白酒中常見(jiàn)的7種甜味劑檢測(cè)方法及來(lái)源的研究進(jìn)展

姚明靜，季 斌，劉麗萍，張 敬，李福佳，王傳蔚，劉建軍

（山東省食品發(fā)酵重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東省食品發(fā)酵工業(yè)研究設(shè)計(jì)院，山東濟(jì)南250013）

白酒中常見(jiàn)的7種甜味劑檢測(cè)方法及來(lái)源的研究進(jìn)展

姚明靜，季 斌，劉麗萍，張 敬，李福佳，王傳蔚，劉建軍

（山東省食品發(fā)酵重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東省食品發(fā)酵工業(yè)研究設(shè)計(jì)院，山東濟(jì)南250013）

對(duì)白酒中常見(jiàn)的7種甜味劑（安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、三氯蔗糖、紐甜、阿斯巴甜和甜菊糖苷）的特性、常見(jiàn)檢測(cè)方法及可能來(lái)源進(jìn)行了論述，并對(duì)市場(chǎng)上白酒的監(jiān)管提出了建議。

白酒； 甜味劑； 檢測(cè)方法； 來(lái)源

現(xiàn)有研究表明，傳統(tǒng)優(yōu)質(zhì)白酒的醇甜感是由其本身含有的多元醇或酮等甜味物質(zhì)所致，如2,3-丁二醇、丙三醇、雙乙酰等。為了適應(yīng)新的消費(fèi)需求，增加白酒的甜味、回甜感，又能有效提高生產(chǎn)效率成為眾多白酒企業(yè)競(jìng)相研究的課題?，F(xiàn)在不少企業(yè)為了改善口感，向生產(chǎn)的白酒中添加各種甜味劑，而國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)明確規(guī)定固態(tài)法白酒中不允許添加非發(fā)酵產(chǎn)生的呈香呈味物質(zhì)。固液和液態(tài)法白酒中僅允許用香醅串香或用食品添加劑調(diào)味調(diào)香，而不允許添加任何甜味劑[1-3]。

據(jù)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)從市場(chǎng)中抽查的白酒中可能檢出的甜味劑有以下7種：糖精鈉、安賽蜜、甜蜜素、阿斯巴甜、紐甜、三氯蔗糖和甜菊糖苷。而有些被檢出甜味劑的白酒企業(yè)聲稱在白酒生產(chǎn)或勾兌過(guò)程中并未人為添加各種甜味劑，也無(wú)法對(duì)檢出的甜味劑來(lái)源作出解釋。本文主要針對(duì)市場(chǎng)上常檢出的幾種甜味劑的性質(zhì)、檢測(cè)方法及白酒生產(chǎn)過(guò)程中甜味劑的可能來(lái)源進(jìn)行了簡(jiǎn)單介紹。

1 白酒中常見(jiàn)的7種甜味劑簡(jiǎn)介

1.1 糖精鈉

糖精鈉，又稱可溶性糖精，是一種白色結(jié)晶性粉末的甜味劑，甜度為蔗糖的300～500倍，非能量甜味劑，不參與人體的代謝吸收，但大量食用會(huì)對(duì)肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)造成危害。

1.2 安賽蜜

又名乙?；前匪徕?、AK糖，為白色結(jié)晶狀粉末，極易溶于水，不吸濕，甜度為蔗糖的200倍，具有無(wú)營(yíng)養(yǎng)、無(wú)熱量，在人體內(nèi)不代謝、不吸收的特點(diǎn)，但因其對(duì)肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)能夠造成危害，因此，對(duì)于安賽蜜，在《GB 2760—2014食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》[4]中對(duì)安賽蜜在相應(yīng)食品中的添加量進(jìn)行了嚴(yán)格限制。

1.3 甜蜜素

白色針狀、片狀結(jié)晶或結(jié)晶狀粉末，又名環(huán)己胺磺酸鉀，是由氨基磺酸與環(huán)己胺及氫氧化鈉反應(yīng)而制成的非營(yíng)養(yǎng)型合成甜味劑。其甜度為蔗糖的30倍，水溶性好，酸穩(wěn)定性強(qiáng)，成本較低，但據(jù)研究表明，食用甜蜜素和糖精的混合物可致膀胱癌。美國(guó)、英國(guó)、日本和加拿大等國(guó)已全面禁止使用此甜味劑。我國(guó)允許在一些食品中添加，GB 2760—2014[4]中對(duì)各種食品中的限量作出了相應(yīng)規(guī)定。

1.4 阿斯巴甜

又名甜味素、蛋白糖、天冬甜母、天冬甜精、天苯糖等，是由L-苯丙氨酸先與甲醇酯化后再和氨基酸L-天冬氨酸縮合酰胺化產(chǎn)生的一種經(jīng)甲基酯化后的二肽類化合物。甜度為蔗糖的200倍，占世界糖替代品市場(chǎng)份額的62%。由于其高甜度、低熱量、對(duì)人體無(wú)危害，適合于除苯丙酮酸尿患者的其他任何人群，被廣泛用于食品中。

1.5 紐甜

化學(xué)名是N-[N-(3,3-二甲基丁基)-L-α-天冬酰胺]-L-苯丙氨酰-L-甲酯，是一種白色結(jié)晶粉末，無(wú)能量，屬二肽類強(qiáng)力甜味劑。甜度為蔗糖的7000～13000倍，是阿斯巴甜的40倍，甜味純正，無(wú)苦味和金屬味。因其穩(wěn)定性好、甜味協(xié)調(diào)、無(wú)齲齒性、適用人群廣、安全性高，被廣大企業(yè)應(yīng)用于各種食品中。

1.6 三氯蔗糖

三氯蔗糖，一種白色粉末狀物質(zhì)，極易溶于水，有較好的酸穩(wěn)定性、光穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性，甜度為蔗糖的600～800倍，無(wú)能量，甜味純正，零熱量，不會(huì)造成齲齒，適合任何人群，被認(rèn)為是當(dāng)今最安全的甜味劑，已被包括中國(guó)在內(nèi)的30多個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)可作為甜味劑使用。

1.7 甜菊糖苷

甜菊糖苷純品為白色結(jié)晶粉末，易溶于水、甲醇、乙醇，有較好的耐熱性、耐鹽性和穩(wěn)定性，甜度是蔗糖的200～300倍，熱值為蔗糖的1/300，對(duì)人體無(wú)副作用，是經(jīng)我國(guó)衛(wèi)生部、輕工業(yè)部批準(zhǔn)使用的最接近蔗糖口味的天然低熱值甜味劑。它是繼甘蔗、甜菜糖之外第3種有開(kāi)發(fā)價(jià)值和健康推崇的天然蔗糖替代品，被國(guó)際上譽(yù)為“世界第三蔗糖”，因此不少食品加工企業(yè)將其作為蔗糖的替代品[5]。

2 白酒中甜味劑的常用檢測(cè)方法

目前，對(duì)白酒中甜味劑的檢測(cè)方法主要有：高效液相色譜法、離子色譜法、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、超高效液相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、氣相色譜法、薄層層析法、比色法等。薄層層析法和比色法主要應(yīng)用于食品中甜蜜素的檢測(cè)，因檢出限比較高，操作繁瑣，重現(xiàn)性差，現(xiàn)已很少用于食品中甜味劑的檢測(cè)，且食品中甜蜜素的檢測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)修訂后已將此兩種方法刪除[6]，故在此不再贅述。

2.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上引入氣相色譜理論，在技術(shù)上采用高壓、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，使之發(fā)展成為高分離速度、高分辨率、高效率、高靈敏度的液相色譜法。HPLC法的優(yōu)點(diǎn)是分離性能高、分析速度快，通過(guò)比較色譜峰與樣品色譜峰的保留時(shí)間和紫外光譜圖，可以基本確證是否含有與對(duì)照品一致的化學(xué)成分[7]。目前，應(yīng)用于白酒中甜味劑檢測(cè)的高效液相色譜檢測(cè)器主要有紫外吸收檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、二極管陣列檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。

2.1.1 紫外吸收檢測(cè)器

紫外吸收檢測(cè)器是高效液相色譜最常用的檢測(cè)器，靈敏度高，檢出限低，線性范圍寬，對(duì)流動(dòng)相的速度和溫度變化不敏感。根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，可用高效液相色譜儀紫外吸收檢測(cè)器檢測(cè)的白酒中的甜味劑有糖精鈉（GB 5009.28—2016第一法[8]）、安賽蜜（GB/T 5009.140—2003[9]）、甜蜜素（GB 5009.97—2016第二法[6]）、阿斯巴甜（GB 5009.263—2016[10]）、紐甜（GB 5009.247—2016[11]）、甜菊糖苷（SN/T 3854—2014[12]）?？梢?jiàn)，紫外吸收檢測(cè)器是應(yīng)用范圍最廣的檢測(cè)器。

除國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)外，文獻(xiàn)中也有不少利用高效液相色譜法紫外吸收檢測(cè)器檢測(cè)白酒中甜味劑的報(bào)道。司冠儒等[13]建立了一種可同時(shí)檢測(cè)白酒中安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜3種甜味劑的方法：選用XDB-C18柱，以甲醇∶0.02 M乙酸銨（v/v）=25∶75作為流動(dòng)相，在220 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)。該方法定量限為0.05 mg/L,樣品回收率在90.5%～98.3%之間。呂國(guó)良[14]采用了高效液相色譜法紫外檢測(cè)器檢測(cè)白酒中的甜蜜素，先在酸性條件下用次氯酸鈉對(duì)甜蜜素進(jìn)行衍生，后用正己烷提取，再以O(shè)DSHypersil作為色譜柱，甲醇∶水=80∶20作為流動(dòng)相，1.0 mL/min的流速，314 nm的檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，最終結(jié)果甜蜜素線性范圍為10～200 μg/mL，回收率93.15%～106.67%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.2%～2.8%，檢出限為1.0 μg/mL，定量限2.0 μg/mL。此方法可以避免白酒中環(huán)己醇、環(huán)己基類物質(zhì)帶來(lái)的干擾，比較準(zhǔn)確。付大友等[15]建立一種測(cè)定白酒中安賽蜜含量的方法，樣品直接用超純水稀釋，進(jìn)樣測(cè)定。采用ZORBAX E-clipse XDB-C18色譜柱，以含0.1%乙酸的乙酸銨緩沖液和甲醇作為流動(dòng)相，0.8 mL/min的流速，230 nm的檢測(cè)波長(zhǎng)，35℃的柱溫，最終可在2.86 min出現(xiàn)安賽蜜的峰。檢出限為1.8 mg/kg，線性范圍為1.0～50.0 μg/mL，加標(biāo)回收率在98%～101%之間。

2.1.2 示差折光檢測(cè)器

示差折光檢測(cè)器是高效液相色譜中的一種通用性較強(qiáng)的檢測(cè)器，其原理是通過(guò)連續(xù)測(cè)定參比池與樣品池折射率的變化來(lái)測(cè)量樣品中的目標(biāo)物質(zhì)含量，但靈敏度不高，對(duì)檢測(cè)環(huán)境要求比較嚴(yán)格，對(duì)流動(dòng)相的速度和溫度變化非常敏感，不適用于梯度洗脫，檢出限較高，不能進(jìn)行痕量分析。

根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 22255—2014[16]，可用高效液相色譜儀示差檢測(cè)器檢測(cè)的白酒中的甜味劑有三氯蔗糖。未見(jiàn)利用示差折光檢測(cè)器進(jìn)行白酒中甜味劑檢測(cè)的其他報(bào)道。

2.1.3 二極管陣列檢測(cè)器

二極管陣列檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是用電子學(xué)方法快速掃描而獲取，掃描速度遠(yuǎn)超色譜峰的出峰速度，可以檢測(cè)色譜流出物每瞬間的吸收光譜圖，可為每一樣品提供極為豐富的色譜和光譜信息，對(duì)分離峰進(jìn)行定量分析，并協(xié)助對(duì)色譜峰的定性和純度的鑒定。

根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，可用高效液相色譜儀二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)的白酒中的甜味劑有甜蜜素（GB 5009.97—2016第二法[6]）、阿斯巴甜（GB 5009.263—2016[10]）、紐甜（GB 5009.247—2016[11]）和甜菊糖苷（SN/T 3854—2014[12]）?？梢?jiàn)，二極管陣列檢測(cè)器也是一種應(yīng)用范圍較廣的檢測(cè)器。

程春梅等建立了一種利用高效液相色譜二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)白酒中紐甜的方法，采用了80℃水浴下將白酒樣品減壓濃縮的預(yù)處理方法，提高了預(yù)處理效率及方法檢出限。具體檢測(cè)方法為：用Agilent C18色譜柱（250 mm×4.6 mm），以0.02 mol/L的乙酸銨-乙腈（65∶35）為流動(dòng)相，在218 nm下檢測(cè)，檢出限可低至0.011 mg/kg[17]。

2.1.4 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器是一種通用型檢測(cè)器，可檢測(cè)揮發(fā)性低于流動(dòng)相的任何樣品，其原理是：恒定流速的洗脫液進(jìn)入檢測(cè)器后，首先被高壓氣流霧化，霧化形成的小液滴進(jìn)入蒸發(fā)室，流動(dòng)相及低沸點(diǎn)的組分被蒸發(fā)，剩下高沸點(diǎn)組分的小液滴進(jìn)入散射池，光束穿過(guò)散射池時(shí)被散射，散射光被光電管接收形成電信號(hào)，電信號(hào)通過(guò)放大電路、模數(shù)轉(zhuǎn)換電路和計(jì)算機(jī)轉(zhuǎn)換成色譜工作站的數(shù)字信號(hào)——色譜圖[18]。該檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是可以檢測(cè)沒(méi)有紫外吸收的有機(jī)物質(zhì)，不需要樣品含有發(fā)色基團(tuán)，靈敏度比示差折光檢測(cè)器高，對(duì)溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。缺點(diǎn)是價(jià)格較昂貴，與高效液相色譜連接時(shí)需要信號(hào)轉(zhuǎn)換模塊，而且使用時(shí)需要配置高壓氮?dú)饣蚩諝馇覍?shí)驗(yàn)中易產(chǎn)生有害廢氣。

根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[16]，白酒中的三氯蔗糖可用高效液相色譜儀蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。武金忠等建立了一種超高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)白酒中安賽蜜、阿斯巴甜、甜蜜素、紐甜、糖精和甜菊糖苷6種甜味劑的方法：采用T3色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）,40 ℃的柱溫，乙腈和水作為流動(dòng)相梯度洗脫，進(jìn)樣量3 μL，最終可在4 min內(nèi)檢出所有的甜味劑，方法回收率達(dá)到89%～105%。該方法樣品前處理比較簡(jiǎn)單，能快速、準(zhǔn)確測(cè)出6種甜味劑，同時(shí)可以避免測(cè)定結(jié)果中假陽(yáng)性的干擾[19]。

2.2 離子色譜法

離子色譜法是液相色譜法中的一種，用于分析在水溶液中能夠解離成為陰、陽(yáng)離子的物質(zhì)，具有選擇性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，在文獻(xiàn)中有不少用離子色譜法檢測(cè)白酒中甜味劑的方法研究。李紅艷和石敏等都建立了離子色譜檢測(cè)白酒中甜蜜素的方法，選用了Dionex Ionpac AS17(250 mm×4 mm)分離柱，采用了KOH作為淋洗液，樣品無(wú)需衍生化，直接過(guò)濾膜、小柱進(jìn)樣或濃縮5倍進(jìn)樣，均能得到比較準(zhǔn)確的甜蜜素?cái)?shù)據(jù)，線性范圍較好，加標(biāo)回收率較高[20-21]。鐘紅霞、王勇等建立的白酒中甜蜜素的檢測(cè)方法，選用了Metrosep A Supp 5(250 mm×4 mm)作為陰離子分離柱，NaHCO3-Na2CO3作為淋洗液，樣品沸水浴蒸干后超純水定容，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾后直接上機(jī)檢測(cè)，最終甜蜜素的線性范圍為0.001～0.20 mg/mL,檢出限為10 μg/L[22-23]。

2.3 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS）法

HPLC-MS法同時(shí)結(jié)合了HPLC技術(shù)的高分離能力與MS較高的靈敏度與較強(qiáng)的定性能力等優(yōu)點(diǎn)，能夠在一次運(yùn)行中對(duì)檢測(cè)目標(biāo)同時(shí)完成篩選和確證，進(jìn)行準(zhǔn)確地定性、定量。針對(duì)氣相色譜法不適用于白酒檢測(cè)的現(xiàn)狀，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.97—2016中添加了液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法，并專門指出該方法適用于白酒中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測(cè)定[6]。

早在2007年，王駿[24]就建立了一種HPLC/MS測(cè)定白酒中微量甜蜜素、糖精鈉和安賽蜜的方法。孫棣等[25]建立了白酒中安賽蜜、甜蜜素、糖精鈉和三氯蔗糖4種甜味劑的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的檢測(cè)方法：采用Agilent EC-C18色譜柱，以甲醇-乙酸銨溶液為流動(dòng)相，柱溫35℃，流速0.8 mL/min梯度洗脫進(jìn)行檢測(cè)。4種甜味劑在5～100 ng/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，檢出限為0.001～0.02 mg/kg，回收率在82.70%～117.62%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.09%～4.64%。吳宏萍等[26]建立了一種同時(shí)測(cè)定白酒中安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素和阿斯巴甜4種甜味劑的LC-MS-MS分析方法：采用Poroshell 120 EC-C18柱，以含0.1%甲酸的水-甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速0.4 mL/min，在電噴霧電離（ESI）負(fù)離子模式下，采用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行檢測(cè)，線性范圍均在5～100 μg/L，加標(biāo)回收率89%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.5%，檢出限均為1 μg/L。余磊等[27]建立了LC-MS-MS同時(shí)檢測(cè)醬香型白酒中安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、紐甜及三氯蔗糖6種人工合成甜味劑的方法：樣品直接稀釋過(guò)0.45 μm濾膜上機(jī)分析，以C18柱分離，0.1%甲酸水溶液-甲醇為流動(dòng)相，梯度洗脫，在電噴霧電離（ESI）負(fù)離子模式下，采用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行檢測(cè)，最終6種甜味劑在10～200 ng/mL范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)為0.9915～0.9943，20～500 ng/mL范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)為0.9961～0.9983，檢出限均為10 μg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%～7.9%。該方法樣品前處理比較簡(jiǎn)單，可以快速、高效、準(zhǔn)確地同時(shí)測(cè)定出白酒中6種甜味劑。

2.4 超高效液相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用儀（UPLC-MS/MS）法

UPLC技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的分離技術(shù)，它采用1.7 μm顆粒度的色譜柱填料，柱效更高更穩(wěn)定，流動(dòng)相流速快、分析時(shí)間短、分析通量高，與質(zhì)譜聯(lián)用后為復(fù)雜體系的分離分析提供了良好的平臺(tái)，是白酒中甜味劑檢測(cè)的有力工具。

2010年，郭瑩瑩等[28]建立了一種白酒及調(diào)香劑中甜蜜素、糖精鈉、安賽蜜和阿斯巴甜4種甜味劑的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)法：采用Waters C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）分離，以乙腈-0.01 g/100 mL氨水為流動(dòng)相，梯度洗脫，經(jīng)電噴霧離子源負(fù)離子化后，用三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行定量分析。4種甜味劑在10～1000 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，檢出限為0.03～0.35 μg/L，平均加標(biāo)回收率在75.2%～115.3%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在8%以內(nèi)。吳世嘉等[29]建立了一種檢測(cè)白酒中安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜和紐甜6種甜味劑的UPLC-MS/MS方法：先用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除白酒中的醇類等易揮發(fā)組分，通過(guò)BEH C18柱分離，以甲醇-0.02 mol/L乙酸銨水溶液作流動(dòng)相梯度洗脫，在ESI負(fù)離子模式下檢測(cè)，一次進(jìn)樣分析僅需10 min，線性關(guān)系和回收率均比較好，得出的安賽蜜檢出限為0.05 mg/L,糖精鈉、甜蜜素、紐甜的檢出限為0.01 mg/L，三氯蔗糖、阿斯巴甜檢出限為0.1 mg/L。該方法準(zhǔn)確可靠，簡(jiǎn)便快捷，可同時(shí)檢測(cè)6種甜味劑。仇紅萍建立了一種UPLC-MS/MS法檢測(cè)白酒中的安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素和三氯蔗糖的方法：使用色譜柱Agilent ZORBAXSB-C18(50 mm × 2.1 mm,1.8 μm)，用0.1%甲酸水溶液-甲醇流動(dòng)相梯度洗脫，在電噴霧離子源ESI負(fù)離子模式下多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）定性、定量檢測(cè)。4種甜味劑在10～500 μg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，檢出限為0.5～2.4 μg/L，加標(biāo)回收率在89.4%～104.6%之間，RSD＜4%。整個(gè)分析過(guò)程可在2.5 min內(nèi)完成，檢測(cè)效率較高[30]。劉國(guó)英等[31]利用UPLC-MS/MS建立一種白酒中安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素和阿斯巴甜4種微量甜味劑的檢測(cè)方法：以BEH C18色譜柱為分離柱，0.1%（v/v）乙酸-1 mmol/L乙酸銨溶液∶乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)UPLC分離，采用電噴霧串聯(lián)四級(jí)桿進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）進(jìn)行監(jiān)測(cè)。4種甜味劑在50～250 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，3個(gè)加標(biāo)水平樣品平均回收率為97.1%～111.3%，RSD均控制在5%以內(nèi)。

2.5 氣相色譜法

氣相色譜法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.97—2016[6]中檢測(cè)食品中甜蜜素的第一個(gè)方法，其原理是在硫酸介質(zhì)中環(huán)己基氨基磺酸鈉與亞硝酸反應(yīng)，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，利用氣相色譜氫火焰離子化檢測(cè)器進(jìn)行分離及分析，保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。但是由于白酒中含有的環(huán)己醇及含環(huán)己基的物質(zhì)，用此方法檢測(cè)可能會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的假陽(yáng)性，因此該標(biāo)準(zhǔn)明確指出氣相色譜法不適用于白酒中甜蜜素的檢測(cè)。但有學(xué)者對(duì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中的預(yù)處理方法進(jìn)行了改進(jìn)，從而避免假陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)。

陳玉波等[32]建立了一種氣相色譜毛細(xì)管柱內(nèi)標(biāo)法測(cè)定白酒中甜蜜素含量的方法，以乙酸丁酯為內(nèi)標(biāo)，選用DB-1毛細(xì)管柱，F(xiàn)ID檢測(cè)器，進(jìn)樣量10 μL，最終結(jié)果線性范圍為0.1～2.0 mg/mL，加標(biāo)回收率在99.8%～102.6%之間。這種方法改變了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法，并證明了環(huán)己醇的存在不會(huì)影響白酒中甜蜜素的測(cè)定，預(yù)處理過(guò)程中加熱法環(huán)己醇可以完全揮發(fā)，從而避免了白酒中甜蜜素檢測(cè)的假陽(yáng)性，能夠比較準(zhǔn)確地檢測(cè)出白酒中甜蜜素含量。

3 白酒中甜味劑的來(lái)源分析

目前，對(duì)白酒中甜味劑的來(lái)源主要存在兩種情況：一是很多企業(yè)在生產(chǎn)勾調(diào)過(guò)程中，因使用含有甜蜜素等甜味劑的陳香劑、除苦劑、糟香劑、窖香劑或復(fù)合調(diào)酒劑等酒用香精香料，造成白酒產(chǎn)品中甜蜜素違規(guī)；二是部分企業(yè)因使用含有甜味劑的外購(gòu)原酒，而導(dǎo)致被動(dòng)違規(guī)[32]。陳仁遠(yuǎn)等[33]圍繞白酒生產(chǎn)加工環(huán)節(jié)的產(chǎn)品因素、人為因素和環(huán)境因素，對(duì)企業(yè)生產(chǎn)工藝情況進(jìn)行調(diào)查研究，同時(shí)設(shè)計(jì)科學(xué)的采樣方案進(jìn)行取樣檢測(cè)，探索識(shí)別白酒中甜味劑的本底值及可能來(lái)源的路徑。通過(guò)分析驗(yàn)證，所有正常生產(chǎn)過(guò)程的酒及成品酒中的甜蜜素、糖精鈉、安賽蜜和三氯蔗糖的含量均低于檢出限。進(jìn)一步的研究證明，排除非法添加的前提下，白酒中甜味劑的主要來(lái)源為外購(gòu)基酒和外購(gòu)調(diào)味酒，建議白酒生產(chǎn)企業(yè)加強(qiáng)對(duì)外購(gòu)基酒和調(diào)味酒的進(jìn)貨驗(yàn)證。孫棣等[34]對(duì)大量白酒樣品中的甜味劑進(jìn)行了檢測(cè)，對(duì)白酒生產(chǎn)過(guò)程中的甜味劑產(chǎn)生的可能原因進(jìn)行了分析。他們對(duì)企業(yè)自身生產(chǎn)的成品酒、輪次酒及外購(gòu)的調(diào)味酒、高溫大曲、中溫大曲、糖化酶香料物質(zhì)等進(jìn)行了安賽蜜、甜蜜素、糖精鈉和三氯蔗糖的測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果顯示，外購(gòu)的調(diào)味酒和糖化酶中均檢出了甜味劑，并解釋說(shuō)糖化酶檢出的甜味劑可能是由于在自身發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生了干擾物質(zhì)導(dǎo)致了成品酒中甜味劑本底值的產(chǎn)生，建議企業(yè)為了保證白酒生產(chǎn)的質(zhì)量安全應(yīng)采取有效手段控制外購(gòu)酒樣的質(zhì)量。

4 結(jié)論

綜上所述，高效液相色譜法（紫外檢測(cè)器）是白酒中甜味劑檢測(cè)的最普遍最通用也是應(yīng)用范圍較廣的檢測(cè)方法，但檢測(cè)時(shí)間比較長(zhǎng)，不同的甜味劑可能需要不同的前處理方法和最優(yōu)檢測(cè)波長(zhǎng)。隨著檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步和檢測(cè)儀器的快速發(fā)展，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和超高效液相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用儀法逐漸成為白酒中甜味劑檢測(cè)的常用方法，且由于其檢出限低、預(yù)處理方法簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短，并可同時(shí)檢測(cè)多種甜味劑，提高了檢測(cè)效率，在未來(lái)有進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)和推廣應(yīng)用價(jià)值。白酒中甜味劑的來(lái)源排除廠家主動(dòng)添加的因素外，引入的主要渠道有外購(gòu)的原酒、調(diào)味酒和酒用香精香料，建議廣大白酒廠家增強(qiáng)本身的進(jìn)貨驗(yàn)證能力，購(gòu)買原酒、調(diào)味酒和香料時(shí)注意其甜味劑的檢測(cè)。同時(shí)建議相關(guān)部門加大對(duì)白酒原酒、調(diào)味酒和酒用香精香料的監(jiān)督抽查，從源頭上控制白酒中甜味劑的出現(xiàn)。

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Research Progress in the Detection and the Sources of Seven Common Sweeteners in Baijiu

YAO Mingjing,JI Bin,LIU Liping,Zhang Jing,LI Fujia,WANG Chuanwei and LIU Jianjun
(Shandong Key Lab of Food Fermentation Engineering,Shandong Research Institute of Food and Fermentation Industries,Jinan,Shandong 250013,China)

In this paper,the detection methods of 7 common sweeteners in Baijiu including acesulfame,sodium saccharin,sodium cyclamate,three sucrose,neotame,aspartame and stevioside were introduced.Besides,the characteristics and the possible source of the 7 sweeteners were illustrated.And some recommendations were put forward on Baijiu supervision in the market.

Baijiu;sweetener;detection methods;source

TS262.3；TS261.7；TS261.4

A

1001-9286（2017）10-0101-06

10.13746/j.njkj.2017088

2017-04-10

姚明靜，女，工程師，碩士，研究方向?yàn)槭称费邪l(fā)與檢測(cè)，E-mail：mingjing1004@163.com。

劉建軍（1962-），男，教授，博士生導(dǎo)師，泰山學(xué)者特聘教授，研究方向?yàn)槲⑸镔Y源利用，E-mail：1606735637@qq.com。

優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間：2017-06-02；地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20170602.1406.006.html。