抗豬流行性腹瀉中藥復(fù)方制劑的急性毒性試驗(yàn)

徐國銀洪偉鳴談為忠楊利慧

（1.江蘇省蘇州市吳中區(qū)金庭動(dòng)物防疫站，江蘇蘇州 215111；2.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇泰州 225300）

抗豬流行性腹瀉中藥復(fù)方制劑的急性毒性試驗(yàn)

徐國銀1洪偉鳴2談為忠1楊利慧1

（1.江蘇省蘇州市吳中區(qū)金庭動(dòng)物防疫站，江蘇蘇州 215111；2.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇泰州 225300）

為觀察一種抗豬流行性腹瀉的中藥復(fù)方制劑對(duì)小鼠的安全性。根據(jù)《獸藥試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范匯編》的要求選用小白鼠進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)研究，采用灌胃法進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明該復(fù)方制劑對(duì)小鼠沒有毒性作用。

豬流行性腹瀉 中藥復(fù)方制劑 小鼠 急性毒性

豬流行性腹瀉（PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的急性、接觸性、高度傳染性的一種消化道疾病，是危害養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)最重要的傳染病之一。該病臨床主要癥狀表現(xiàn)為急性腸炎以及嘔吐、水樣腹瀉和脫水。PED的波及范圍甚廣，在全球均有病例報(bào)道。并且PED發(fā)病率高，各種年齡的豬都能感染發(fā)病，7日齡以下仔豬感染死亡率可高達(dá)80%～100%[1]。PED的頻發(fā)給我國養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

由于PEDV具有高度的變異性，給臨床治療帶來了很多困難。目前，市面上預(yù)防PED主要是依靠PED弱毒苗和滅活苗。治療PEDV的藥物以西藥為主，雖可緩解病情和降低死亡率，但極易引起致病病毒變異而導(dǎo)致產(chǎn)生耐藥性，并存在動(dòng)物體內(nèi)藥物殘留等隱患[3]。因此，開展抗PEDV藥物的研發(fā)對(duì)控制豬流行性腹瀉病、促進(jìn)養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展有著十分重要的意義。隨著人們對(duì)綠色畜產(chǎn)品的需求度越來越高，中草藥作為化學(xué)藥物的替代品用于防治畜禽疾病愈發(fā)得到大家的重視。本研究所用藥物為江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研制的一種用于防治豬流行性腹瀉病的純中藥復(fù)方制劑，為全面評(píng)價(jià)其安全性和為臨床安全科學(xué)用藥提供依據(jù)，根據(jù)農(nóng)業(yè)部《獸藥試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范匯編》的要求，進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)研究。同時(shí)，也為后續(xù)深入探討該復(fù)方制劑的藥理作用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康清潔級(jí)昆明系小白鼠50只，雌雄各半，體重20±2g，購自江蘇省揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心，預(yù)飼3d后開展試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)藥物

抗豬流行性腹瀉的中藥復(fù)方制劑由黃連、白頭翁等10味中藥精制而成，濃縮至1ml藥液相當(dāng)于1g藥材。由江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自行研制。

1.3 試驗(yàn)方法

將上述50只精神狀態(tài)良好的小白鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌雄各半，其中，第Ⅰ～Ⅳ組為試驗(yàn)組，第Ⅴ組為空白對(duì)照組，正式灌胃給藥前禁食12h，不禁水。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的劑量，分別按0.01、0.02、0.03、0.04ml/g·BW等四個(gè)不同劑量對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行灌胃。其中，空白對(duì)照組按0.04ml/g·BW灌服生理鹽水。采用一次劑量直接灌入，灌胃完成后每天注意觀察小鼠的精神狀況、采食飲水情況和死亡情況，并及時(shí)如實(shí)記錄。灌胃7d后統(tǒng)一剖檢存活小鼠，觀察主要臟器是否存在病變及其他異常[4-5]。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)一次劑量直接灌服不同濃度的藥物后，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均未見死亡。低劑量組灌胃后小鼠的采食飲水與精神狀態(tài)均正常；高劑量組灌胃后小鼠經(jīng)短暫休息與調(diào)整，均能較快地恢復(fù)正?；顒?dòng)，次日觀察采食量和精神狀態(tài)均顯正常，整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)未見小鼠出現(xiàn)明顯的中毒癥狀。第7d時(shí)剖檢存活小鼠，觀察主要臟器均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見的明顯病變（結(jié)果詳見表1）。

3 討論

（1）灌胃劑量達(dá)到高劑量時(shí)易導(dǎo)致小鼠的胃腸道功能發(fā)生紊亂，故而小鼠易表現(xiàn)出采食量下降和精神狀態(tài)低迷等現(xiàn)象。伴隨著時(shí)間推移，上述情況逐漸轉(zhuǎn)好，并在次日后可恢復(fù)正常。

（2）剖檢存活小鼠后未見心、肝、脾、肺等主要臟器出現(xiàn)肉眼可見的病變，由此可證明短期內(nèi)該復(fù)方制劑對(duì)小鼠是安全的。

（3）急性毒性試驗(yàn)是臨床評(píng)價(jià)藥物安全性的一項(xiàng)重要指標(biāo)，本試驗(yàn)通過經(jīng)口灌胃給藥的途徑觀察了該復(fù)方制劑的急性毒性。灌胃的最高劑量達(dá)到了0.04ml/g·BW，試驗(yàn)結(jié)果表明未發(fā)現(xiàn)對(duì)小鼠造成任何可見的毒性反應(yīng)。

（4）根據(jù)農(nóng)業(yè)部《獸藥試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范匯編》中結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)判定為無毒[4]。因此可認(rèn)為臨床上使用該復(fù)方制劑治療豬流行性腹瀉病是安全的。

[1]高君愷，劉浩飛，楊倩.豬流行性腹瀉病毒的研究進(jìn)展[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，37（1）：1-5.

[2]Chen J F，Wang C B，Shi H Y，etal.Molecular epidemiology of porcine epidemic diarrhea virus in China[J].Arch Virol，2010，（155）：1471-1476.

[3]李彬，劉浩飛，孫冰，等.豬流行性腹瀉病毒Taq Man熒光定量PCR方法的建立與應(yīng)用[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2014，30（1）：125-129.

[4]洪偉鳴，左偉勇，郁杰，等.雞支康口服液的急性毒性試驗(yàn)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（7）：218.

[5]郁杰，葛竹興，邢曉玲，等.仔豬痢清口服液的急性毒性實(shí)驗(yàn)研究[J].中國獸藥雜志，2009，43（3）：29-30.