膠質(zhì)瘤中cyclinD1和p57/Kip2蛋白的表達(dá)及意義

王新偉

河南河南平頂山市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外二科 平頂山 437000

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膠質(zhì)瘤中cyclinD1和p57/Kip2蛋白的表達(dá)及意義

王新偉

河南河南平頂山市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外二科 平頂山 437000

目的 探討p57/Kip2 和細(xì)胞周期素cyclinD1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義。方法 收集54例膠質(zhì)瘤和 12例正常腦組織標(biāo)本，應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)膠質(zhì)瘤組織及其正常腦組織中p57/Kip2 和cyclinD1 蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 免疫組化方法結(jié)果顯示膠質(zhì)瘤組織中cyclinD1 蛋白水平顯著高于正常腦組織，而p57/Kip2的表達(dá)水平顯著低于正常腦組織，且Pearson相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)提示，膠質(zhì)瘤組織中p57/Kip2 和cyclinD1 蛋白的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論 p57/Kip2膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)顯著下調(diào)，cyclinD1 蛋白在膠質(zhì)瘤組織中異常高表達(dá)，且二者表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.782，P<0.01)。

膠質(zhì)瘤；p57/Kip2；cyclinD1

與其他腫瘤一樣，膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展與基因的異常表達(dá)密切相關(guān)。p57/Kip2基因具有抑制細(xì)胞增殖與細(xì)胞的、分化誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡以及與基因組印記有關(guān)[1]。cyclinD1表達(dá)異?？蓪?dǎo)致細(xì)胞異常增殖，目前已被證實(shí)與多種惡性腫瘤的發(fā)生及發(fā)展相關(guān)[2]。p57/Kip2 和cyclinD1 在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究報(bào)道不多。本研究通過檢測(cè)p57/Kip2 和cyclinD1在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)，探討p57/Kip2 和cyclinD1 在膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 資料與方法

1．1 研究對(duì)象 選擇2007-01—2013-10平頂山市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除的54例膠質(zhì)細(xì)胞瘤手術(shù)標(biāo)本(腫瘤組)，54例均有病理檢查支持，男31例，女23例；年齡32～77歲。入組病例均屬新診斷病例。病理診斷及分級(jí)參照WHO神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)(2007年版)：Ⅱ級(jí)28例。Ⅲ級(jí)18例，Ⅳ級(jí)8例。另選取12例經(jīng)手術(shù)切除的正常腦組織的患者(正常組)，男7例，女5例；年齡38～57歲。標(biāo)本切除后，置-80 ℃冰箱保存。

1．2 方法

1．2．1 HE染色：具體操作步驟：二甲苯15 min(分別操作2次)，無水乙醇5 min(分別操作2次)，95%乙醇 5 min(分別操作2次)，80%乙醇 5 min，水洗，蘇木精染色 5 min，流水沖洗1～3 s，1%鹽酸酒精分化1 s，0.5%伊紅液染色 5 min，水洗，80%乙醇5 min，95%乙醇5min(分別操作2次)，無水乙醇 5 min，95%乙醇5min，二甲苯5 min(分別操作2次)，中性樹膠封片。

1．2．2 免疫組織化學(xué)染色：所有組織切片進(jìn)行常規(guī)免疫組織化學(xué)染色，包括以下步驟：脫蠟，水化，抗原修復(fù)，封閉，PBS漂洗，一抗(兔IgG)孵育4 ℃過夜，TBS漂洗10 min，二抗孵育10～30 min，PBS漂洗，DAB顯色，蒸餾水漂洗，1%鹽酸酒精分化，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片，顯微鏡下觀察。

1．2．3 免疫組化結(jié)果判定：在光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片進(jìn)行觀察，閱片采取2位病理科醫(yī)師雙盲閱片，每張切片取6個(gè)高倍視野(×400)。對(duì)視野內(nèi)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)。陽性表達(dá)細(xì)胞的判斷標(biāo)準(zhǔn)：①完全沒有著色 0分，輕度淡黃色著色 1分，中度棕黃色著色 2分，3棕褐色著色 3分。判斷陽性范圍：0分<5%，1分5%～25%，2分26%～50%，3分51%～75%，4分>75%；二者相加分?jǐn)?shù)為判定結(jié)果：陰性(-)<2分，弱陽性(+)2～3分，中度陽性(++)4～5分，強(qiáng)陽性(+++)6～7分。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行處理。采用Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)比較配對(duì)設(shè)計(jì)的等級(jí)資料。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 2組p57/Kip2表達(dá)檢測(cè)結(jié)果比較 細(xì)胞染色定位于細(xì)胞核，胞核呈棕黃色為表達(dá)陽性。腦膠質(zhì)瘤組織中p57/Kip2總陽性表達(dá)率和強(qiáng)陽性表達(dá)率分別為14.8%(8/54)、0(0/54)；正常腦組織為 75%(9/12)、25%(3/12)。根據(jù)Wilcoxon秩檢驗(yàn)結(jié)果看出，腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中p57/Kip2的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組p57/Kip2蛋白表達(dá)情況比較 (n)

注：與正常組比較，#P<0.05

2．2 2組cyclinD1表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果比較 細(xì)胞染色定位于細(xì)胞核和胞漿，細(xì)胞呈彌漫棕黃色為表達(dá)陽性。腦膠質(zhì)瘤組織中cyclinD1總陽性表達(dá)率和強(qiáng)陽性表達(dá)率分別為72.2%(39/54)、42.6%(23/54)；正常腦組織為 16.7%(2/12)、0。根據(jù)Wilcoxon秩檢驗(yàn)結(jié)果看出，腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中cyclinD1的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組cyclinD1蛋白表達(dá)情況比較 (n)

注：與正常組比較，#P<0.05

2．3 p57/Kip2和cyclinD1蛋白在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)具有相關(guān)性 采用Pearson相關(guān)分析，結(jié)果提示，膠質(zhì)瘤組織中p57/Kip2 和cyclinD1 蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.782，P<0.01)。

3 討論

膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，預(yù)后差，準(zhǔn)確的病理診斷是臨床有效治療的前提。研究癌基因和抑癌基因在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況已成為探索膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的重要手段[3]。目前臨床上利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)某些相關(guān)因子輔助病理學(xué)診斷，為準(zhǔn)確地評(píng)估腫瘤的惡性程度提供客觀依據(jù)。

p57/Kip2 基因?qū)儆贗NK4家族。p57/Kip2是Matsuoka等[4]于1995年發(fā)現(xiàn)、定位于人染色體11p15.5、作用于細(xì)胞周期的的抑癌基因。許多腫瘤組織中存在p57m2基因變異率低而蛋白表達(dá)下降或失活率高的現(xiàn)象，這與p57/Kip2蛋白表達(dá)水平除取決于基因外還要受轉(zhuǎn)錄、翻譯、翻譯后修飾等多個(gè)環(huán)節(jié)的影響有關(guān)[5]。

在細(xì)胞周期的調(diào)控中cyclinD1蛋白扮演了重要的角色。在細(xì)胞周期過程中，cyclinD1的表達(dá)受到嚴(yán)格的調(diào)控：cyclinD1的合成始于細(xì)胞 G0 期，并在G1 期達(dá)高峰，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入 S期后cyclinD1開始降解，在隨后的細(xì)胞周期中持續(xù)低水平表達(dá)。cyclinD1的異常表達(dá)能加快細(xì)胞周期進(jìn)程，并促進(jìn)細(xì)胞增殖，最終導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[2]。

Cyclin、CDK和CKI共同控制真核細(xì)胞周期。CDK是細(xì)胞周期調(diào)控的核心裝置，激發(fā)G1～S期、G2～M期的轉(zhuǎn)換。Cyclin是CDK的正性調(diào)控因子，CKI是CDK的負(fù)性調(diào)控因子，p57/Kip2屬于CKI家族。本研究發(fā)現(xiàn)，p57/Kip2在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平顯著下調(diào)，cyclinD1 在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平顯著上調(diào)，提示二者在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中起了相反的作用。

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[3] 劉承基．細(xì)胞分子神經(jīng)外科-神經(jīng)外科的新領(lǐng)域[J]．中華神經(jīng)外科雜志，2004，20(1)：1-5．

[4] Matsuoka S，Edwards MC，Bal C，et al．p57/Kip2 a structurally distinct member of the p21ClPl CDK inhibitor family，is a candidate tumor suppressor gene[J]．Genes Dev，1995，9(6)：650-662．

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(收稿2016-02-10)

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