肉羊棘球蚴病檢測技術(shù)

卓 瑪

（青海省海南州同德縣河北鄉(xiāng)獸醫(yī)站，青海同德 813299）

肉羊棘球蚴病檢測技術(shù)

卓 瑪

（青海省海南州同德縣河北鄉(xiāng)獸醫(yī)站，青海同德 813299）

文章以“肉羊棘球蚴病檢測配套技術(shù)”為主要研究對象，展開深入、細致的研究和分析，希望能為進一步了解檢測技術(shù)，為后續(xù)做好疾病的綜合防治提供一定的依據(jù)和參考。

肉羊 棘球蚴病檢測 配套技術(shù) 應(yīng)用

1 引言

要想真正做好棘球蚴病防治，就需要精準(zhǔn)的檢測。為此，我們一定要在立足當(dāng)?shù)貙嶋H條件的基礎(chǔ)上，盡快建立并不斷完善關(guān)于棘球蚴病中間宿主和終末宿主的檢測體系，為后續(xù)的治療防治奠定堅實的基礎(chǔ)。

2 關(guān)于肉羊棘球蚴病檢測配套技術(shù)應(yīng)用的研究與分析

2.1 包蟲概述

包蟲是一種寄生蟲，危害極為嚴重，其主要來源就是動物的排泄物，呈現(xiàn)世界性范圍分布，尤其是畜牧業(yè)相對發(fā)達的地區(qū)和國家更是常見。在我國，棘球蚴病的高發(fā)流行區(qū)主要是在一些氣候寒冷、干旱少雨的牧區(qū)等，其中青海就是高發(fā)地區(qū)之一。由此可見，關(guān)于“家畜棘球蚴(包蟲)病流行情況調(diào)查”的研究與分析顯得尤為重要。

2.2 肉羊棘球蚴病檢測配套技術(shù)應(yīng)用分析

關(guān)于肉羊棘球蚴病檢測的配套技術(shù)，目前常用的就是犬糞包蟲抗原酶聯(lián)免疫吸附法聯(lián)合檢測的配套技術(shù)。特異性強、敏感度高，而且檢測也相對迅速，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于大批量樣品的檢測，對于疾病的凈化具有極為重要的作用和積極意義。

首先就是做好的前期的準(zhǔn)備，主要是完成血樣的采集和血清的制備以及全糞便的采集等工作。采血要注意劑量不能低于5毫升，全程都要在無菌化條件下進行操作，制備血清要在室溫條件下進行，經(jīng)過離心處理之后，將收集到的血清轉(zhuǎn)移到無菌的小離心管中，避免溶血現(xiàn)象。至于采集到的犬糞便，需要放置在4攝氏度條件下保存，是冷藏狀態(tài)，并非凍結(jié)狀態(tài)。

其次就是肉羊血清抗體的檢測

在檢測之前，要控制好實驗室的溫度，檢測的試劑在使用之前一定要做好均勻混合，沒有任何沉淀，檢測中用到的儀器主要有移液器，移液槍頭以及量筒、振蕩器等，需要科學(xué)操作，配置好洗滌液。

在操作方面，首先就是要進行家養(yǎng)，將96孔的預(yù)包被板去除，進行陽性對照孔的設(shè)置，對照孔需要兩個，每個對照孔進行陽性對照添加10ul，設(shè)置三個陰性對照孔，每個對照孔進行陰性對照添加10ul；設(shè)置一個空白的對照孔，不要進行任何樣品的添加；剩余的每個孔按照順序進行待檢測血清的添加，劑量都是10ul，做好記錄，進行標(biāo)記。

然后就是加中和抗原，除了空白之外，其余各孔都要進行添加，添加的是50ul的包蟲囊液中和抗原，必須垂直添加，在輕輕晃動20秒鐘以后，保證均勻混合。

第三步就是孵育，在恒溫箱中進行，時間為1個小時。

之后經(jīng)過洗板、加酶、孵育以及重復(fù)洗板、顯色和中止等操作之后，進行檢測，檢測的時候，以空白的孔調(diào)零，在450NM的濾光片下測量樣品和對照品的吸光度，從而做出判定。

再次關(guān)于犬糞的抗原檢測

犬糞進行低溫冷凍處理之后，取出1克的分班，加入1毫升的糞便處理液，攪拌均勻，待靜置十分鐘以后，進行離心處理，將上清液取出，進行檢驗。

在試劑的準(zhǔn)備方面，等到回溫室溫后，用前保證進行均勻混合，沒有沉淀后，用10倍的濃縮洗滌液用去離子水按照1:9的比例進行稀釋，一般要多配制200毫升以上。

將96孔的預(yù)包被板取出，設(shè)置陽性對照孔、陰性對照孔和空白對趙紅，分別進行樣品稀釋液的添加，添加劑量為100ul。剩余的檢測孔在添加樣品稀釋液50ul之后，再行添加50ul犬糞上清液，記錄好位置，做出標(biāo)記；然后在37攝氏度的溫度條件下進行半個小時的避光反應(yīng)，將孔內(nèi)的液體甩去。選用已經(jīng)進行稀釋的洗滌液，按照每個檢測孔350ul的劑量進行添加，進行4次洗滌之后，扣板拍干。

接下來，除了空白的檢測孔之外，每孔進行100ul的添加酶結(jié)合物添加，在37攝氏度條件下進行半個小時的孵育，將孔內(nèi)液體甩去，扣板拍干。再次進行洗滌之后，進行底物溶液和顯色劑的添加，再一次添加終止液，將反應(yīng)終止，進行結(jié)果的判定。在650NM的濾光片下進行吸光度A值測量。

預(yù)包被板上的陰性對照孔如果沒有顏色或者是淺黃色的話，陽性對照孔呈現(xiàn)黃色的話，就說明實驗結(jié)果是成立的，是有效的。

3 綜合評定與分析

對于肉羊血清包蟲抗體的檢測，抑制率不足45%的樣品，判定為銀杏，而且沒有感染；關(guān)于犬糞便的抗原檢測，樣本的A值＜閾值的樣品，判定為陰性，沒有感染的；實驗結(jié)果判定為陽性的肉羊血清樣品和犬糞便樣品需要使用相同的試劑進行重復(fù)性實驗，以此保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

肉羊棘球蚴病檢測技術(shù)的快速發(fā)展、成熟，使棘球蚴病得到了有效的控制。但犬類動物作為棘球蚴病終末宿主，其對環(huán)境的污染造成的棘球蚴病的復(fù)發(fā)也具有相當(dāng)大的風(fēng)險。經(jīng)過大量檢測應(yīng)用，現(xiàn)已證實包蟲抗體檢測技術(shù)與犬糞抗原檢測技術(shù)在棘球蚴病檢測工作中配套使用，不僅能夠準(zhǔn)確評估棘球蚴病流行狀況的消長規(guī)律，也可將每一只染病的肉羊和與肉羊密切接觸的犬精準(zhǔn)檢出。因此，棘球蚴病檢測配套技術(shù)的應(yīng)用對于當(dāng)前防控肉羊棘球蚴病具有重要意義。

[1]王仙琴,趙晨,吳若芬,劉英姿,李明,胡慶和.Dot-Elisa技術(shù)在檢測棘球蚴病中的應(yīng)用[J].寧夏醫(yī)學(xué)檢測,2015年12期

[2]洪凌仙,林宇光;多房棘球蚴在動物和人體內(nèi)的發(fā)育與組織病變考察[J];地方病通報;1987年02期

[3]陳耀輝,郭再宣;青海高原人畜共患寄生蟲病的分布及防治現(xiàn)狀[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1994年S1期

[4]張朝霞,溫浩,趙建梅,馮小輝,吳寧;細粒棘球蚴粗抗原的免疫純化方法及其在免疫診斷中的應(yīng)用[J];地方病通報;2000年01期

[5]葉爾江,柴君杰,魏明遠,焦偉,嚴蕾;斑點ELISA診斷棘球蚴病方法的改進研究[J];地方病通報;1990年01期

[6]李海燕,周增桓,李英杰,楊文天;應(yīng)用免疫金銀染色法檢測棘球蚴病和惡性瘧病人抗體的研究[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1991年01期