科華核酸血液篩查系統(tǒng)的質(zhì)量控制

趙宇，王艷

吉林市紅十字中心血站，吉林吉林132001

科華核酸血液篩查系統(tǒng)的質(zhì)量控制

趙宇，王艷

吉林市紅十字中心血站，吉林吉林132001

目的保障臨床用血安全，提升血液檢測水平。方法對科華核酸血液篩查系統(tǒng)的質(zhì)量控制關(guān)鍵點進行總結(jié)、分析。結(jié)果極大降低人為誤差，節(jié)約檢測成本，保證血液質(zhì)量。結(jié)論推行對科華核酸血液篩查系統(tǒng)進行質(zhì)量控制，可使血液檢測的管理先進化、經(jīng)濟化。

血液篩查；核酸檢測；質(zhì)量控制

核酸檢測(nucleic acid test，簡稱NAT)是提升血液安全的重要手段[1]，由于獻血員可能攜帶HBV/HCV/HIV等血源性傳染病病毒,為加強血站的安全保障能力,控制血源性疾病通過輸血傳播,目前國內(nèi)開展核酸檢測對血液進行篩查[2]。吉林市紅十字中心血站自2012年便開展核酸血液篩查工作，選用國內(nèi)規(guī)模最大的體外診斷試劑廠家-科華血篩系統(tǒng)，采取8樣本混合檢測方案，總結(jié)日常工作中對核酸檢測工作產(chǎn)生質(zhì)量影響的關(guān)鍵點，進一步規(guī)范檢測人員對核酸擴增檢測系統(tǒng)的操作，降低人為操作因素導致的實驗誤差，積極推進全國血站核酸檢測工作,以提升血站實驗室檢測水平。

1 檢測技術(shù)人員要求

1.1 資質(zhì)要求

應滿足《血站質(zhì)量管理規(guī)范》和《血站實驗室質(zhì)量管理規(guī)范》關(guān)于人員的要求，同時經(jīng)過核酸檢測相關(guān)的專業(yè)培訓。（國家衛(wèi)生計生委及廠家培訓）并取得培訓合格證書。

1.2 培訓要求

符合資質(zhì)的核酸檢測實驗室技術(shù)人員應經(jīng)過核酸檢測技術(shù)培訓并獲得合格證書。接受實驗室生物安全、知識培訓考核合格以及廠家的上崗前儀器設(shè)備操作、維護等的培訓，并經(jīng)過科主任批準后，方可進入核酸實驗室工作。每年至少進行培訓1次。

1.2.1 理論培訓依據(jù)《實時熒光PCR技術(shù)》《全國血站核酸擴增檢測實驗室技術(shù)人員培訓》《血站核酸檢測質(zhì)量保證指南》《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范》《生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范》《實驗室生物安全通用要求（GB19489-2008）》《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》《血站質(zhì)量管理培訓教程》。

1.2.2 技術(shù)培訓指導由富有經(jīng)驗的具備資質(zhì)的人員以及廠家技術(shù)工程師指導新進人員的操作培訓。

1.2.3 培訓期不少于1個月，并經(jīng)過評估表明合格，由站長授權(quán)，給予計算機相應的模塊操作權(quán)限。

2 設(shè)備維護

①擦拭儀器時用水或者75%酒精打濕無紡布，但不要過濕，避免液體滴落至儀器。②STAR上樣臺面兩塊金屬板操作中避免人為加壓。開關(guān)前蓋面板時，雙手對稱均勻用力，輕開輕關(guān)。當儀器開始運行后，無提示不得打開安全面板，也不可移動臺面內(nèi)的任何載架。③向ABI7500擴增儀放置PCR擴增板時，需雙手推進PCR板基座，輕開輕關(guān)。④半年維護后，廠家工程師及實驗室工作人員填寫相關(guān)表單并簽字，實驗室工作人員存檔校準證書，并更換儀器校準標簽。

3 試劑制備

①裂解液在使用前應在55℃水浴箱中孵育至晶體完全融化，實驗30 min前取出陰性對照（NC）、陽性對照（PC）和室內(nèi)質(zhì)控品（QC），平衡至室溫。擴增試劑則在實驗開始時由-20℃轉(zhuǎn)移至4℃冰箱內(nèi)融化。在配制小劑量試劑時，均應在漩渦混合儀混勻10 s后，在掌心離心機低速離心5 s。②配制磁珠和去抑制劑時，應注意觀察試劑槽內(nèi)試劑的剩余量，保證一定的基底量；當實驗標本數(shù)量較少時，注意要多添加裂解液的量。③室內(nèi)質(zhì)控品、內(nèi)標及裂解液不足下次實驗時，需提前融化備好；移液器槍頭、加樣尖、深孔板、反應板等耗材也需提前準備好。④每周將試劑槽中的試劑徹底更換1次，試劑槽用超純水清洗并晾干。⑤裂解液一定要緩慢顛倒混勻20次以上，倒入試劑槽后需除去泡沫，準確放置試劑槽的位置。⑥配制陰性對照、陽性對照及質(zhì)控品時，應勤換手套，避免交叉污染，管壁應無殘留或氣泡，配制質(zhì)控品時，應該選用澄清、足量的陰性血清。⑦在STAR放置磁珠試劑槽載架前，觀察磁珠狀態(tài)是否正常，手工搖勻磁珠。⑧配置反應液時，雙人核對添加的試劑名稱，混勻并離心反應液管。去除氣泡，以免影響加樣。⑨試劑及質(zhì)控品使用后，及時記錄出庫，使用前應對試劑、耗材等規(guī)格與批號進行核對。⑩擴增試劑的試劑盒上應注明開啟的日期、消耗的人份數(shù)，實驗前觀察試劑量，以準備待融化的擴增試劑的劑量。?擴增試劑的試劑盒內(nèi)陽性對照品，應放置在標本制備區(qū)的冰箱內(nèi)。

4 標本制備

①處理標本時，應帶乳膠防滑型手套，去除試管帽，擺入載架時應注意輕拿輕放，以防載架翻倒，并注意防止迸濺及交叉污染。②在將匯集標本管插入試管載架時，仔細核實標本是否存在凝塊、未離心、溶血、乳糜、試管是否破損，標本量是否足量等現(xiàn)象，如有以上情況發(fā)生，進行相關(guān)處理措施后再進行實驗。③匯集和提取后的標本用一次性保鮮膜覆蓋好，放入2～8℃冰箱中保存，24 h后進行相關(guān)醫(yī)療廢物處理。

5 提取方法

①首先打開系統(tǒng)服務器電腦。②在進行提取前，確認單檢載架，提取載架，磁力條放置在相應軌道上，與卡槽接軌。③在匯集前需觀察加樣尖是否足量，擺放位置是否準確。匯集后再觀察是否足量并及時補充。加樣尖載版無損壞、并卡牢、無斷裂，300 μL和1 000 μL的加樣尖數(shù)量及位置不要輸錯。④匯集前深孔板、污液槽和金屬擋板已安裝好、位置正確（污液槽未錯位、未平放、忘放、深孔板未放反）。⑤實驗每次開始前，核對標本數(shù)量、匯集管數(shù)量，單檢的數(shù)量，實際數(shù)量與電腦中輸入數(shù)量要符合。⑥在進行提取實驗前，先觀察是否匯集管加樣足量，未有漏加并推動匯集的載架與卡槽接軌。⑦在加入單檢標本、陰性對照、陽性對照，質(zhì)控品后，觀察是否加樣足量，待加入裂解液后再次觀察是否加樣足量。⑧不同檢測項目的反應液要按順序擺放，PCR反應板放入時與底座對齊、位置正確，并觀察深孔板中是否有磁珠。⑨封板前觀察PCR反應板是否有殘留的磁珠或加樣量不足。⑩把PCR反應板放入擴增儀前確認放置的方向正確。?ABI750擴增儀在使用前需開機預熱，使用后要及時關(guān)機。?接收編號為當年的4位數(shù)字，同一批實驗中，所有文件的接收編號須一致，加做實驗時，末尾順應加“01”“02”。?實驗過程中時刻保持防污染意識，勤換手套，至少15 min觀察1次儀器運行狀態(tài)，保持確保儀器沒有因報錯而停止運行。?當實驗完成后，選中所有擴增曲線及標本孔，再發(fā)出報告。

6 防污染

（1）預防為主，嚴格分區(qū)，特定操作，專區(qū)專用。（2）每天觀察3個區(qū)域的溫度、濕度、壓力等是否在正常范圍內(nèi)。（3）嚴格執(zhí)行實驗室分區(qū)，不同實驗區(qū)域的可移動物品應有清晰的區(qū)域標識，以防混用。（4）每月實施暴露表面有無核酸擴增產(chǎn)物污染的監(jiān)測。（5）實驗室人員和物品的工作流向應為：試劑制備區(qū)、樣本制備區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)，為單向工作流向，不得逆向流動。（6）實驗過程中，如處理標本、對照品，及手套被污染時，應及時更換手套，避免和減少在已開帽的標本、試劑和耗材上空區(qū)域說話和活動。（7）廢液和醫(yī)療垃圾應及時清離實驗室，保持臺面、地面的清潔，紫外燈照射1 h以上，實驗室要及時通風，必要時進行酒精噴霧沉降。（8）處理陽性標本、陽性對照品和質(zhì)控品時要小心處理，防止崩濺，及時核對好標簽，勤換手套，并注意避免加樣槍和掌上離心機的污染。（9）非該實驗室工作人員因工作需要，經(jīng)允許方可進入實驗室，有該實驗室人員全程陪同并做好個人防護。（10）封板前應換新的手套，避免對PCR反應板說話，整個過程盡量不要接觸封板膜PCR反應板表面，保證每個孔都封閉好，避免污染。（11）定期進行環(huán)境監(jiān)控，以判斷實驗時是否存在污染，清潔消毒效果是否良好，預防污染的發(fā)生及假陽性結(jié)果的產(chǎn)生。（12）核酸實驗室污染時的糾正措施。①試劑污染：更換新的試劑重新檢測評估。②標本污染：重新采樣進行檢測，評估標本前的處理環(huán)節(jié)。③設(shè)備污染：設(shè)備整體消毒清潔或維護。④產(chǎn)物污染：全面清潔消毒實驗室，儀器設(shè)備所有與實驗有關(guān)物品。

7 討論

2016年我國施行全國性覆蓋核酸檢測的血液篩查模式[3]。但由于核酸檢測技術(shù)對設(shè)備、實驗室條環(huán)境條件、操作人員技術(shù)和實驗室管理等要求較高，而我國各血站的能力水平差異較大，若在檢測過程中對質(zhì)量控制不當，容易出現(xiàn)假陽性和假陰性等情況，甚至發(fā)生實驗室污染等問題。而通過該文探索，基本建立了與國內(nèi)先進水平相接軌的血站核酸檢測實驗室質(zhì)量控制體系，建設(shè)了一個規(guī)范化的核酸檢測實驗室供血站同仁參考和發(fā)展。

[1]李金明.實時熒光PCR技術(shù)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社, 2012:135-162.

[2]李金明.我國血站核酸檢測及質(zhì)量管理的現(xiàn)狀與展望[J].中國輸血雜志,2012,25(10):933-934.

[3]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.全面推進血站核酸檢測工作實施方案(2013—2015年)[S].2013.

Quality Control of Kehua Nucleic Acid Blood Screening System

ZHAO Yu,WANG Yan
Jilin Red Cross Blood Center,Jilin,Jilin Province,132001 China

ObjectiveTo ensure the clinical medication safety and improve the blood test level.MethodsThe key points of quality control of Kehua Nucleic acid blood screening system were summarized and analyzed.ResultsThe human errors were greatly reduced,the test cost was saved and the blood quality was ensured.ConclusionThe promotion of quality control of Kehua Nucleic acid blood screening system can make the blood test management advanced and economic.

Blood screening;Nucleic acid test;Quality control

R446

A

1672-5654（2017）01（c）-0049-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.03.049

2016-10-24）

趙宇（1982.12-），女，吉林長春人，研究生，主管檢驗技師，研究方向：生物化學與分子生物學，E-mail:175961919 @qq.com。