犬新型病毒性呼吸道疾病的研究進(jìn)展

王文佳，王一斐，常艷，蘭亞莉，師志海

(1．河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院制藥工程學(xué)院，河南鄭州450046; 2．河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，河南鄭州450008)

犬新型病毒性呼吸道疾病的研究進(jìn)展

王文佳1，王一斐2，常艷2，蘭亞莉2，師志海2

(1．河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院制藥工程學(xué)院，河南鄭州450046; 2．河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，河南鄭州450008)

犬傳染性呼吸道疾病(CIRD)，是一種由多種致病因子引起的復(fù)雜性傳染病，癥狀包括咳嗽、鼻分泌物和噴嚏等。一直以來，犬副流感病毒、犬II型腺病毒、犬I型皰疹病毒，被認(rèn)為是CIRD的主要病毒性病原體，且往往并發(fā)，或伴發(fā)支氣管敗血波氏桿菌感染。雖有疫苗可對這些病原體提供保護(hù)作用，但在已接種的犬群中仍會暴發(fā)呼吸道疾病，則提示CIRD還有尚未知曉的病原體。

近年來，陸續(xù)報(bào)道的CIRD相關(guān)的新型病原體，主要包括犬流感病毒(CIV)、犬呼吸道冠狀病毒(CRCoV)、犬肺病毒(CnPnV)、犬冠狀病毒泛熱帶變異株等。本文從病原學(xué)、發(fā)病機(jī)理和流行病學(xué)、臨床癥狀、診斷等方面進(jìn)行簡要概述，旨在為疾病的早期診斷、有效防控提供參考。

1 犬流感病毒

1．1 病原學(xué)2004年在美國佛羅里達(dá)州的靈緹犬中首次檢測到CIV。遺傳進(jìn)化特性顯示，該病毒的8個(gè)基因片段均與H3N8馬流感病毒的基因片段親緣關(guān)系最密切?；仡櫺匝鍖W(xué)調(diào)查表明，該病毒可能在1999—2000年就由馬直接傳播給犬的。隨后，世界各地陸續(xù)出現(xiàn)H5N1、H3N2、H1N1、H5N2、H3N1、H9N2和H6N1［1］流感病毒感染犬的報(bào)道。

1．2 發(fā)病機(jī)理和流行病學(xué)該病主要發(fā)生于群居犬只，無年齡差異。2004年，從1只因食入鴨肉而引起嚴(yán)重呼吸道疾病并死亡的患犬上分離到H5N1禽流感病毒。2009年，中國和美國出現(xiàn)H1N1流感病毒感染犬的散在病例，且在意大利檢測到血清陽性犬只［2］。多種流感病毒在犬只中同時(shí)存在，禽源H3N2、馬源H3N8、H1N1以及由流行的H1N1和H3N2重組的新型H3N1流感病毒均可感染犬。其中，禽源H3N2流感病毒在犬群中廣泛存在，亞洲和美洲均已檢測到。

1．3 臨床癥狀CIV感染的臨床癥狀，主要包括厭食、精神沉郁、咳嗽及眼鼻分泌物［3］。臨床癥狀惡化或發(fā)展為肺炎則往往意味著存在繼發(fā)性細(xì)菌感染。

試驗(yàn)性感染時(shí)，常表現(xiàn)出不同程度的上呼吸道癥狀，造成纖毛上皮損傷，而導(dǎo)致對其他致病原的易感性。然而，與其他犬呼吸道病毒感染相比，CIV感染更容易導(dǎo)致下呼吸道癥狀。大多數(shù)CIV感染犬常會出現(xiàn)氣管炎、支氣管炎和肺炎。

1．4 診斷目前，RT-PCR為診斷CIV感染的首選方法，并廣泛應(yīng)用。

2 犬呼吸道冠狀病毒

2．1 病原學(xué)CRCoV屬于冠狀病毒科，β-冠狀病毒屬，同牛冠狀病毒(BCoV)和人冠狀病毒OC43毒株親緣性最高。CRCoV與犬腸道冠狀病毒(CCoV)，一種α-冠狀病毒，在血清學(xué)和遺傳學(xué)方面截然不同。

2．2 發(fā)病機(jī)理CRCoV對犬呼吸道組織，尤其是上呼吸道具有極強(qiáng)的親嗜性。CRCoV可破壞犬上呼吸道黏液纖毛的清除功能，導(dǎo)致上呼吸道易發(fā)生繼發(fā)感染。CRCoV不僅直接對細(xì)胞造成損傷，且還可通過對宿主免疫系統(tǒng)的不明顯損傷而致?。?］。冠狀病毒通過多種方法來對抗宿主的抗病毒反應(yīng)，從而使病毒在宿主體內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和傳播。已經(jīng)證實(shí)，其他β-冠狀病毒可抑制抗病毒效應(yīng)基因的激活。體外研究表明，CRCoV在感染早期還能夠抑制促炎細(xì)胞因子和趨化因子的誘導(dǎo)。然而，CRCoV的這種抑制作用機(jī)理尚不清楚，也不清楚這些結(jié)果是否與體內(nèi)一致。

2．3 臨床癥狀由CRCoV引起的CIRD的早期階段，常表現(xiàn)輕微的呼吸道癥狀，包括鼻分泌物、噴嚏和干咳。

2．4 診斷僅僅依靠臨床癥狀來診斷CRCoV感染是不可能的，因?yàn)镃RCoV感染沒有示病指征。目前已有使用ELISAs和免疫熒光法檢測CRCoV和BCoV抗原的報(bào)道，并且將會被越來越廣泛地應(yīng)用。

3 犬肺炎病毒

3．1 病原學(xué)CnPnV最早于2010年在美國被發(fā)現(xiàn)。序列分析顯示，CnPnV與一些重要的人和動物呼吸道病原體的親緣性較高，包括人類和牛呼吸道合胞病毒，人類偏肺病毒，鳥類肺炎病毒等，并且與小鼠肺炎病毒(MPV)的親緣性最高［5］。2011年，CnPnV的全基因組序列測序完成，該病毒被確認(rèn)為屬于副黏病毒科，肺炎病毒亞科，肺炎病毒屬。

3．2 發(fā)病機(jī)理和流行病學(xué)CnPnV感染犬的發(fā)病機(jī)理尚不清楚，有待更深入研究。其他肺炎病毒，可通過接觸患者的呼吸道分泌物傳播，且氣道上皮細(xì)胞是感染CnPnV的主要靶器官。將CnPnV試驗(yàn)性接種BALB/c小鼠后，可有效地在肺臟中復(fù)制，且可在細(xì)支氣管上皮細(xì)胞中檢測到病毒抗原［6］。

盡管在犬呼吸道疾病中檢測出了CnPnV，但在疾病發(fā)生發(fā)展過程中CnPnV的致病性尚需更多地探索研究。廣泛開展血清學(xué)調(diào)查和監(jiān)測將成為必要，以確定該病在全球的流行情況。

該文闡述了在ASP.NET MVC的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)開發(fā)校園閑置商品交易平臺的開發(fā)思路以及大概的實(shí)現(xiàn)過程。該系統(tǒng)通過ASP.NET MVC、數(shù)據(jù)庫的設(shè)計(jì)以及整體架構(gòu)的設(shè)計(jì)，運(yùn)用C#語言、ORM技術(shù)(EF實(shí)體框架)以及Spring.NET的IOC思想，結(jié)合ElementUI和Vue.Js使得商品發(fā)布、商品分類瀏覽、商品搜索、商品詳情頁瀏覽以及商品的交易等預(yù)期功能都幾乎完整地實(shí)現(xiàn)了。最后該系統(tǒng)還需要在實(shí)際的使用中反復(fù)進(jìn)行測試，并且不斷地調(diào)整優(yōu)化。

3．3 診斷目前，該病惟一的診斷方法為首次發(fā)現(xiàn)該病毒時(shí)所采用的定量RT-PCR。診斷樣品包括鼻咽拭子、氣管沖洗液和支氣管肺泡灌洗液，以及尸體剖檢采集的肺臟和上呼吸道樣品。

4 犬冠狀病毒泛熱帶變異株

4．1 病原學(xué)CCoV歷來被認(rèn)為是一種低毒力的腸道致病原，?？蓮母篂a病犬及無臨床癥狀犬的糞便中檢測分離到。2005年，從犬病變的肺臟中檢測到CCoV。犬感染CCoV的臨床癥狀主要表現(xiàn)在胃腸道和神經(jīng)系統(tǒng)，但在病犬肺臟中檢測到CCoV，表明其在CIRD發(fā)病機(jī)制中有可能起到一定的作用。為與純粹的嗜腸道病毒相區(qū)別，將肺臟中新發(fā)現(xiàn)的病毒命名為犬冠狀病毒泛熱帶變異株。

與CRCoV(一種β-冠狀病毒)相比，CCoV屬于α-冠狀病毒屬，和貓冠狀病毒(FCoV)及豬傳染性胃腸炎病毒親緣關(guān)系非常密切。CCoV可分為與FCoV I型親緣關(guān)系密切的CCoV I型，和CCoV II型，II型又可進(jìn)一步分為IIa和IIb。

4．2 發(fā)病機(jī)理和流行病學(xué)試驗(yàn)性感染表明，2．5月齡犬比6月齡犬表現(xiàn)出更為嚴(yán)重的臨床癥狀。感染犬的淋巴細(xì)胞可減少到不足正常時(shí)的60%，且CD4+T淋巴細(xì)胞減少可持續(xù)至感染后30天。

該病在意大利首次暴發(fā)，后相繼在法國和比利時(shí)［7］、希臘［8］發(fā)生。臨床癥狀包括嘔吐、腹瀉和抽搐。采用RT-PCR在所有病犬肺臟中均檢測到CCoV，且肺臟存在亞臨床間質(zhì)性肺炎和肺泡水腫的病變。Takano等的研究顯示，在CCoV感染的犬中，CCoV-Ⅰ和CCoV-Ⅱ的感染率分別為88.9%和7．4%［9］。

4．3 臨床癥狀病犬常表現(xiàn)為嗜睡、嘔吐、出血性腹瀉和神經(jīng)癥狀，患犬于臨床癥狀出現(xiàn)數(shù)天后死亡。剖檢可見出血性腸炎、血性腹腔積液、肺臟多灶性實(shí)變、肝脾表面出血、淋巴結(jié)表面點(diǎn)狀出血、腎臟多灶性出血。

組織病理學(xué)檢查顯示，在支氣管、細(xì)支氣管和肺泡內(nèi)存在纖維蛋白膿性滲出物;支氣管和細(xì)支氣管上皮細(xì)胞變性;纖維素樣血管壞死;肺泡出血和水腫。腸外病變包括脾臟內(nèi)淋巴缺失和急性腎臟梗塞。

4．4 診斷通過應(yīng)用犬或貓細(xì)胞系從腸外組織中分離病毒，或應(yīng)用RT-PCR從腸外組織中檢測病毒，均為確診方法。其他診斷方法尚未得到證實(shí)。

5 小結(jié)

犬是人類重要的伴侶動物，其健康越來越受到人們的重視。CIRD是一種復(fù)雜的不斷變化的傳染病，也是臨床中最常見的疾病之一，該病的預(yù)防和控制倍受獸醫(yī)師和寵物主人的關(guān)注。隨著犬與人類的關(guān)系日益親密，更應(yīng)加強(qiáng)對CIRD的全面調(diào)查。獸醫(yī)要時(shí)刻警惕新型病毒感染犬的可能性，以及犬中的新型病毒通過人-犬的親密接觸而增加感染人的機(jī)會。因此，犬的新型病毒不僅影響犬的健康，也對公共衛(wèi)生安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅。

參考文獻(xiàn):

［1］Lin H T，Wang C H，Chueh L L，et al．Influenza A(H6N1)Virus in Dogs Taiwan［J］．Emerg Infect Dis，2015，21(12):2154-2157．

［2］Dundon W G，De Benedictis P，Viale E，et al．Serologic evidence of pandemic(H1N1)2009 infection in dogs，Italy［J］．Emerg Infect Dis，2010，16(12):2019-2021．

［3］Zeng X J，Lin Y，Zhao Y B，et al．Experimental infection of dogs with H3N2 canine influenza virus from China［J］．Epidemiol Infect，2013，141(12):2595-2603．

［4］Mitchell J A，Brooks H W，Szladovits B，et al．Tropism and pathological findings associated with canine respiratory coronavirus (CRCoV)［J］．Vet Microbiol，2013，162(2-4):582-594．

［5］Decaro N，Pinto P，Mari V，et al．Full-genome analysis of a canine pneumovirus causing acute respiratory disease in dogs，Italy［J］．PLoS One，2014，9(1):e85220．

［6］Percopo C M，Dubovi E J，Renshaw R W，et al．Canine pneumovirus replicates in mouse lung tissue and elicits inflammatory pathology［J］．Virology，2011，416(1-2):26-31．

［7］Zicola A，Jolly S，Mathijs E，et al．Fatal outbreaks in dogs associated with pantropic canine coronavirus in France and Belgium［J］．J Small Anim Pract，2012，53(5):297-300．

［8］Decaro N，Cordonnier N，Demeter Z，et al．European surveillance for pantropic canine coronavirus［J］．J Clin Microbiol，2013，51 (1):83-88．

［9］Takano T，Yamashita S，Murata-Ohkubo M，et al．Prevalence of canine coronavirus(CCoV)in dog in Japan:detection of CCoV RNA and retrospective serological analysis［J］．J Vet Med Sci，2016，78 (2):341-345．

S855．3

A文章標(biāo)號:0529-6005(2017)01-0070-02

2016-05-26

河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科研發(fā)展專項(xiàng)資金(20153606);河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院2016年度院自主創(chuàng)新基金項(xiàng)目(2016IC52)

王文佳(1987-)，女，實(shí)驗(yàn)師，碩士，主要從事動物病原學(xué)分離鑒定工作，E-mail:wangwenjia052@163．com

師志海，E-mail:szhvet@163．com