不同浸泡時(shí)間對(duì)大柴胡湯煎煮有效成分溶出量和得膏率的考查

劉 瑩，鄒愛英

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193； 2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津 300150)

不同浸泡時(shí)間對(duì)大柴胡湯煎煮有效成分溶出量和得膏率的考查

劉 瑩1，2，鄒愛英2*

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193； 2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津 300150)

目的：通過(guò)研究浸泡與否及浸泡時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)大柴胡湯有效成分浸出率和得膏率的影響，為醫(yī)院代煎湯藥的浸泡操作標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化提供數(shù)據(jù)參考，以保證醫(yī)院湯劑的質(zhì)量和臨床療效。方法：將大柴胡湯分為五組，分別是未浸泡、浸泡20 min、浸泡40 min、浸泡60 min和浸泡120 min，為保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，每組再設(shè)計(jì)三組平行試驗(yàn)。使用醫(yī)院煎藥室專用煎藥機(jī)提取藥液，通過(guò)得膏率和方劑中代表性成分芍藥苷含量?jī)身?xiàng)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果：得出大柴胡湯不同的浸泡時(shí)間所得干膏重量和代表性成分芍藥苷的含量。結(jié)論：通過(guò)單因素方差分析方法，分析得膏率和代表性成分芍藥苷的含量數(shù)據(jù)，表明芍藥苷含量在浸泡20、40和60 min與不浸泡相比沒(méi)有顯著性差異，浸泡120 min與不浸泡相比有顯著性差異。得膏率在不同浸泡時(shí)間沒(méi)有顯著性差異。

浸泡時(shí)間，煎藥機(jī)，芍藥苷，有效成分，得膏率

多數(shù)中藥飲片為動(dòng)植物干品，有一定的體積和厚度，煎煮前冷水浸泡可以使藥材的表面濕潤(rùn)、變軟、植物細(xì)胞膨脹，使藥物有效成分部分溶出，因此中藥煎煮前的浸泡對(duì)中藥有效成分溶出有非常重要的意義[1-5]。大柴胡湯出自《金匱要略》，由柴胡、黃芩、芍藥、半夏、生姜、枳實(shí)、大棗和大黃組成。具有和解少陽(yáng)、內(nèi)瀉熱結(jié)等功效，用于治療急、慢性膽囊炎，臨床使用較多，因此，本文通過(guò)考查浸泡時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)大柴胡湯方劑中有效成分芍藥苷含量與得膏率的影響，為浸泡操作的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化提供完整的數(shù)據(jù)參考，以保證醫(yī)院中藥湯劑的質(zhì)量和臨床療效。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(紫外可見光檢測(cè)器)(美國(guó) Agilent)；微壓循環(huán)中藥煎藥機(jī)(北京東華原醫(yī)療設(shè)備有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(天津市華儀盛達(dá)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；電子天平FA2204B(上海佑科儀器儀表有限公司)；分析天平XA205DU(梅特勒-托利多國(guó)際股份有限公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市華北實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；循環(huán)水式真空泵SHB-ⅢAB(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；乙腈(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)為色譜純；甲醇(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)、磷酸(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)均為分析純；純凈水(娃哈哈有限公司)；芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110736-201438)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(15∶85)；流速：1.0 ml/min；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm。理論塔板數(shù)以芍藥苷計(jì)不低于2 500。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品0.012 03 g于25 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到濃度為481.2 μg/ml的對(duì)照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 大柴胡湯處方：柴胡15 g，黃芩9 g，芍藥9 g，清半夏9 g，枳實(shí)9 g，大黃6 g，生姜15 g，大棗15 g。按14倍處方量精密稱取藥材共15付，取5付為一組，平行試驗(yàn)三組，將每付藥材包裹于煎藥機(jī)專用布袋中，封口，裝入煎藥機(jī)中，加入3 500 ml蒸餾水，使藥材浸沒(méi)，分別浸泡0、20、40、60和120 min，采用加壓的方法進(jìn)行煎煮，一煎25 min、二煎15 min，一煎加水量為3 500 ml、二煎加水量為2 500 ml，煎煮好藥液后擠壓，取出并稱量體積。精密量取10 ml的藥液，用甲醇定容至25 ml量瓶中，搖勻。以微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 稱取缺白芍的處方藥材，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備陰性樣品溶液。分別精蜜吸取對(duì)照品、供試品和陰性樣品溶液注入液相色譜儀，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，色譜圖見圖1。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取1、2、3、4和5 ml的對(duì)照品貯備液至5 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度線，配制成濃度為96.24、192.48、288.72、384.96和481.2 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=13.153X-173.77(r=0.999)。結(jié)果芍藥苷在96.24～481.2 μg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

1.芍藥苷

2.4 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件重復(fù)連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄HPLC色譜圖，測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD為0.26%，表明儀器的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8和12 h按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件依次進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD為0.42%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法平行做6份樣品，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件依次進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD為1.58%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密量取供試品溶液10 ml,9份，分別精密加入高、中、低3個(gè)水平的芍藥苷對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件依次進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.59%，RSD為1.95%。見表 1。

2.8 樣品測(cè)定 取大柴胡湯浸泡0、20、40、60和120 min五種供試品溶液，三組平行溶液，依照“2.1”項(xiàng)下色譜條件依次進(jìn)樣測(cè)定，取平均值，結(jié)果見表2，通過(guò)單因素方差分析發(fā)現(xiàn)浸泡20、40和60 min與不浸泡相比沒(méi)有顯著性差異，浸泡120 min與不浸泡相比有顯著性差異(P<0.05)。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 得膏率的測(cè)定 精密量取50 ml的藥液上清液，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于烘箱中105 ℃干燥3 h，置于干燥器中冷卻0.5 h，迅速稱量，即可得干浸膏重量，計(jì)算得膏率，取平均值，結(jié)果見表3，通過(guò)單因素方差分析發(fā)現(xiàn)浸泡20、40、60和120 min與不浸泡相比沒(méi)有顯著性差異。

表2 不同浸泡時(shí)間大柴胡湯中芍藥苷含量±s)

注：與不浸泡相比*P<0.05

表3 不同浸泡時(shí)間大柴胡湯得膏率±s)

3 討論

目前隨著自動(dòng)煎藥機(jī)的廣泛使用，煎煮環(huán)節(jié)基本實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化，而浸泡是醫(yī)院和藥店煎煮中藥出現(xiàn)問(wèn)題集中的環(huán)節(jié)，操作隨意性強(qiáng)，煎煮前藥物不浸泡或浸泡時(shí)間不足導(dǎo)致藥材煎不透、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)引起藥物有效成分酶解或藥品霉敗的問(wèn)題應(yīng)引起大家的注意。

本次試驗(yàn)采用煎藥機(jī)加壓提取藥液，優(yōu)勢(shì)很多，可以更好地模擬醫(yī)院或藥店給病人代煎中藥的過(guò)程，在煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)、加水量等一致的情況下，對(duì)比不同浸泡時(shí)間下方劑代表性成分含量及出膏率，能更直觀地觀察到其浸泡時(shí)間對(duì)煎藥質(zhì)量的影響。對(duì)于芍藥苷含量和得膏率的影響因素有以下幾點(diǎn)：①加水量較多，溶出達(dá)到了一種飽和的狀態(tài)，從而導(dǎo)致不同浸泡時(shí)間得膏率沒(méi)有顯著差異。②在加熱過(guò)程中，由于室內(nèi)溫度變化，加熱到沸點(diǎn)的時(shí)間也會(huì)有不同變化，記錄數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)有2～5 min的差異，在達(dá)到沸點(diǎn)后，溫度有時(shí)可以直接升到120 ℃，在壓強(qiáng)增加的情況下溫度升高，可能對(duì)芍藥苷的含量和得膏率有一定影響。③高壓環(huán)境能在一定程度上促進(jìn)藥材成分的浸出率。藥材浸泡的原理是水分子從藥材的表面向內(nèi)部滲透，產(chǎn)生一定的滲透壓，由于藥材的固體結(jié)構(gòu)，內(nèi)外壓強(qiáng)差基本保持恒定。當(dāng)外界壓力增加時(shí)，造成更懸殊的壓強(qiáng)差，為了保持穩(wěn)定的壓差，就要加速水分子向藥材內(nèi)部的滲透作用，進(jìn)而加速了藥材內(nèi)部有效成分的溶出。每組平行試驗(yàn)在煎煮過(guò)程中壓強(qiáng)并不完全一致，通常在15到20個(gè)大氣壓之間，這其中的差異也是影響結(jié)果的原因之一。

1 歐陽(yáng)榮,彭懿,劉紹貴,等.四種中藥的直火單煎與機(jī)煎單煎液的質(zhì)量對(duì)比檢測(cè)[J].中國(guó)藥業(yè),2001,10(3):48-49

2 蒲維婭,萬(wàn)偉中.不同煎煮工藝對(duì)復(fù)方白芍湯質(zhì)量的影響[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2009,30(8):53-54

3 董繼先,白路.中藥自動(dòng)煎煮及其無(wú)菌包裝機(jī)的研究[J].輕工機(jī)械,2004,(4):97-100

4 王亞紅,張瑞芳,王稚哲.影響中藥復(fù)方湯劑藥效的因素及中藥復(fù)方湯劑發(fā)展前景[J].藥學(xué)服務(wù)與研究,2004,4(1):77-79

5 回瑞華,刁全平,侯冬巖,等.浸泡時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取作用的影響研究[J] .鞍山師范學(xué)院學(xué)報(bào),2015,17(2):41-44

2016-06-24

天津市中醫(yī)藥管理局中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合科研專項(xiàng)課題(No.13105)

R944

A

1006-5687(2016)05-0011-03

*通訊作者：鄒愛英，E-mail：zy2fyxb@163.com。