豬鉤端螺旋體病的流行與診斷

翁善鋼

（外高橋出入境檢驗檢疫局，上海 浦東新區(qū) 200137）

豬鉤端螺旋體病的流行與診斷

翁善鋼

（外高橋出入境檢驗檢疫局，上海 浦東新區(qū) 200137）

鉤端螺旋體病是人和家畜（主要是犬、牛和豬）的一種全身性疾病，以發(fā)熱、肝臟和腎臟功能不全、肺臟病變和繁殖障礙為特征。豬鉤端螺旋體感染通常是亞臨床性的，不過有時也可能會導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，主要取決于感染病原體的血清型和豬感染時的日齡。

1 病原學(xué)

鉤端螺旋體是一種直徑約為 0.1 μm，長度為6～20 μm 的螺旋體原蟲。鉤端螺旋體具有典型的雙膜結(jié)構(gòu)，其中細(xì)胞質(zhì)膜與肽聚糖細(xì)胞壁緊密結(jié)合，并被一層外膜覆蓋。在外膜中，脂多糖構(gòu)成了鉤端螺旋體的主要抗原。

鉤端螺旋體屬目前由 23個種組成，根據(jù)其致病性分為 3 個群：致病性鉤端螺旋體、腐生性鉤端螺旋體和中間群。此外，根據(jù)表面抗原的表達(dá)水平，通過凝集吸收反應(yīng)還可以進(jìn)一步分為各種血清型。跟豬有關(guān)的血清型有布拉迪斯拉發(fā)型 （Bratislava）、波莫納型（Pomona）和塔拉索維型（Tarassovi）等。在這些血清型中，只有布拉迪斯拉發(fā)型呈全球性分布。波莫納型是導(dǎo)致北美、南美、某些亞洲國家、澳大利亞和東歐國家的豬只出現(xiàn)感染的主要原因。塔拉索維型主要出現(xiàn)在澳大利亞、新西蘭和東歐國家，但在西歐國家很少見。

2 臨床癥狀

鉤端螺旋體通過小傷口或擦傷，經(jīng)黏膜（如結(jié)膜）或濕潤的皮膚進(jìn)入體內(nèi)。感染后 1 d 或 2 d，會有持續(xù) 4～7 d 的鉤端螺旋體血癥期。在此期間，鉤端螺旋體進(jìn)入多種組織并增殖，包括肝臟、腎臟、生殖道、眼睛和中樞神經(jīng)系統(tǒng)。在血液和組織中的鉤端螺旋體數(shù)量達(dá)到臨界水平后，會出現(xiàn)因鉤端螺旋體毒素或有毒細(xì)胞成分導(dǎo)致的病變，并可能會觀察到由此產(chǎn)生的癥狀。

在妊娠母豬的子宮內(nèi)，當(dāng)鉤端螺旋體突破胎盤屏障時，胎兒會發(fā)生感染。絕大多數(shù)的胎兒從妊娠中期開始就會感染，然后發(fā)生流產(chǎn)、死胎和產(chǎn)弱仔。在妊娠的前半階段，經(jīng)胎盤感染的可能性較低，如發(fā)生這種情況，則會出現(xiàn)胎兒死亡并被吸收，母豬定期或不定期返情，以及有木乃伊胎或無木乃伊胎的窩產(chǎn)仔數(shù)減少。無論哪種感染狀態(tài)，胚胎死亡、流產(chǎn)、死胎和產(chǎn)弱仔通常發(fā)生在感染后 7～60 d。

流產(chǎn)、死胎或出生后不久死亡的弱仔，通常是妊娠母豬感染鉤端螺旋體病的唯一癥狀。流產(chǎn)胎兒可能會表現(xiàn)出非特異性的大體病變，包括多組織水腫、體腔內(nèi)出現(xiàn)漿液性或血色液體，有時皮膚、腎皮質(zhì)和肺臟出現(xiàn)點狀出血。肝臟會出現(xiàn)灰白色小斑點，因為不到 10%的病例會出現(xiàn)局灶性壞死，但這屬于本病特有癥狀。流產(chǎn)胎兒的胎盤一般表現(xiàn)正常，但在某些病例中可能會出現(xiàn)增厚和水腫，且呈褐色和外觀壞死。

鉤端螺旋體感染的臨床嚴(yán)重程度根據(jù)感染的血清型不同變化很大。對波莫納型來說，一旦傳染源侵入豬場，就會發(fā)生很高的感染率，并可能會導(dǎo)致嚴(yán)重的損失。所以，大約 20%的妊娠母豬會發(fā)生流產(chǎn)，死亡的仔豬/母豬數(shù)可達(dá) 28%。同樣，波莫納型的血清陽性豬群發(fā)生木乃伊胎、死胎和母豬反復(fù)配種的比率比陰性母豬群高。由塔拉索維型引起的感染也會出現(xiàn)類似的情況。然而，它不會在豬群中迅速傳播，并且往往會比波莫納型更溫和，不過有報道稱該血清型可造成 30%的感染母豬出現(xiàn)流產(chǎn)。此外，塔拉索維型與總體的繁殖性能障礙和窩產(chǎn)仔死亡數(shù)的增加有關(guān)。布拉迪斯拉發(fā)型感染會持續(xù)存在于非妊娠母豬和公豬的生殖系統(tǒng)中。因而，鉤端螺旋體可從流產(chǎn)后 5 個月?lián)錃⒌牧鳟a(chǎn)母豬的輸卵管、子宮、陰道和乳腺淋巴結(jié)中分離到。受此血清型感染的豬通常對感染具有較弱且較短的抗體凝集反應(yīng)。之前未感染豬群或免疫力正在下降的豬群，最初的癥狀可能類似于其它血清型引發(fā)的感染中觀察到的癥狀：流產(chǎn)（特別是在妊娠后期），早產(chǎn)，窩產(chǎn)仔數(shù)減少，死胎、木乃伊胎和初生仔豬質(zhì)量參差不齊增多，包括弱仔的高發(fā)生率。然而，布拉迪斯拉發(fā)型感染最重要的影響是對隨后繁殖性能的影響，以及返情到配種的間隔時間較正常返情時間延長許多，且延長時間不規(guī)則（23～38 d），在許多情況下還會伴有膿性黏液流出，這種情況可能會發(fā)生在返情前 2～3 d，這通?？梢澡b定為低受胎率。同時，布拉迪斯拉發(fā)型偶爾可能會導(dǎo)致持續(xù)時間不超過5個月的嚴(yán)重不孕。

3 診斷

豬鉤端螺旋體病最常見的診斷方法可以分為直接法和間接法。直接法注重于該菌的檢測和/或鑒定，而間接法則利用血清學(xué)方法檢測該菌的抗體。

3.1 直接法

鉤端螺旋體的分離和鑒定，利用銀染或暗視野顯微鏡目測鉤端螺旋體，通過熒光抗體試驗（Fluorescent Antibody Test,FAT）或免疫組化試驗檢測鉤端螺旋體抗原，或檢測豬組織、體液中的鉤端螺旋體 DNA，可以對出現(xiàn)急性鉤端螺旋體病臨床癥狀的動物進(jìn)行診斷。胎兒組織樣本的相同檢測結(jié)果也可對鉤端螺旋體導(dǎo)致的流產(chǎn)進(jìn)行確診。

組織分離和鑒定鉤端螺旋體可以對鉤端螺旋體病做出明確的診斷，而且可以鑒定感染菌的血清型。這種方法對鉤端螺旋體病的診斷具有較高的靈敏性和特異性。細(xì)菌培養(yǎng)通常只能在參考實驗室進(jìn)行，但對流行病學(xué)分析仍然很重要。最后，細(xì)菌培養(yǎng)對測定它的抗生素敏感性是絕對必要的。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction,PCR） 是基于檢測細(xì)菌中普遍存在的不同特定基因或致病性鉤端螺旋體的專有基因。PCR 試驗的主要優(yōu)點是可以進(jìn)行早期診斷，而且不需要活的鉤端螺旋體就可以得到陽性PCR 結(jié)果。免疫熒光（Immunofluorescence,FAT）和免疫組化試驗適用于胎兒樣本或高度自溶的死亡動物，因為這些樣本的病原菌分離可能會很困難。此外，當(dāng)需要進(jìn)行快速診斷時，這兩種方法也非常實用。這兩種方法的主要缺點是其檢測正確性取決于樣本中存在的鉤端螺旋體數(shù)量。因此，這兩種方法不適用于對處于慢性攜帶狀況的動物進(jìn)行診斷，因為這種動物體內(nèi)的細(xì)菌數(shù)量可能非常低。組織病理學(xué)和暗視野顯微鏡檢也可以用于診斷。使用銀染技術(shù)的優(yōu)點是其可以應(yīng)用于甲醛固定的組織樣本，而且還可以是組織病理學(xué)診斷方法的一個有效輔助手段。然而，組織學(xué)技術(shù)缺乏靈敏性和特異性，而且不能確定病原體的血清型。暗視野顯微鏡檢法已被用于檢測感染鉤端螺旋體的動物和胎兒的尿液或體液樣本。但是，該技術(shù)具有較低的靈敏性和特異性，因為許多組織的偽影可能會被誤認(rèn)為是鉤端螺旋體。

3.2 間接法

血清學(xué)試驗是確認(rèn)臨床診斷最常用的方法。雖然已經(jīng)推出了許多血清學(xué)試驗方法，但僅顯微鏡凝集試驗（Microscopic Agglutination Test,MAT）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA）是獸醫(yī)實驗室常用的方法。血清學(xué)方法只在兩種情況下對個體動物具有診斷價值：第一，當(dāng)急性期且間隔為 14～21 d 的配對血清樣本確定為血清轉(zhuǎn)換時；第二，當(dāng)在免疫功能正常的胎兒血液和/或胸腔液中或未采食初乳的仔豬血清中檢測到抗體時。在動物水平上對流產(chǎn)病例進(jìn)行診斷時，血清學(xué)試驗在波莫納型的感染病例中可能具有診斷價值。然而，如果在塔拉索維型感染以及布拉迪斯拉發(fā)血清型感染上，血清學(xué)試驗的診斷價值非常有限。

MAT 是診斷鉤端螺旋體病最廣泛的方法，而且是標(biāo)準(zhǔn)的血清學(xué)試驗。由于其通常不與其他細(xì)菌的抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，使其特異性很好。然而，疫苗以及鉤端螺旋體血清型和血清組之間的交叉反應(yīng)可能會干擾 MAT的結(jié)果分析。MAT不能用來明確確定個體感染或群體感染的血清型。另外，不同血清型（包括免疫接種后兩個月的疫苗）的抗體滴度可能會維持在顯著性較高的水平上。

基于外膜蛋白構(gòu)建的 ELISA 具有較低的特異性，可以檢測所有致病性鉤端螺旋體的抗體。此外，該方法對適應(yīng)性血清型感染靈敏性低，更適用于對非適應(yīng)性血清型感染的診斷。基于脂多糖構(gòu)建的 ELISA 具有血清組特異性，這對流行病學(xué)研究非常有用。主要缺點是，在主要為布拉迪斯拉發(fā)型感染中，其靈敏性可能會低于 50%。同 MAT 一樣，ELISA 試驗不能區(qū)分野毒感染和接種感染的動物。

（編輯：柳青）

延緩硝酸酯類耐藥性的三項對策

硝酸酯類是治療心絞痛的一線藥物。長期使用硝酸酯類藥物會隨著用藥次數(shù)和用藥時間的推移，治療作用不斷減退，療效變得越來越差，產(chǎn)生了耐藥性。為了能夠延緩硝酸酯類耐藥性的產(chǎn)生，醫(yī)學(xué)專家建議，心腦血管病患者在用藥時可以采取以下三項對策。

一、延長給藥間隔時間 原則上兩次用藥的間隔時間應(yīng)在 14 小時以上，確保血漿 12 小時內(nèi)無硝酸鹽或處于低硝酸鹽濃度狀態(tài)。硝酸酯類最好是每日清晨用藥 1 次。如果必須每日 2 次用藥時，應(yīng)集中在白天分次服用，夜間不再服用。

二、聯(lián)合應(yīng)用其他藥物 與其他藥物聯(lián)合用藥防治心絞痛，是延緩硝酸酯類耐藥性的常用方法。通常是與 β 受體阻滯劑或/和鈣通道阻滯劑聯(lián)合應(yīng)用，例如心得安、美托洛爾、維拉帕米、硝苯地平緩釋片等。這樣既可延緩硝酸酯類耐藥性的產(chǎn)生，又可通過不同的機(jī)理降低心肌耗氧量，取得協(xié)同效應(yīng)，增強(qiáng)防治效果。

三、與其他藥物交替使用 近年有關(guān)學(xué)者主張將硝酸酯類與其他藥物交替使用，在延緩硝酸酯類耐藥性方面也取得了良好效果。例如，硝酸酯類與麝香保心丸隔日交替使用。由于麝香保心丸可以保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞及解除血管痙攣，兼具改善心肌供血和保護(hù)血管作用，因而能夠減少硝酸酯類的用藥次數(shù)和延長給藥時間，二者合用有利于延緩硝酸酯類耐藥性的產(chǎn)生，是一種不錯的臨床干預(yù)措施。

（摘自《家庭醫(yī)學(xué)》2017 年第 3 期 韓詠霞/文）

S858.285.9

A

1002-1957(2017)03-0117-02

2017-03-19

翁善鋼（1985-），男，江蘇常熟人，碩士，主要從事各類動物疫病流行病學(xué)及其防控對策研究.E-mail：sgweng@163.com