duì)獻(xiàn)血者作HBsAg初篩，有效控制了因HBsAg陽性結(jié)果而導(dǎo)致的血液報(bào)廢率。但是當(dāng)前隨著性病感染率在我國(guó)的逐年升高，在直接采血中因梅毒陽性而導(dǎo)致的血液報(bào)廢率也逐漸提高。乙肝表面抗原（HBsAg）為乙肝病毒的包膜蛋白，雖然本身沒有傳染性，但是HBsAg常伴隨乙肝病毒的存在，為此HBsAg陽性是乙肝病毒感染的標(biāo)志。梅毒螺旋體是引起人類梅毒的病原體，梅毒主要通過性接觸、母嬰垂直傳播，也可通過血液傳播，當(dāng)病原體侵入人體后，可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生梅毒螺旋體特異性抗體。HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試劑作為一項(xiàng)薪型體外診斷技術(shù)當(dāng)前得到了廣泛應(yīng)用，其應(yīng)用原理是在硝酸纖維素膜上預(yù)包被金標(biāo)抗HBsAg單抗和金標(biāo)一特異性梅毒基因重組抗原，再對(duì)硝酸纖維素膜上的2條檢測(cè)線和對(duì)照線上依次包被抗-HBsAg單抗、特異性梅毒基因重組抗原和羊抗鼠IgG分別進(jìn)行檢測(cè)，適用于乙型肝炎表面抗原和梅毒螺旋體早期感染的輔助診斷。

為了降低血液報(bào)廢率，保證血液質(zhì)量，我站從2015年5月開始，對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋體的聯(lián)合檢測(cè)，取得了明顯的成效，梅毒螺旋體抗體陽性的檢測(cè)率明顯下降，與相關(guān)研究結(jié)果一致。同時(shí)乙型肝炎病毒表面抗原的陽性檢測(cè)率也有所降低，分析其原因可能是：（1）HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試劑，要求全血或血漿（血清）量為60～80μL，加樣15min后觀察和判斷結(jié)果，而以往單HBsAg檢測(cè)試劑要求全血或血漿（血清）量為70μL，在加樣10min后觀察和判斷結(jié)果，易出現(xiàn)假陰性，聯(lián)合試劑的加樣量增加了，觀察和判斷結(jié)果的時(shí)間也增加了，部分弱反應(yīng)性的血液樣本也能被檢測(cè)出來；（2）血液初篩對(duì)環(huán)境有嚴(yán)格的要求，如溫度、濕度，2015年5月份開始，我站外采組更改了血液采集流程，血液初篩從以往在車外進(jìn)行改為在車?yán)镞M(jìn)行，車箱內(nèi)溫度維持在20～25℃之間，濕度維持在40%～70%，同時(shí)車箱內(nèi)安靜不受干擾，更利于工作人員的操作，血液的加樣量和試劑反應(yīng)時(shí)間等到保證，結(jié)果更加可靠。同時(shí)有血站認(rèn)為，對(duì)于初次獻(xiàn)血者，需要做乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋體的聯(lián)合檢測(cè)，而以往檢測(cè)合格的重復(fù)獻(xiàn)血者不需要做以上兩種檢測(cè)，本研究認(rèn)為，此做法只適用于《血站技術(shù)操作規(guī)程（2012版）》要求，血液初篩項(xiàng)目只有血紅蛋白（Hb）和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）血液檢測(cè)的血站，從降低血液報(bào)廢率，節(jié)約實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)成本的角度考慮，我們認(rèn)為初次獻(xiàn)血者和重復(fù)獻(xiàn)血者檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原，梅毒螺旋體是必要的。

總之，使用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑（膠體金法）進(jìn)行血液初篩，操作簡(jiǎn)單、可靠，能大大降低血液的報(bào)廢率，值得在各大血站推廣。